Онлайн доклады

Онлайн доклады

Глаукома. Избранные вопросы патогенеза, профилактики, диагностики, лечения. Всероссийская офтальмологическая конференция

Глаукома. Избранные вопросы патогенеза, профилактики, диагностики, лечения. Всероссийская офтальмологическая конференция

Терапия глаукомы. Практический подход и поиск решений в дискуссии

Терапия глаукомы. Практический подход и поиск решений в дискуссии

NEW ERA Хирургическое лечение глаукомы: НГСЭ

NEW ERA Хирургическое лечение глаукомы: НГСЭ

Сателлитные симпозиумы в рамках 22-го Всероссийского научно-практического конгресса «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках 22-го Всероссийского научно-практического конгресса «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ - 2022

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ - 2022

Современные достижения лазерной офтальмохирургии Всероссийский научный симпозиум

Современные достижения лазерной офтальмохирургии Всероссийский научный симпозиум

Юбилейная X научно-практическая конференция, посвященная 35-летию Чебоксарского филиала ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н. Федорова»

Юбилейная X научно-практическая конференция, посвященная 35-летию Чебоксарского филиала ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н. Федорова»

NEW ERA Особенности лечения отслойки сетчатки

NEW ERA Особенности лечения отслойки сетчатки

NEW ERA Оптическая когерентная томография. Критерии активности макулярной неоваскуляризации

NEW ERA Оптическая когерентная томография. Критерии активности макулярной неоваскуляризации

NEW ERA Хирургия осложнённой катаракты

NEW ERA Хирургия осложнённой катаракты

Шовная фиксация ИОЛ

Мастер класс

Шовная фиксация ИОЛ

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Восток - Запад 2022 Международная конференция по офтальмологии

Восток - Запад 2022 Международная конференция по офтальмологии

Целевые уровни ВГД в терапии глаукомы

Вебинар

Целевые уровни ВГД в терапии глаукомы

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции «Невские горизонты - 2022»

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции «Невские горизонты - 2022»

Новые технологии в офтальмологии 2022

Новые технологии в офтальмологии 2022

ОКТ: новые горизонты

Сателлитный симпозиум

ОКТ: новые горизонты

Превентивная интрасклеральная фланцевая фиксация ИОЛ при подвывихе хрусталика

Вебинар

Превентивная интрасклеральная фланцевая фиксация ИОЛ при подвывихе хрусталика

Лечение глаукомы: инновационный вектор - 2022. III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Лечение глаукомы: инновационный вектор - 2022. III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Вебинар компании «Rayner»

Вебинар компании «Rayner»

Цикл онлайн дискуссий компании «Акрихин» «О глаукоме и ВМД в прямом эфире»

Цикл онлайн дискуссий компании «Акрихин» «О глаукоме и ВМД в прямом эфире»

Алгоритм ведения пациентов с астенопией после кераторефракционных операций

Вебинар

Алгоритм ведения пациентов с астенопией после кераторефракционных операций

Cовременные технологии диагностики патологий заднего отдела глаза

Сателлитный симпозиум

Cовременные технологии диагностики патологий заднего отдела глаза

Вебинары компании  «Акрихин»

Вебинары компании «Акрихин»

Снижение концентрации «Бримонидина», как новое решение в терапии у пациентов с глаукомой

Вебинар

Снижение концентрации «Бримонидина», как новое решение в терапии у пациентов с глаукомой

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Актуальные вопросы офтальмологии: в фокусе – роговица

Вебинар

Актуальные вопросы офтальмологии: в фокусе – роговица

XIX Конгресс Российского глаукомного общества  «19+ Друзей Президента»

XIX Конгресс Российского глаукомного общества «19+ Друзей Президента»

Пироговский офтальмологический форум

Пироговский офтальмологический форум

Кератиты, язвы роговицы

Вебинар

Кератиты, язвы роговицы

Актуальные вопросы офтальмологии

Вебинар

Актуальные вопросы офтальмологии

Всероссийский консилиум. Периоперационное ведение пациентов с глаукомой

Сателлитный симпозиум

Всероссийский консилиум. Периоперационное ведение пациентов с глаукомой

Трансплантация роговично-протезного комплекса у пациента с васкуляризированным бельмом роговицы

Трансплантация роговично-протезного комплекса у пациента с васкуляризированным бельмом роговицы

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Глаукома. Избранные вопросы патогенеза, профилактики, диагностики, лечения. Всероссийская офтальмологическая конференция

Глаукома. Избранные вопросы патогенеза, профилактики, диагностики, лечения. Всероссийская офтальмологическая конференция

