Онлайн доклады

Онлайн доклады

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической  конференции офтальмологов

Конференция

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической конференции офтальмологов

ХVII Ежегодный конгресс  Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Конгресс

ХVII Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Конференция

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Симпозиум

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Симпозиум

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Конференция

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической  конференции офтальмологов

Конференция

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической конференции офтальмологов

ХVII Ежегодный конгресс  Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Конгресс

ХVII Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Конференция

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Симпозиум

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Симпозиум

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Конференция

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Все видео...

Оценка влияния бензалкония хлорида на цитотоксичность глазных капель Неттацин и Тобрекс в условиях in vitro


1Институт цитологии Российской академии наук
2Санкт-Петербургский филиал «НМИЦ МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава РФ

    Актуальность

     Антибактериальные глазные капли предназначены для лечения и профилактики инфекционно-воспалительных заболеваний глаз различной этиологии, вызванных широко распространенными штаммами микроорганизмов, чувствительными к антибиотикам. Наиболее востребованными в настоящее время являются фторхинолоны и аминогликозиды. Из группы аминогликозидов в настоящее время используется гентамицин, тобрамицин и «новый» для офтальмологии препарат – нетилмицин, выпускаемый в двух лекарственных формах: каплях и мази. Глазные капли нетилмицина доступны во флаконах с консервантом и в монодозах без консерванта [1]. Следует помнить, что капли, не содержащие консерванты, с точки зрения микробного загрязнения глазной поверхности могут быть потенциально опасными [5]. Одним из консервантов с доказанной эффективностью, который включен в состав глазных капель, является бензалконий хлорид (БАХ), принадлежащий к четвертично-аммониевым соединениям [2]. БАХ является доминирующим консервантом, применяемым в офтальмологических препаратах за прошедшие несколько десятилетий, и входит в состав 70% глазных капель. Консервант обладает антимикробным действием, имеет ограниченное проникновение в структуры глаза, в растворах сохраняет стабильность длительное время. В последние годы появились многочисленные публикации, свидетельствующие, что БАХ может оказывать токсическое действие на глазную поверхность, где избирательно поглощается эпителием конъюнктивы и роговицы [6]. Проведенные исследования с применением радиоизотопного метода показали, что не было установлено никакого проникновения БАХ во влагу передней камеры глаза, радужную оболочку, цилиарное и стекловидное тело. Однако минимальное проникновение БАХ в строму роговицы все же было зафиксировано даже при однократном закапывании [7]. В слезной жидкости БАХ также был обнаружен в течение короткого времени, по-видимому, это было связано с процессом его поглощения поверхностью эпителиального слоя конъюнктивы [3]. В отдельных исследованиях показана высокая токсичность БАХ на глазную поверхность, особенно при длительном использовании, в отдельных случаях отмечался апоптоз клеток [4].

    Цель

    Сравнение цитотоксичности антибактериальных глазных капель аминогликозидного ряда, зарегистрированных в Российской Федерации: Тобрекс® (Тобрамицин 3 мг/мл, консервант БАХ 0,1 мг/мл; производитель: «Алкон-Куврьор», Бельгия), Неттацин® (Нетилмицин 3 мг/мл, без консерванта; производитель: «С.И.Ф.И. С.п.А.», Италия) и (Нетилмицин 3 мг/мл, консервант БАХ 0,05 мг/мл; производитель: «С.И.Ф.И. С.п.А.», Италия).

    Материал и методы

    В качестве тест-систем в исследовании были использованы нормальные фибробласты кожи человека (ФК) и клетки постоянной трансформированной клеточной линии Clone 1-5с-4 (клетки нормальной конъюнктивы человека).

