Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Фундаментальные аспекты патогенеза внутриглазной пролиферации


1Сибирский государственный медицинский университет Минздрава РФ

Синдром внутриглазной пролиферации представляет собой общий тип реакции тканей глаза в ответ на повреждение любой этиологии, характеризующийся неадекватным разрастанием фиброваскулярной ткани в полости глазного яблока и приводящий к нежелательным, а в большинстве случаев — к необратимым последствиям. Течение процесса обладает чертами хронического воспаления, центральной фигурой которого в зависимости от стадии являются мононуклеары и фибробласты. Морфофункциональные параметры клеток данных популяций в значительной степени зависят от влияния факторов микроокружения. Одним из локальных факторов, способных посредством функциональных изменений приводить к существенной перестройке архитектоники клеточных мембран, является, по нашему мнению, направленное движение жидкости в полости глазного яблока, создаваемое градиентом давления.

Цель — в эксперименте in vitro изучить влияние направленного движения жидкости на морфофункциональный статус клеток, обеспечивающих развитие макрофагальной и фибробластической фаз воспалительно-репаративной реакции.

Материал и методы
Разработано устройство — биореактор in vitro, — позволяющее моделировать движение питательной среды, сходное с движением жидкости в полости глазного яблока. Устройство представляет собой замкнутую систему с камерой, содержащей полупроницаемый фильтр. Система предварительно заполнялась питательной средой, содержащей 200,0 мл питательной среды ДМЕМ в модификации Iscove или RPMI 1640 и 4%-ный раствор гентамицина. Благодаря работе роликового насоса в биореакторе создавалось равномерное направленное движение питательной среды со скоростью 2,1-2,4 мм³/мин.
Выполнена серия экспериментов по культивированию клеток мононуклеарной и фибробластической популяций в различных условиях. В 1-й серии эксперимента объектом исследования служили аутологичные мононуклеары крови здоровых доноров-добровольцев, выделенные методом фракционирования на градиенте плотности. Полученные клетки доводили питательной средой до конечной концентрации 3?106 нуклеаров/мл и размещали на фильтре. Во 2-й серии объектом исследования была культура фибробластов легкого человека (ООО “Банк стволовых клеток“, Томск). Клетки свободны от посторонних вирусных и бактериальных агентов (сифилис, микоплазмы, хламидии и др.). Культуру фибробластов человека после 3-4 пассажей в концентрации 5·104 клеток/мл вводили в камеру и помещали на фильтр.
Первичную клеточную культуру инкубировали при постоянном движении питательной среды в течение 24 и 48 часов. В качестве контроля клетки культивировали на полупроницаемом фильтре, помещенном в чашку Петри с питательной средой, при строгом соблюдении температурного режима (37° С), содержания СО2 (5-7%) и уровня влажности (100%).

Результаты
При проточном культивировании (биореактор in vitro) мононуклеаров крови в получены следующие результаты. Через 24 часа от начала эксперимента в клетках отмечалась высокая активность α-нафтилацетатэстеразы, которая блокировалась фторидом натрия. Щелочная фосфатаза в культивируемых клетках не выявлялась. Спустя 48 часов в мононуклеарах отмечалось повышение активности α-нафтилацетатэстеразы по сравнению с исходными показателями и клетками, культивируемыми в стандартных условиях (pU±0,01). При проведении реакции с фторидом натрия на фильтре обнаруживались единичные элементы, в которых активность неспецифической эстеразы не подавлялась, а также выявлялась активность щелочной фосфатазы.
При культивировании мононуклеаров крови в стационарных условиях в клетках отмечалась умеренная активность α-нафтилацетатэстеразы, которая постепенно повышалась в процессе культивирования. Активность неспецифической эстеразы ингибировалась фторидом натрия. Щелочная фосфатаза в культивируемых клетках не выявлялась.
При проточном культивировании фибробластов были получены следующие результаты. Через 24 часа от начала эксперимента цитохимически в фибробластах, культивируемых в проточных условиях, отмечалась умеренная активность α-нафтилацетатэстеразы (22,56±0,90) и щелочной фосфатазы (10,23±1,05). Спустя 48 часов в описываемых клетках отмечалось повышение активности обоих ферментов по сравнению с исходными показателями и клетками, культивируемыми в стандартных условиях (pZ±0,01). При этом уровень α-нафтилацетатэстеразы составлял 26,98±0,87, щелочной фосфатазы — 14,67±1,21.
При культивировании фибробластов в стационарных условиях на протяжении всей серии экспериментов цитохимически в клетках отмечалась незначительная активность α-нафтилацетатэстеразы, которая постепенно повышалась в процессе культивирования (pZ±0,05). Щелочная фосфатаза в культивируемых клетках не выявлялась.

