Онлайн доклады

Онлайн доклады

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Международный вебинар по глаукоме в области медико-хирургического лечения

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической  конференции офтальмологов

Конференция

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической конференции офтальмологов

ХVII Ежегодный конгресс  Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Конгресс

ХVII Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Конференция

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Симпозиум

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Симпозиум

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Конференция

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Международный вебинар по глаукоме в области медико-хирургического лечения

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической  конференции офтальмологов

Конференция

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической конференции офтальмологов

ХVII Ежегодный конгресс  Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Конгресс

ХVII Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Конференция

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Симпозиум

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Симпозиум

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Все видео...
 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст
УДК:617.713-002.6

Характеристика экспрессии толл-рецепторов на клетках периферической крови при увеитах различного генеза


1Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова
2Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук
3Stemedica Cell Technologies, Inc., Longevity Medicine LLC

     Несмотря на широкий спектр терапевтических и хирургических методов лечения, используемых в офтальмологии, их эффективность остается низкой при воспалительных процессах в сосудистой оболочке глаза – увеитах, нередко протекающих с аутоиммунным компонентом. В патогенезе увеитов играет роль иммунная реактивность организма, которая включает звенья врожденного и приобретенного (адаптивного) иммунитета.

    Врожденная иммунная система образует первую линию защиты на пути патогенных агентов, проникающих в организм человека [1, 14, 16]. Рецепторы врожденной иммунной системы в сравнении с приобретенной иммунной системой более консервативны, не подвергаются соматической перестройке, их разнообразие ограничено и является результатом филогенеза. Ответ врожденной иммунной системы развивается быстрее и может приводить к быстрой элиминации патогена без участия приобретенного иммунитета.

    Врождённый иммунитет реализуется через клеточные и гуморальные факторы. К факторам неспецифической иммунной защиты относятся гуморальные – интерфероны, интерлейкины, хемокины, система комплемента, естественные антитела IgM и IgG и клеточные – толл-рецепторы, рецепторы цитокинов, естественные киллеры – NK-клетки, моноциты и макрофаги, дендритные клетки [2, 3].

    Для выявления патогенной инвазии врожденная иммунная система высших позвоночных животных использует два способа – распознавание чужеродных для организма молекулярных структур инфекционного происхождения – патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (ПАМП) – компоненты клеточной стенки бактерий и грибов, липополисахариды, липопептиды, липопротеины, пептидогликан, β-глюкагон либо микробные нуклеиновые кислоты или белки (флагеллин, профилин); второй способ – распознавание эндогенных факторов, возникающих в ответ на инфекцию, распознавание «измененного своего» – дистресс-ассоциированные молекулярные паттерны (ДАМП). К эндогенным активаторам врожденного иммунитета относят белки теплового шока и мочевую кислоту, а также продукты некроза и апоптоза [4, 5].

    В распознавании ПАМП и ДАМП участвуют паттерн-распознающие рецепторы (ПРР), в частности толл-рецепторы, которые распознают разнообразные классы микроорганизмов и обеспечивают индивидуализированную реакцию врожденной иммунной системы на разные типы инфекций. Кроме того, ПРР реализуют свое влияние на приобретенный иммунитет с помощью дендритных клеток, основной функцией которых является индукция и регуляция Т-клеточного ответа [5, 19].

    TLR являются сигнальными патоген-распознающими рецепторами и рассматриваются исследователями как ключевые рецепторы врожденного иммунитета [3-5, 11]. TLR участвуют в распознавании микробных компонентов и инициируют активацию внутриклеточных сигнальных путей, в результате чего происходит экспрессия генов цитокинов (ФНОα, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-12, ИФНα/β), ко-стимуляторных молекул и некоторых других генов.

    Общим свойством всех толл-рецепторов является их способность взаимодействовать со структурами бактерий, грибов, вирусов и проводить в ядро активационный сигнал, ведущий к повышению неспецифических защитных механизмов организма, в частности воспалительной реакции, что ведет в конечном итоге к гибели и элиминации патогена. Толл-рецепторы экспрессированы в иммунокомпетентных тканях (миндалины, лимфоузлы, селезенка, тимус) и в покровных тканях (кожа, бронхо-легочный, гастроинтестинальный и урогенитальный эпителий, эпителий роговицы и конъюнктивы, периваскулярные пространства радужки и цилиарного тела). На клеточном уровне толл-рецепторы широко экспрессированы на структурных клетках (эпителиальные, фибробласты, эндотелиальные) и на иммунных клетках – моноцитах, макрофагах, нейтрофилах, антигенпрезентирующих дендритных клетках (ДК), естественных киллерах (NK-гранулярные лимфоциты периферической крови и лимфоидных органов) и в меньшей степени на эозинофилах, лимфоцитах [4, 11, 15]. Между толл-рецепторами и системой интерферонов имеется взаимосвязь – пять типов TLR (TLR3, 4, 7, 8, 9) участвуют в индукции биосинтеза трёх основных классов интерферонов [4, 5].

