Онлайн доклады

Онлайн доклады

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция с онлайн-трансляцией

Конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция с онлайн-трансляцией

Оренбургская конференция офтальмологов - 2020 XXXI Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Оренбургская конференция офтальмологов - 2020 XXXI Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Новые технологии в офтальмологии. VIII Всероссийская научно-практическая конференция посвященная дню рождения академика С.Н. Федорова

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. VIII Всероссийская научно-практическая конференция посвященная дню рождения академика С.Н. Федорова

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Международный вебинар по глаукоме в области медико-хирургического лечения

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Сателлитные симпозиумы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Онлайн семинар

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Онлайн семинар

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция с онлайн-трансляцией

Конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция с онлайн-трансляцией

Оренбургская конференция офтальмологов - 2020 XXXI Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Оренбургская конференция офтальмологов - 2020 XXXI Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Новые технологии в офтальмологии. VIII Всероссийская научно-практическая конференция посвященная дню рождения академика С.Н. Федорова

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. VIII Всероссийская научно-практическая конференция посвященная дню рождения академика С.Н. Федорова

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Международный вебинар по глаукоме в области медико-хирургического лечения

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Сателлитные симпозиумы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Онлайн семинар

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Онлайн семинар

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Все видео...
 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст
УДК:617.713

Методы консервации донорских роговиц и применение гомологичных клеточных пептидов (обзор литературы)


Актуальность проблемы

Проблема трупного тканевого донорства и трансплантации роговицы является одним из наиболее сложных и актуальных аспектов офтальмологии [1, 3, 5, 6, 8, 14, 21, 32, 35, 38].

Для прозрачного приживления сквозного трансплантата роговицы необходима максимальная сохранность жизнеспособности эндотелиальных клеток (ЭК), обеспечивающих нормальную гидратацию и прозрачность посредством транспортной и насосной функций [6, 35]. ЭК роговицы являются высокодифференцированными и относятся к нейроглии [2, 11, 12, 17, 30].

После сквозной трансплантации роговицы ЭК не способны к митотической регенерации, при их значительной потере в посттрансплантационном периоде возникает сначала функциональная декомпенсация роговицы, затем необратимое помутнение трансплантата [6, 35].

В этой связи сквозную трансплантацию роговицы принято называть искусством пересадки одного клеточного слоя [6].

Выкраивание и фиксация роговичного трансплантата при сквозной и задней послойной кератопластиках сопровождаются потерей ЭК, в связи с чем исходная ПЭК должна быть не менее 2800-3000 кл/мм² [38]. Однако уже на этапе консервации в ЭК трупных донорских роговиц возникает ряд морфо-функциональных перестроек, сопровождающихся десквамацией ЭК и снижением их жизнеспособности [28, 35].

В этой связи повышение жизнеспособности и стабилизация плотности ЭК трупных донорских роговиц на этапе их консервации является крайне важной и актуальной задачей [1].

Преимущества и недостатки традиционных методов консервации роговицы Гипотермическая консервация роговиц в жидких средах.

В 1974 г. E. McCarey и H.E. Kaufman предложили принципиально новый метод гипотермической консервации донорских роговиц для сквозной кератопластики, основанный на использовании питательной среды 199, высокомолекулярного декстрана, фосфатного буфера, индикатора рН и антибиотиков [37]. Было показано, что роговицы кроликов, консервированные в этой среде при +4°С, сохраняют свою жизнеспособность до 14 дней. Однако дальнейшими исследованиями D.S. Hull и соавт. было установлено, что консервация кроличьих роговиц в среде МакКери-Кауфмана уже на 2-3 сут. приводит к значительному отеку стромы, а к 7 сут. — к полной потере жизнеспособности ЭК и значительному снижению их плотности [29].

В 1985 г. H.E. Kaufman и соавт. предложили новый состав жидкой среды для консервации роговицы — К-Sol [33]. Морфологическими исследованиями была выявлена полная ультраструктурная сохранность ЭК трупных донорских роговиц до 10 сут. гипотермической консервации, при этом их функциональная активность и жизнеспособность к 3-4 сут. отсутствовали [20, 26].

Немногим позже разработанные в США среды Dexsol и Optisol, а в Европе — Eusol широко применяются в Глазных банках всего мира и также позволяют сохранять жизнеспособность и пороговую плотность ЭК при гипотермической консервации роговиц до 4 сут. [34, 39].

В 1990 г. впервые в России был предложен состав отечественной среды для консервации роговицы (пропись Борзенка-Мороз), отличающийся от выше перечисленных сред адекватным подбором аминокислотного состава, содержанием энергетически значимого субстрата — натрия ?-оксибутирата, оказывающим выраженное защитное действие на ЭК, обеспечивающим стабилизацию клеточных мембран, сохранность макроэргических соединений и стабильность ПЭК по крайней мере до 6 сут. [1]. В настоящее время среда Борзенка-Мороз применяется во всех Глазных банках и лабораториях консервации роговиц Российской Федерации.

Недостатки метода гипотермической консервации донорских тканей и органов в жидких средах всегда побуждали исследователей к поиску альтернативных гипотермии физических (нормотермических), биохимических и фармакологических методов защиты трансплантата [15].

