Онлайн доклады

Онлайн доклады

Пироговский офтальмологический форум

Конференция

Пироговский офтальмологический форум

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Оренбургская конференция офтальмологов - 2020 XXXI Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Оренбургская конференция офтальмологов - 2020 XXXI Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Новые технологии в офтальмологии. VIII Всероссийская научно-практическая конференция посвященная дню рождения академика С.Н. Федорова

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. VIII Всероссийская научно-практическая конференция посвященная дню рождения академика С.Н. Федорова

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Международный вебинар по глаукоме в области медико-хирургического лечения

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Сателлитные симпозиумы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Онлайн семинар

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Онлайн семинар

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Пироговский офтальмологический форум

Конференция

Пироговский офтальмологический форум

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Оренбургская конференция офтальмологов - 2020 XXXI Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Оренбургская конференция офтальмологов - 2020 XXXI Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Новые технологии в офтальмологии. VIII Всероссийская научно-практическая конференция посвященная дню рождения академика С.Н. Федорова

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. VIII Всероссийская научно-практическая конференция посвященная дню рождения академика С.Н. Федорова

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Международный вебинар по глаукоме в области медико-хирургического лечения

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Сателлитные симпозиумы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Онлайн семинар

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Онлайн семинар

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Все видео...

4.1. Методы молекулярно-генетических исследований


     Всего было исследовано 78 образцов замороженной цельной крови с антикоагулянтом в объеме 4-6 мл. Из которых 11 мужчин и 67 женщин. Образцы были обезличены.

    4.1.1. Выделение ДНК из образцов крови

    ДНК была выделена из размороженных образцов крови (400 мкл) с помощью набора Wizard® Genomic DNA Purification Kit (Promega Corp., США) согласно протоколу производителя.

    4.1.2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

    Праймеры к интересующим участкам ДНК были подобраны и проверены на специфичность с помощью программ «Premier Primer» («Premier Biosoft», США) и Primer-BLAST («NCBI», США). Последовательности праймеров приведены в табл. 4. Олигонуклеотиды для проведения ПЦР были синтезированы в НПФ «Литех» (Россия). Для фрагментного анализа числа тринуклеотидных повторов использовался праймер CTG-2F с флуоресцентным красителем FAM. Для проведения ПЦР использовался стандартный набор для амплификации ДНК «Gene Pak® PCR MasterMix Core» («IsoGene Lab. Ltd.», Россия). Объем реакции 20 мкл, количество ДНК в реакцию – 30 нг, конечная концентрация праймеров 0,3мкМ. Учёт результатов ПЦР проводили методом горизонтального электрофореза в агарозном геле. В качестве маркера молекулярного веса ДНК использовался «O’Gene Ruler DNA Ladder Mix» («Thermo Fisher Scientific», США).

    4.1.3 Секвенирование по Сэнгеру ПЦР-продуктов

    Очистка реакционной смеси осуществлялась ферментным методом. Реакцию секвенирования проводили с использованием набора BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit («Thermo Fisher Scientific», США) по протоколу производителя. Секвенирование проводили на капиллярных секвенаторах ABI Prism 3730XL («Applied Biosystems», США). Результаты секвенирования анализировали в программе Unipro UGENE.

    Для учета результатов ПЦР с праймерами к маркеру тринуклеотидных повторов (CTG) на основании маркера молекулярного веса ДНК в программе «Adobe Photoshop CS5» проводилась отсечка на уровне 350 п.н. Эта длина соответствует ампликону, содержащему 39 повторов CTG. Образцы, в которых была четкая или размытая полоса в диапазоне длин выше уровня отсечки считались несущими хотя бы одну экспансированную аллель CTG18.1. Если в этих образцах присутствовала также полоса в диапазоне длин ниже уровня отсечки, то такие образцы считались моноаллельными по экспансированным повторам CTG18.1. Если полоса в диапазоне длин ниже уровня отсечки отсутствовала, то такие образцы расценивались как биалельные по экспансированным повторам CTG18.1.


Страница источника: 46-48

Просмотров: 3811