    В популяции антигенпрезентирующих клеток радужки, цилиарного тела, хориоидеи человека выявлены высокие уровни экспрессии TLR4, которые связаны с липополисахаридным рецепторным комплексом бактерий посредством корецептора – CD14/MD-2-комплекса [6, 13, 14, 17]. В сосудистой оболочке человека в норме комплекс TLR4/CD14/MD-2 относительно богато представлен в корне радужной оболочки и строме цилиарного тела, тогда как в хориоидее и строме радужки обнаруживается редко [8-10]. TLR-4/CD14/MD-2-комплекс в увеальной ткани локализуется периваскулярно или субэпителиально. В противоположность другим тканям, например коже, в сосудистой оболочке этот комплекс не экспрессируется в эпителии и сосудистом эндотелии увеального тракта глаза [1, 10, 16]. Такая локализация толл-рецепторов в увеальной ткани является наиболее оптимальной для связывания с липополисахаридным комплексом грамнегативных бактерий гематоофтальмическим или интракоокулярным барьерами [10]. Локализация липополисахаридного рецепторного комплекса внутри сосудистой оболочки предполагает ответную реакцию только при проникновении микроорганизмов через гематоофтальмический и гистогематический барьеры.

    Чувствительность ПРР должна поддерживаться на таком уровне, который обеспечивал бы достаточно надежное распознавание микробов, но, по возможности, минимизировал повреждение тканей. Неконтролируемая активация ПРР, в том числе толл-рецепторов, потенциально опасна для организма, поскольку может вести к гиперэргическому воспалению [5, 14]. Поэтому негативная регуляция паттерн-распознающих рецепторов может, с одной стороны, ингибировать функцию ПРР и препятствовать адекватной реакции врожденной иммунной системы, а с другой стороны, играть заметную роль в лечении патологий, обусловленных гиперактивацией этих рецепторов [5, 10].

    Цель

    Изучить и провести сравнительную характеристику экспрессии различных видов толл-рецепторов на клетках периферической крови при увеитах различной этиологии.

    Материал и методы

     В исследовании участвовали 15 пациентов (7 мужчин и 8 женщин) в возрасте 25-54 лет, которые лечились по поводу острого или обострения хронического увеита различной этиологии в Межотраслевом научно-техническом комплексе «Микрохирургия глаза». Тщательно изучалась история заболевания, начало болезни, периоды обострения, результаты лечения. Пациентам проводили ИФА крови с целью оценки характера возбудителя, активности процесса и иммунологического статуса; офтальмологический статус оценивали стандартными (биомикроскопия, офтальмоскопия в прямом и обратном виде) и дополнительными методами исследования (В-сканирование глаза, оптическая когерентная томография сетчатки и зрительного нерва). Контрольную группу составили здоровые лица в возрасте 23-27 лет – 12 чел.

    Кровь в количестве 15 мл забирали натощак в стерильную гепаринизированную пробирку. Уровень экспрессии толл-подобных рецепторов оценивали с помощью проточно-цитометрического анализа лейкоцитов, окрашенных по стандартным протоколам флуоресцентно-меченными антителами (HyCult Biotech, The Netherlands) к поверхностным (TLR2, TLR4, TLR6) или внутриклеточным (TLR3, TLR9) рецепторам. Для идентификации популяций моноцитов и В-лимфоцитов в этих экспериментах использовали метод двойного иммунофлуоресцентного окрашивания с применением антител к CD14 и CD19 (Сорбент, Москва) соответственно. Измерения проводили на проточном цитофлуориметре FACScan (Becton Dickinson, США), анализировали не менее 10000 событий в образце.

    Статистический анализ проведен с использованием программы «Биостат» по критериям Манна-Уитни для сравнения непараметрических данных в двух группах. P<0,05 – статистически достоверный результат для всех групп.

    Результаты

    В таблице 1 представлено распределение пациентов в зависимости от этиологического фактора, вызвавшего увеит.

    По локализации воспалительного процесса в сосудистой оболочке глаза пациенты распределились следующим образом: у 10 пациентов (11 глаз) наблюдали передний увеит или иридоциклит; у 5 больных (10 глаз) имел место панувеит, на трех глазах осложнившийся тракционной отслойкой сетчатки, на 3 глазах – нейроретинитом, на одном глазу – перипапиллярной экссудативной отслойкой сетчатки. На 2 глазах двух пациентов увеит завершился субатрофией глаза. У 5 пациентов воспалительный процесс наблюдали на обоих глазах.