Терапия глаукомы. Практический подход и поиск решений в дискуссии

Терапия глаукомы. Практический подход и поиск решений в дискуссии

NEW ERA Хирургическое лечение глаукомы: НГСЭ

NEW ERA Хирургическое лечение глаукомы: НГСЭ

Сателлитные симпозиумы в рамках 22-го Всероссийского научно-практического конгресса «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках 22-го Всероссийского научно-практического конгресса «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ - 2022

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ - 2022

Современные достижения лазерной офтальмохирургии Всероссийский научный симпозиум

Современные достижения лазерной офтальмохирургии Всероссийский научный симпозиум

Юбилейная X научно-практическая конференция, посвященная 35-летию Чебоксарского филиала ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н. Федорова»

Юбилейная X научно-практическая конференция, посвященная 35-летию Чебоксарского филиала ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н. Федорова»

NEW ERA Особенности лечения отслойки сетчатки

NEW ERA Особенности лечения отслойки сетчатки

NEW ERA Оптическая когерентная томография. Критерии активности макулярной неоваскуляризации

NEW ERA Оптическая когерентная томография. Критерии активности макулярной неоваскуляризации

NEW ERA Хирургия осложнённой катаракты

NEW ERA Хирургия осложнённой катаракты

Шовная фиксация ИОЛ

Мастер класс

Шовная фиксация ИОЛ

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Все видео...

Сравнительные аспекты биологической активности проангиогенных пептидов регуляторов ангиогенеза VEGF и ?-FGF



ГУ «РОНЦ им. Блохина Н. Н. РАМН», ЦКБ РАН, ИБХ РАН, г. Москва
  
   Все современные антиангиогенные препараты, используемые в офтальмологии, направлены на блокирование фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF). Однако опыт показывает, что эти препараты оказывают неполноценный и кратковременный эффект. Одной из причин их низкой эффективности является недооценка роли избыточной продукции других проангиогенных пептидов.
  
  Цель — изучение сравнительной активности двух ключевых пептидов стимуляторов ангиогенеза: VEGF и фибробластного фактора роста — bFGF.
  
  Материал и методы. Проведен сравнительный анализ биологических эффектов in vitro и in vivo рекомбинантных пептидов VEGF165 и bFGF, предоставленных ИБХ РАН. Исследования выполнены на базе лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей НИИ ЭДиТО (доктор мед наук. наук, ведущий научный сотрудник Степанова Е . В)
  Определение сравнительного проангиогенного потенциала веществ in vitro проводили с использованием культуры эндотелиальных клеток (ЭК) мыши (SVEC-4-10). Использовали стандартные наборы тестов для оценки влияния исследуемых веществ на ключевые параметры ангиогенеза (bFGF- и V EGFзависимая пролиферация и миграция ЭК, образование капилляроподобных структур). Методы позволяли адекватно оценить влияние пептидов на этапы ангиогенеза и сопоставить их биологические эффекты, а также концентрации, необходимые для развития идентичного по амплитуде биологического эффекта.
  Клетки SVEC-4-10 высаживали в низкой плотности (6 т клеток/мл) в триплетах на 48-луночный планшет в среде, содержащей 10 % сыворотки FCS. Среда, антибиотки и препараты менялись раз в 3–4 дня. Рост клеток определялся модифицированным «митогенным методом по Crystal Violet».
  Клетки промывались PBS и фиксировались 1 % парафармальдегидом на PBS и окрашивались 0,5 % раствором Crystal Violet (Sigma Chemical Co) на этаноле. Краситель растворяли в этаноле и измеряли на спектрофотометре при 540–560 нм. Миграционная активность культивируемых ЭК мыши SVEC-4-10 анализировали модифицированным методом «раневой поверхности». Клетки (500 т/мл) высаживали в специальных камерах в 24-луночный планшет в среде ДMEM содержащей 10 % сыворотки FCS и 2 мМ глутамина, и инкубировали до образования монослоя. Затем камеры удалялись, лунки промывались раствором PBS. В течение 24 часов ЭК инкубировали в среде ДМЕМ, содержащей 2мМ глутамина. В качестве положительного контроля использовались ЭК, инкубировавшиеся в ДМЕМ с добавлением 10 % FCS. Клетки докрашивали реактивом Лейшмана. Результаты оценивали как процент мигрирующих клеток в опыте по отношению к контролю (клетки в среде ДМЕМ, содержащей 10 % эмбриональной сыворотки, 2 мМ глутамина).
  Образование трубочко-подобных структур ЭК SVEC-4-10 анализировали следующим образом.
  24-луночную плашку покрывали раствором Матригеля и инкубировали 20 минут при 37 °С до полимеризации. Затем клетки наносили в лунки, покрытые Матригелем, и инкубировали в СО2-инкубаторе в течение 4–5 часов. В качестве положительного контроля использовали ЭК, инкубировавшиеся в среде ДМЕМ без добавления препарата. Оценивали длину трубочек и количество контактов между трубочками.
  Метод имплантата Матригеля был выполнен по стандарту [Passaniti A., 1992]. Аликвоты (700 мл) Матригеля (BD Biosciences), содержащие гепарин 60 У. Е ./мл, VEGF165 (100 или 50 нг/мл) были приготовлены на льду. В качестве отрицательного контроля использовали введение Матригеля, содержащего гепарин 60 У. Е ./мл, положительного контроля — Матригель, с аналогичным содержанием гепарина и bFGF. Инъекцию Матригеля проводили подкожно, абдоминально мышам-самкам BDA. После инъекции Матригель быстро образовывал одиночный, плотный гелеобразный имплантат. Через 7 дней после введения Матригеля мышей выводили из эксперимента путем передозировки эфира. Имплантаты были удалены, фиксированы в 10 % нейтральном формалине и заключены в парафин для гистологического исследования. Гистологические исследования проводили, окрашивая имплантант гематоксилином и эозином.
  Проводили иммуногистохимические исследования срезов Матригеля с антителами против CD34.
  
