Новиков И.А., Суббот А.М., Федоров А.А., Грибоедова И.Г.
Новый метод суправитального контрастирования биологических тканей на примере переднего эпителия роговицы для последующего исследования на сканирующем электронном микроскопе
1«НМИЦ глазных болезней им.Гельмгольца» Минздрава России Актуальность. Применяемые методы контрастирования биологических тканей для проведения сканирующей электронной микроскопии разработаны в середине XX в. и рассчитаны на исследование в режиме высокого вакуума. Появление низковакуумных микроскопов (режимы EP, VP и WET-SEM) позволило наблюдать ткань без фиксации. Однако контрастность нативных образцов при электронной микроскопии заметно ниже, а классические методы контрастирования не применимы для необезвоженной ткани.
Цель. Разработка метода суправитального контрастирования биологических тканей для исследования на сканирующем электронном микроскопе в низковакуумном режиме.
Материал и методы. Объект исследования – 15 образцов переднего эпителия роговицы площадью 5 мм 2 . Кадаверный материал (p.mort. <12 ч). Изотонический раствор NdCl3 (18 г/л) и изотонические смеси NdCl3 -SmCl 3 -NaCl. Микроскоп Zeiss EVO LS10, режим EP 70 Па, 5-25 кВ, SE-BSE. Образцы экспонировались в растворе 0,5-5 ч с последующей промывкой H2 O 10-50 сек.
Результаты. Выявлена иммобилизация лантаноидов на мембранных структурах (как плазмалеммы, так и клеточных органелл) и их накопление в количествах, позволяющих контрастировать уль-траструктуру клеток в режиме BSE. Подобраны оптимальные режимы съемки. Разработан алгоритм сшивки комбинированных изображений SE+BSE, позволяющий визуализировать структуру поверхности образца одновременно с ультраструктурой подповерхностного 10-микронного слоя.
Заключение. Метод может быть рекомендован для исследований в биологии, медицине, офтальмологии. Получен патент РФ.
Страница источника: 194