    Учитывая полиморфизм клинических проявлений, этиологических факторов и результаты проточной цитометрии, нами была проведена систематизация полученных результатов исследования. Из анализа результатов исследования был исключен 1 пациент с кератоиридоциклитом и 2 пациента с прогредиентным течением тяжелой формы панувеита, осложнившегося субатрофией парного глаза; 1 пациентка – с аутоиммунным иридоциклитом на фоне сахарного диабета, 1 пациентка – с гнойным иридоциклитом на артифакичном глазу и 1 пациентка – с рецидивирующим иридоциклитом не установленного генеза. Результаты исследования этих пациентов описаны как клинические случаи.

    Сравнительная характеристика экспрессии различных видов толл-рецепторов на клетках периферической крови в контроле и при увеитах различной этиологии представлена в табл. 2-6.

    Представленные результаты исследования показали, что при увеитах различной локализации имела место тенденция к значительному снижению экспрессии всех типов TLR (TLR2, 3, 4, 6, 9) на лимфоцитах, моноцитах и нейтрофилах по сравнению с контролем. Статистически достоверные результаты получены по снижению экспрессии TLR2 на В-лимфоцитах и моноцитах (р=0,02 и 0,014 соответственно) более чем в 2 раза; TLR4 и TLR6 – на моноцитах (р=0,01 и 0,047 соответственно). Выявлена тенденция к большему снижению экспрессии TLR2, 4, 6 (более чем в 2 раза) и менее выраженное снижение TLR3 и 9 (менее чем в 2 раза) на клетках периферической крови (табл. 2-6).

    Результаты исследования образцов крови 6 пациентов представлены отдельно.

    У пациентки Г., 26 лет, с тяжелым течением сахарного диабета 1 типа, характеризующимся аутоиммунным полиорганным поражением, в том числе двусторонним иридоциклитом, наблюдалось повышение экспрессии на лимфоцитах всех типов TLR (2, 3, 4, 6, 9); снижение экспрессии TLR2 и 4 на моноцитах и нейтрофилах и увеличение экспрессии TLR6, 3, 9 на моноцитах и нейтрофилах. В последующем пациентка умерла от диабетической нефропатии.

    У двух пациентов с двусторонним панувеитом прогредиентного течения, осложнившимся субатрофией одного глаза, наблюдали рост экспрессии TLR2, 6 на лимфоцитах, моноцитах и нейтрофилах, TLR3 – на лимфоцитах, TLR4 – на лимфоцитах и нейтрофилах; снижение экспрессии TLR9 – на всех типах клеток, TLR3 – на моноцитах и нейтрофилах.

    У пациента Д., 50 лет, с диагнозом двустороннего рецидивирующего кератоиридоциклита на фоне хламидийной инфекции отмечали снижение экспрессии TLR2, 4, 6, 9 и повышение TLR3 на всех типах клеток периферической крови.

    Четвертая пациентка Ю. с диагнозом рецидивирующего негнойного иридоциклита с доброкачественным течением неясного генеза показала значительное повышение, почти в 2 раза, всех типов TLR на лимфоцитах, моноцитах и нейтрофилах.

    У пациентки Р. с диагнозом гнойного иридоциклита на артифакичном глазу мы отметили повышение экспрессии всех TLR на лимфоцитах, TLR2, 3, 9 – на моноцитах, TLR6, 3, 9 – на нейтрофилах; и снижение экспрессии TLR4 – на моноцитах.

    Обсуждение

     Таким образом, обобщая представленные данные, можно заключить, что из всех изученных толл-рецепторов наибольшее патогенетическое значение имеет достоверное угнетение экспрессии TLR2, TLR4 и TLR6 – на моноцитах периферической крови. TLR2, TLR4 активируются липополисахаридным комплексом грамнегативных и грампозитивных микроорганизмов посредством корецепторов (CD14/MD-2-комплекс), их экспрессия увеличивается под действием провоспалительных цитокинов. TLR6 активируются бактериальными липопротеинами грамнегативных и грампозитивных бактерий и функционирует в виде гетеродимера с TLR2 [5, 10, 17]. В основной группе, где имело место угнетение экспрессии TLR2, TLR4 и TLR6, наблюдали увеит инфекционно-токсического рецидивирующего характера (8 случаях из 9). Кроме того, пациенты получали активную стероидную противовоспалительную терапию. Угнетение экспрессии TLR2, TLR4 и TLR6, возможно, связано с чрезмерной стимуляцией толл-рецепторов экзогенными лигандами до начала или в дебюте заболевания и развитием состояния рефрактерности или гипочувствительности толл-рецепторов в дальнейшем развитии заболевания на фоне проводимой терапии стероидными противовоспалительными препаратами. В зарубежной литературе это состояние носит название «state of endotoxin tolerance» [12, 13, 19]. Это состояние индуцируется глюкокортикоидами и в ряде случаев является защитной реакцией от гиперэргического воспаления, по данным литературы носит транзиторный характер. Чувствительность клеток к стимуляции ПАМП восстанавливается через 48-72 часа [5, 6, 18].