Заключение
При культивировании мононуклеаров и фибробластов in vitro в условиях направленного движения питательной среды, сходного с движением внутриглазной жидкости, отмечается повышение их внутриклеточной ферментативной активности. При модулирующем влиянии факторов микроокружения (направленный поток жидкости, внеклеточный матрикс) ускоряется процесс созревания и дифференцировки клеток в зрелые формы.
Полученные в ходе экспериментальных исследований данные расширяют представления о влиянии микроокружения на морфофункциональный статус мононуклеаров и фибробластов и позволяют с новых позиций подойти к изучению патогенеза внутриглазной пролиферации при патологии органа зрения.


Страница источника: 193


«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической  конференции офтальмологов«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической конфере...

ХVII Ежегодный конгресс  Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»ХVII Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «В...

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференцияПироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практ...

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании...

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3DСложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеоси...

«Живая хирургия» компании «НанОптика»«Живая хирургия» компании «НанОптика»

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракци...

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках XII Российского общенационал...

Федоровские чтения - 2019 XVI Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2019 XVI Всероссийская научно-практичес...

Актуальные проблемы офтальмологии XIV Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XIV Всероссийская научная ...

Современные тенденции развития офтальмологии - фундаментально-прикладные аспекты Всероссийская научно-практическая конференцияСовременные тенденции развития офтальмологии - фундаментальн...

Восток – Запад 2019 Международная конференция по офтальмологииВосток – Запад 2019 Международная конференция по офтальмологии

Академия ZiemerАкадемия Ziemer

Белые ночи - 2019 Сателлитные симпозиумы в рамках XXV Международного офтальмологического конгрессаБелые ночи - 2019 Сателлитные симпозиумы в рамках XXV Междун...

Новые технологии в офтальмологии - 2019 Всероссийская научно-практическая конференцияНовые технологии в офтальмологии - 2019 Всероссийская научно...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии – 2019 ХVII Всероссийская научно-практическаяконференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии –...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2019»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Роговица III. Инновации  лазерной коррекции зрения и кератопластикиРоговица III. Инновации лазерной коррекции зрения и кератоп...

ХVI Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты»ХVI Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вме...

Сессии в рамках III Всероссийского конгресса «Аутоимунные и иммунодефицитные заболевания»Сессии в рамках III Всероссийского конгресса «Аутоимунные и ...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

«Живая» хирургия в рамках конференции  «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018»«Живая» хирургия в рамках конференции «Современные технолог...

Сателлитные симпозиумы в рамках XI Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках XI Российского общенациональ...

Федоровские чтения - 2018 XV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2018 XV Всероссийская научно-практическ...

Актуальные проблемы офтальмологии XIII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XIII Всероссийская научная...

Восток – Запад 2018  Международная конференция по офтальмологииВосток – Запад 2018 Международная конференция по офтальмологии

«Живая хирургия» в рамках конференции «Белые ночи - 2018»«Живая хирургия» в рамках конференции «Белые ночи - 2018»

Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Между...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизонты -  2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизон...

Сателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКОСателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКО