Онлайн доклады

Онлайн доклады

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Международный вебинар по глаукоме в области медико-хирургического лечения

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической  конференции офтальмологов

Конференция

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической конференции офтальмологов

ХVII Ежегодный конгресс  Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Конгресс

ХVII Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Конференция

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Симпозиум

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Симпозиум

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Конференция

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Международный вебинар по глаукоме в области медико-хирургического лечения

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической  конференции офтальмологов

Конференция

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической конференции офтальмологов

ХVII Ежегодный конгресс  Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Конгресс

ХVII Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Конференция

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Симпозиум

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Симпозиум

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Все видео...

Модифицированная механическая модель лимбальной недостаточности


1«Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации

    Актуальность

     В последние годы в литературе большое внимание уделяется тяжелым заболеваниям глазной поверхности, связанным с поражением зоны лимба с дисфункцией лимбальных эпителиальных стволовых клеток (ЛЭСК). Эти состояния объединили общим термином «лимбальная недостаточность» (ЛН).

    ЛН может развиваться под воздействием как внешних факторов, повреждающих непосредственно ЛЭСК (химический или термический ожог, открытая травма глаза, ультрафиолетовое излучение, ношение контактных линз, применение цитостатиков и др.), так и внутренних, первично действующих на их микроокружение (наследственные, аутоиммунные или системные заболевания, например, синдром Стивенса-Джонсона, Лаела и др.). Это приводит к гибели или снижению численности и функциональной активности ЛЭСК [4, 7].

    ЛЭСК локализуются в складках палисад Vogt роговичной части лимба и представлены базальным слоем эпителия. Их морфологическое микроокружение (клетки и экстрацеллюлярный матрикс) получили название ниши. У кроликов ЛЭСК располагаются на глубине 150–200 мкм [10]. В здоровом глазу постоянно происходит процесс обновления клеток эпителия роговицы: за счет асимметричного деления ЛЭСК с образованием ТА-клеток (transient amplifying cells) обновляется слой базальных клеток роговицы; последние смещаются центрипетально и пролиферируют, проходя постмитотическую и терминальную дифференцировку, с образованием супрабазальных и поверхностных клеток роговичного эпителия, занимающих место элиминированных [11]. При ЛН происходит сдвиг баланса между гибелью и образованием новых клеток. Также в результате гибели или повреждения популяции ЛЭСК нарушается естественный барьер, препятствующий миграции на поверхность роговицы эпителия конъюнктивы [8].

    Клинические проявления ЛН: нарастание на роговицу конъюнктивального эпителия с новообразованными сосудами, хроническое воспаление, деструкция базальной мембраны, рецидивирующие эрозии и язвы, рубцевание стромы роговицы с формированием фиброваскулярного паннуса, что приводит к прогрессирующему снижению остроты зрения [5].

    Для изучения регенеративных процессов и оценки эффективности новых методов лечения в эксперименте предлагались различные модели формирования ЛН: тотальная хирургическая резекция лимбальной зоны после механического удаления эпителия роговицы [1], кольцевидное воздействие электрокоагулятором [3], аппликация фильтровальной бумаги, пропитанной 4% NaOH [12], аппликация митомицина С в область лимба [2]. Основными недостатками этих моделей были относительная дороговизна и сложность исполнения. Благодаря физической элиминации области, содержащей ЛЭСК, механическая модель представляется наиболее надежной и приемлемой. В то же время и она не лишена таких недостатков, как невозможность точного интраоперационного контроля глубины резекции, и, как следствие, опасность перфорации глазного яблока.

    Все известные на сегодня механические модели не стандартизированы и не могут быть использованы в экспериментальных исследованиях.

    Цель

    Модифицировать и стандартизировать механическую модель лимбальной недостаточности.

    Материал и методы

     Экспериментальное исследование выполнено на 10 половозрелых кроликах (20 глаз) породы шиншилла весом 2,5–3,5 кг.

    Животным была выполнена седация с помощью Ксилавета 2% («Labiana life science», Испания) 0,5 мл подкожно и местная анестезия поверхности глаза путем аппликации Алкаина 0,5% («AlconCouvreur», Бельгия).

    Тотальное механическое удаление роговичного эпителия выполнялось ножом-расслаивателем после 40-секундной аппликации на роговицу фильтровальной бумаги, пропитанной 20% этанолом [6]. Контроль полноты деэпителизации проводился с помощью окрашивания 1% раствором флюоресцеина натрия.