    В случаях прогредиентного или гиперактивного течения панувеита (у 2 пациентов) мы наблюдали рост экспрессии TLR2, 6 – на лимфоцитах, моноцитах и нейтрофилах, TLR3 – на лимфоцитах, TLR4 – на лимфоцитах и нейтрофилах, что, возможно, свидетельствует о гиперэргической воспалительной реакции с вовлечением в процесс всего сосудистого тракта. При аутоиммунном иридоциклите на фоне сахарного диабета также имело место активное прогредиентное воспаление с повышением экспрессии на В-лимфоцитах всех типов TLR (TLR2, 3, 4, 6, 9); увеличение экспрессии TLR6, 3, 9 – на моноцитах и нейтрофилах. Экспрессия TLR2 и 4 была снижена на моноцитах и нейтрофилах. По нашему мнению угнетение экспрессии TLR2 и 4 связано в данном клиническом случае с состоянием рефрактерности как защитной реакции переднего отрезка сосудистой оболочки глаза от гиперэргического воспаления. Рост экспрессии всех толл-рецепторов на лимфоцитах свидетельствует об активности самого аутоиммунного процесса.

    Выводы

    1. При инфекционно-токсическом увеите выявлено достоверное угнетение экспрессии TLR2, TLR4 и TLR6 – на моноцитах и TLR2 – на В-лимфоцитах периферической крови. Угнетение экспрессии TLR2, TLR4 и TLR6, возможно, связано с чрезмерной стимуляцией толл-рецепторов и развитием состояния рефрактерности толл-рецепторов в активной стадии заболевания на фоне проводимой противовоспалительной терапии стероидными препаратами.

    2. Наибольшее патогенетическое значение в развитии инфекционно-токсического увеита имеет динамическое изменение экспрессии TLR2, TLR4, TLR6 на моноцитах периферической крови.

    3. При аутоиммунном увеите, характеризующимся прогредиентным течением, выявлена тенденция к повышению экспрессии TLR2, TLR4, TLR6, TLR3 на В-лимфоцитах.

    4. Требуются дальнейшие исследования характера экспрессии толл-рецепторов в неактивной стадии рецидивирующего увеального процесса на большем количестве пациентов, а также проведение сравнительной оценки характера экспрессии различных видов толл-рецепторов в активной и неактивной стадии увеита с целью оценки влияния активности воспалительного процесса и медикаментозной терапии на характер экспрессии.

    

    Сокращения, используемые в статье

    TLR – толл-рецепторы.

    IgM – иммуноглобулины М.

    IgG – иммуноглобулины G.

    NK – естественные киллеры.

    ПАМП (PAMP) – патоген-ассоциированные молекулярные паттерны.

    ДАМП (DAMP) – дистресс-ассоциированные молекулярные паттерны.

    ПРР (PRR) – паттерн-распознающие рецепторы.

    ДК (DK) – дендритные клетки.

    IL-6 – интерлейкин 6.

    IL-8 – интерлейкин 8.

    ЛПС (LPS) – липополисахариды.

    IFN – интерферон.

    ИФА – иммуноферментный анализ крови.

    

    Поступила 03.06.2015

    

    Сведения об авторах:

    Гаврилова Наталья Александровна, докт. мед. наук, профессор, зав. кафедрой глазных болезней;

    Гаджиева Нурия Саниевна, канд. мед. наук, доцент кафедры глазных болезней;

    Иванова Зоя Георгиевна, канд. мед. наук, доцент кафедры глазных болезней

    ГБОУ ВПО «МГМСУ им. А.И. Евдокимова» Минздрава России

    Сапожников Александр Михайлович, докт. биол. наук, профессор, зав. лабораторией клеточных взаимодействий;

    Каневский Леонид Михайлович, канд. биол. наук, научн. сотрудник лаборатории клеточных взаимодействий

    ФГБУН «Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова» РАН

    David A. Howe, M.D.

    Longevity Medicine LLC & Stemedica Cell Technolodies, USA


Страница источника: 78

Просмотров: 379