    Анализ цитотоксического действия антибиотиков в отношении ФК и клеток линии Clone 1-5с-4 проводили с помощью МТТ-теста (стандартный метод определения цитотоксичности различных соединений). Клетки высевали в 96-луночные планшеты в 200 мкл соответствующей питательной среды с добавлением 10% FBS («HyClone», США). Для ФК – среда αMEM (Lonzo, Бельгия), для клеток линии Clone 1-5с-4 – среда Игла MEM («Биолот», Россия). Через сутки (после формирования клетками субконфлюэнтного монослоя) производили замену исходной среды на соответствующую среду, содержащую исследуемые антибиотики в концентрации 1% и 10%. Культивирование проводили при 37° С в СО2-инкубаторе в атмосфере 5% СО2 в течение 3 суток. Контролем служили ФК и клетки линии Clone 1-5с-4, культивируемые в стандартных условиях. По окончанию срока культивирования проводили МТТ-тест. Оптическую плотность полученного раствора формазана в ДМСО измеряли с помощью анализатора Fluorofot «Charity» (Россия) при длине волны 570 нм и референсной длине волны 630 нм. Полученные данные обрабатывали с помощью компьютерной программы MS Excel. Различия считали статистически достоверными при уровне значимости p<0,05. За 100% жизнеспособность принимали интенсивность окраски в лунках с клетками, культивированными без препаратов.

    Результаты

    МТТ-тест выявил, что клетки линии Clone 1-5с-4 более чувствительны к цитотоксическому действию исследуемых препаратов, чем ФК (рис. 1).

    Наименее токсичным для обоих типов клеточных культур оказался Неттацин® без консерванта, который практически не проявил цитостатического действия на клетки в выбранных концентрациях. В то время как глазные капли Тобрекс® и Неттацин®, содержащие БАХ 0,1 и 0,05 мг/мл соответственно в качестве консерванта, проявили различную степень токсичности для клеток. Наиболее выражено токсическое действие данных препаратов проявилось на клетках линии Clone 1-5с-4. На рисунке 2 представлено морфологическое состояние клеток линии Clone 1-5с-4 на 3-и сутки культивирования в питательной среде, содержащей 1% тестируемых антибиотиков. Клетки линии Clone 1-5с-4 в контроле и в присутствии Неттацина® без консерванта имеют типичную эпителиоподобную морфологию и на 3-и сутки культивирования сформировали конфлюэнтный монослой. В присутствии Тобрекса® и Неттацина®, содержащих в своём составе БАХ, клеточный монослой не сформирован, в варианте с Тобрексом® (БАХ – 0,1 мг/мл) практически нет распластанных клеток. Большинство клеток имеет округлую форму; структура клеток зернистая, с вакуолями, что является признаком угнетенного состояния клеток. Эти данные позволяют сделать вывод, что исследуемые препараты, содержащие в составе БАХ, оказывают на клетки линии Clone 1-5с-4 цитотоксическое действие разной степени. В ходе проведённого исследования было установлено цитотоксическое действие исследуемых антибактериальных глазных капель на ФК и клетки линии Clone 1-5с-4 в следующей последовательности (по убыванию токсичности): Неттацин® (без консерванта) > Неттацин® (БАХ – 0,05 мг/мл) > Тобрекс® (БАХ – 0,1 мг/мл).

    Обсуждение

    Несмотря на многочисленные клинические исследования по изучению токсичности различных групп консервантов, содержащихся в глазных лекарственных формах, наличие БАХ в составе глазных капель большинство авторов связывают с потенциальными причинами раздражения конъюнктивы и роговицы. В представленном исследовании нетилмицин без консерванта оказался наименее токсичным антибактериальным препаратом. Эти результаты частично совпадают с ранее полученными данными по оценки цитотоксичности аминогликозидов и фторхинолонов, в составе которых присутствовали консерванты, а также без них [1].

    Заключение

    Токсичность глазных капель с БАХ и без консерванта изучена и оценена на двух линиях клеточных культур. Как показали исследования, цитотоксичность препарата зависела от концентрации БАХ, входящего в состав антибактериальных глазных капель. На основании полученных данных in vitro целесообразно в дальнейшем провести исследования in vivo по оценки кератопатий, которые иногда возникают после назначения антибактериальных препаратов.

    Работа выполнена в рамках проекта РНФ № 14-50-00068


Страница источника: 163-166

Просмотров: 284



Bausch + Lomb
thea
Johnson & Johnson
ОптоСистемы