Консервация роговиц методом органного культивирования D.J. Doughman и соавт. [24, 25] детально разработали, экспериментально доказали и предложили для клинического применения технику консервации донорских роговиц для сквозной кератопластики при +34°С до 33 сут., которую назвали методом органного культивирования. S. Sperling и соавт. [41] трансплантировали роговицы, консервированные этим методом, и получили обнадеживающие результаты. Однако W.M. Bourne и соавт. [21] позже установили, что в отдаленном посттрансплантационном периоде потеря ЭК роговиц, консервированных методом органного культивирования, была значительно выше, чем потеря ЭК роговиц, консервированных при гипотермии в жидких средах.

Тем не менее, в силу ряда неоспоримых достоинств метод органного культивирования был признан альтернативным гипотермической консервации донорских роговиц в жидких средах [21]. Основным достоинством этого метода является так называемая «Восьмидневная система профилактики контаминации», обеспечивающая скрининг потенциально контаминированного донорского материала и устранение риска развития посттрансплантационного эндофтальмита. В настоящее время в связи с финансовыми и значительными трудозатратами этот метод консервации донорских роговиц применяется только в некоторых Глазных банках Европы.

Криогенная консервация донорских роговиц В настоящее время консервация клеток и тканей в жидком азоте при -193°С широко применяется в биологии и некоторых областях медицины. Метод криоконсервации позволяет сохранять клетки и ткани в жизнеспособном состоянии практически бессрочно. К сожалению, попытки многих исследователей [16, 18, 32] детально разработать программу пошагового замораживания трупных донорских роговиц, подобрать оптимальные вне- и внутриклеточные протекторы и их концентрации для холодовой защиты ЭК с последующим хранением в жидком азоте пока не дали положительных результатов в клинике [23].

Прежде всего, это связано с образованием множественных отверстий в цитоплазматических мембранах ЭК и значительной их потерей после размораживания — 1133% [3, 4, 9].

В настоящее время метод криогенной консервации донорских роговиц находится на стадии поиска принципиально новых методологических подходов [22].

Пролонгирование витальных свойств эндотелиальных клеток донорских роговиц с помощью регуляторных пептидов В ряде работ была показана принципиальная возможность стимулировать миграцию ЭК, митотическую активность и синтез ДНК с помощью эпидермального фактора роста (EFG), фактора роста фибробластов (FGF), трансформирующего ростового фактора ? (TGF-?), тромбоцитарного фактора роста (PGF), инсулиноподобного фактора роста -1 (IGF-1), а также путем комбинации их с фетальной бычьей сывороткой, трансферином, гепарином, 3′,5′-циклическим монофосфатом, селеном [36, 43, 44, 45]. При этом наиболее выраженный эффект оказывали FGF и EFG. В 2009 г. Y.J. Shin с соавт. опубликовали результаты исследований о защитном действии Кластерина (полипептида, регулирующего апоптоз) на ЭК роговицы [40]. По их мнению, применение этого регуляторного белка предотвращает апоптоз клеток, вызванный окислительным стрессом.

Одним из ключевых свойств цитоплазматических регуляторных пептидов, определяющих их эффективность, является эффект «наведения» или органного тропизма, гомологичности [19]. При этом меченые радионуклидами регуляторные пептиды, введенные животным подкожно, кумулируются в тех тканях и органах, из которых они были выделены.

В основе реализации этого эффекта лежит органоспецифическая маркировка пептидов в процессе их синтеза в клетке. За то, куда именно будет распределён в клетке вновь синтезированный пептид, отвечает универсальная ZIP-система, обнаруженная во всех эукариотических клетках [19]. В процессе синтеза на рибосомах регуляторный пептид наделяется индивидуальным ZIP-кодом, своего рода почтовым индексом, благодаря которому белок, попав в системный кровоток или лимфу, находит своего адресата — гомологичную ткань или орган, в котором он был синтезирован. Специализированные рецепторы клетки считывают с пептида ZIP-код и определяют его дальнейшие действия в регуляции внутриклеточного гомеостаза и клеточного генома.

Практическая значимость ZIP-системы заключается ещё в том, что большинство регуляторных пептидов не имеют видовой специфичности: цитоплазматические пептиды, выделенные из тканей одного животного, кумулируются и регуляторно влияют на гомологичные ткани и органы другого животного и человека.

В целях восстановления и поддержания структуры и функции ЭК трупных донорских роговиц в процессе их консервации значительный интерес могут представлять фармакологические препараты на основе гомологичных клеточных пептидов, полученные из тканей глаза. К таким препаратам нового поколения относятся цитамины отечественного производства [7, 13] и тканевая панель препаратов NeyDIL импортного производства [10, 27]. К сожалению, отечественная фармакологическая промышленность не производит препаратов регуляторных пептидов с адресным действием к эндотелиальным клеткам роговицы. До настоящего времени единственным органотропным препаратом, полученным из регуляторных пептидов клеточной цитоплазмы эмбриональных роговых оболочек промышленных животных, является препарат NeyDIL Nr.37 «Cornea», который выпускается немецкой фирмой «VitOrgan» и имеющий Государственную регистрацию в Российской Федерации.

Препарат NeyDIL Nr.37 содержит регуляторные пептиды из цитоплазмы клеток фетальных и ювенильных роговиц животных, является основным регенераторным средством для роговицы, улучшающим процессы внутриклеточной репарации, диффузии, осмоса, стимулирующим метаболизм и восстанавливающим цитоархитектонику различных клеток роговицы [10, 42].

Проведенный анализ литературных источников позволяет предполагать высокую эффективность гипотермической консервации донорских роговиц с применением цитоплазматических регуляторных пептидов, которым в последнее время уделяется большое внимание как препаратам-ревитализаторам нового поколения.


Страница источника: 75

Просмотров: 1915