    Микрохирургическим алмазным лезвием с дозированной микроподачей центральнее на 2 мм от линии лимба выполняли круговой надрез роговицы на глубину 0,2 мм (Рис. 1а). Затем проводили круговую перитомию конъюнктивы периферичнее лимба на 2,0 мм. После этого в пределах этих двух круговых надрезов выполняли отсепаровку роговично-конъюнктивального лоскута в виде ленты толщиной около 0,2 мм и шириной 4,0 мм (Рис. 1б). Такой охват роговичной и конъюнктивальной части лимба исключал возможность неполного удаления стволовых клеток роговичного эпителия в его ростковой зоне.

    В послеоперационном периоде консервативная терапия включала инстилляции комбинированного препарата Тобрадекс («Alcon-Couvreur», Бельгия) и Корнерегеля («Dr. Gerhard Mann», Германия) 4 раза в день в течение двух недель.

    Биомикроскопию выполняли на 3, 7, 14, 30-й день после операции. На 30-й день проводили импрессионную цитологию (ИЦ) и гистологическое исследование.

    Биомикроскопия выполнялась на щелевой лампе фирмы «Carl Zeiss» (Германия) при увеличении 10×и 16×с окрашиванием глазной поверхности 1% раствором флюоресцеина натрия для оценки площади деэпителизации роговицы. Степень васкуляризации роговицы оценивали по 4-балльной шкале [9]. Оценку интенсивности помутнения стромы роговицы выполняли по 10-балльной шкале Войно-Ясенецкого В.В. Для количественной оценки площади деэпителизации роговицы в процентах использовали проекционную сетку (одно деление приравнивалось к 2% от площади поверхности роговицы).

    Забор клеточного материала для ИЦ производили путем аппликации ацетатцеллюлозного диска («МСЕ МЕМВRANE» 0,45 µm) в четырёх квадрантах. Окрашивали гематоксилином и альциановым синим. Наличие или отсутствие бокаловидных клеток в микропрепарате соответственно свидетельствовало о конъюнктивальном или роговичном фенотипе эпителия.

    Гистологическое исследование выполняли с окрашиванием гематоксилином и эозином («Биовитрум», Санкт-Петербург). Парные срезы окрашивали альциановым синим для идентификации бокаловидных клеток. Световую микроскопию производили на микроскопе «Leica MT 2500» (Германия).

    Результаты

    У всех животных на 3-й день строма была слегка отечна, прозрачна (0 баллов), неоваскуляризация отсутствовала (0 баллов) (Рис. 2а), сохранялся обширный дефект эпителия, в среднем 95,3%, рис. 2б. На 7-й день наблюдалось врастание сосудов в роговицу (1,3 балла), помутнение стромы (2,3 балла) (Рис. 2в), зона деэпителизации сократилась до 67,8% (Рис. 2г). На 14-й день помутнение становилось более интенсивным (6,1 балла), неоваскуляризация доходила до параоптической зоны (3,1 балла) (Рис. 2д), сокращение зоны деэпителизации до 35,7% (Рис. 2е). На 30-й день произошло помутнение (8,1 балла) и неоваскуляризация (3,7 балла) с нарастанием конъюнктивального паннуса в оптической зоне (Рис. 2ж), зона деэпителизации сократилась до 17,8% (Рис. 2з).

    В воспалительном инфильтрате помимо нейтрофилов и макрофагов были выявлены лимфоциты и эозинофилы. В строме обнаружились экстравазальные эритроциты (кровоизлияние из новообразованных сосудов).

    При окраске альциановым синим были выявлены единичные бокаловидные клетки, расположенные на периферии, на расстоянии до 3 мм от лимба (Рис. 3).

    Методом импрессионной цитологии в микропрепаратах был выявлен плоский неороговевающий эпителий роговицы с большим количеством бокаловидных клеток, которые определяли по характерной голубой окраске цитоплазмы клеток и смещенному к периферии фиолетовому ядру.

    Заключение

    Таким образом, нами получена стандартизированная и универсальная модель ЛН, доступная для широкого применения в экспериментальных исследованиях, не требующая использования дорогостоящих препаратов и реактивов, позволяющая осуществлять интраоперационный контроль заданной глубины резекции лимбальных тканей и исключающая возможность перфорации глазного яблока. Модель позволяет сравнивать эффективность различных методов лечения ЛН, таких как трансплантация культивированных ЛЭСК на коллагеновом геле, скаффолде, амниотической мембране или контактной линзе, а также трансплантация клеток иного происхождения (буккальных, мезенхимальных стволовых клеток и др.). В результате механической элиминации зоны локализации ЛЭСК механическая модель представляется наиболее надежной и показала себя эффективной в 100% наблюдений. Данная предсказуемость результата значительно снижает возможность ошибки в оценке эффективности тех или иных методов лечения ЛН.

    Модифицированная нами механическая модель лимбальной недостаточности показала себя эффективной, стандартизированной и доступной для использования в экспериментальных исследованиях.


Страница источника: 32-35

Просмотров: 397