Околов И.Н.
Микроскопия патологического материала является первым этапом микробиологического обследования больных с воспалительными заболеваниями глаз [4]. Данное исследование решает задачу раннего обнаружения возбудителя и базируется на прямом выявлении микроорганизмов на слизистой оболочке глаза с помощью различных приемов микроскопии. Применение техники микроскопии материала при диагностике острых воспалительных заболеваний глаз сокращает сроки обнаружения микроорганизмов до 15-30 мин и тем самым способствует раннему назначению адекватной антимикробной терапии. Для микроскопического исследования, главным образом, применяются окрашенные препараты (соскобы с конъюнктивы или роговицы, после местной анестезии), которые позволяют определить морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов (рис. 1, 2). Результаты микроскопии окрашенного препарата в ряде случаев позволяют поставить этиологический диагноз и определить первичный выбор средств антибактериальной терапии.
Микроскопические методы исследования материала считаются достаточно информативными. Методы окрашивания микроорганизмов разнообразны. По химическим свойствам различают: основные, кислые и нейтральные красители. Основные краски воспринимаются ядерным хроматином клетки, кислые краски лучше окрашивают протоплазму клеток. Способы окрашивания препаратов для обнаружения микроорганизмов можно разделить на две группы: простые (ориентировочные) и дифференциальные. Ориентировочная окраска хорошо выявляет морфологию бактерий. Окраска по Романовскому-Гимзе – цитологический метод окраски простейших, бактерий, клеточных структур и тканей различных видов при световой микроскопии (рис. 3). Бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток — в голубой, ядра – в красный. При окрашивании простейших их цитоплазма приобретает голубой цвет, а ядра – красно-фиолетовый. Сложным методом окраски считают окрашивание одного и того же препарата растворами нескольких красок в определенной последовательности и, как результат этого, добиваются дифференциации микроорганизмов вследствие их сродства к определенным красителям. Наиболее часто в микробиологии используется окраска по Граму, с помощью которой бактерии подразделяют на две группы: грамположительные, окрашенные в сине-фиолетовый цвет, и грамотрицательные, имеющие разовый или красный цвет (рис. 4). Для уточнения сомнительных результатов окрашивания по Граму используют дополнительные методы.
Для окрашивания клинических образцов можно использовать флюорохром акридиновый оранжевый. Этот метод является неспецифическим, т.к. окрашивает все клетки, содержащие нуклеиновую кислоту. При этом методе микроорганизмы окрашиваются в ярко-оранжевый цвет (рис. 5). При сравнении с другими ориентировочными методами окрашивания, этот метод является наиболее чувствительным для обнаружения микроорганизмов в патологическом материале, т.к. выявляются даже единичные клетки.