  Результаты и обсуждение. Установлено, что оба проангиогенных пептида VEGF165 и b-FGF дозозависимо стимулировали пролиферацию ЭК SVEC4-10 (табл.). Однако биологический эффект bFGF был достоверно выше и проявлялся при меньшей концентрации пептида в среде для культивирования (р=0,001). Пятикратное повышение концентрации VEGF незначительно (123 %) повышало пролиферацию ЭК. Аналогичное увеличение содержания bFGF сопровождалось более значимым (180 %) биологическим эффектом стимуляции пролиферации ЭК.
  Для того, чтобы получить аналогичный биологический эффект (180 % стимуляцию) необходима концентрация VEGF165 примерно на уровне 7000 нг/мл.
  Оценка влияния VEGF165 и bFGF на миграцию ЭК SVEC-4-10 с помощью модифицированного метода «заживления раны» показала, что оба тестируемых пептида стимулировали миграцию ЭК.
  10 % FCS увеличивал миграцию клеток SVEC-4-10 на 145 %, добавление bFGF 50 нг/мл — на 139 %, а V EGF165 100 нг/мл — на 122 % по сравнению с отрицательным контролем. Таким образом, биологическая активность bFGF по стимуляции миграции ЭК в 3,5 раза выше, чем аналогический показатель VEGF. Для достижения сопоставимого эффекта bFGF необходимо добавить 400 нг/мл VEGF.
  Не обнаружено значимого влияния VEGF165 и bFGF на формирование трубочко-подобных структур в среде in vitro. Известно, что биологические эффекты многих факторов роста, включая пептидырегуляторы ангиогенеза, проявляются in vitro и не выявляются или выявляются в другой манере in vivo.
  В связи с этим, мы провели дополнительную серию экспериментов для проверки и сопоставления эффектов VEGF и bFGF in vivo. В частности, была выполнена индукция роста новых кровеносных сосудов в имплантате Матригеля in vivo. При введении Матригеля без стимуляторов ангиогенеза на гистологических срезах имплантата наблюдаются только единичные ЭК. VEGF165 и bFGF значимо увеличивали миграцию клеток и формирование кровеносных сосудов в имплантате Матригеля. VEGF165 (800 нг/мл) стимулировал миграцию ЭК в Матригель. Мигрировавшие ЭК обнаруживались не только по периферии, но и в центре. Хотя образование зрелых кровеносных сосудов было плохо выражено, в имплантанте наблюдали эритроциты. Более 50 % клеток окрашивались АТ к CD34. Добавление в Матригель bFGF (100 нг/мл) также стимулировало миграцию ЭК в центр. Формировалось значительное количество микрососудов, содержащих эритроциты (4–5 в поле зрения). Количество мигрирующих ЭК (CD34-положительных) превышало 80 %.
  
  Выводы. Результаты экспериментальных исследований доказывают, что биологическая активность bFGF по стимуляции пролиферации и миграции ЭК, образованию сосудов in vivo в 5–1,5-3,5 раза выше, чем аналогический показатель VEGF. Блокирование эффектов только VEGF не способно подавить ангиогенез в целом. Возможны обходные пути стимуляции.
  


Страница источника: 522

OAI-PMH ID: oai:eyepress.ru:article10085
Просмотров: 5753



Johnson & Johnson
Bausch + Lomb
Reper
NorthStar
ЭТП
Rayner
Senju
Фармстандарт
Гельтек
santen
Акрихин
Ziemer
Tradomed
Nanoptika
R-optics
Фокус
sentiss
nidek