Онлайн доклады

Онлайн доклады

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической  конференции офтальмологов

Конференция

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической конференции офтальмологов

ХVII Ежегодный конгресс  Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Конгресс

ХVII Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Конференция

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Симпозиум

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Симпозиум

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Конференция

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической  конференции офтальмологов

Конференция

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической конференции офтальмологов

ХVII Ежегодный конгресс  Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Конгресс

ХVII Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Конференция

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Симпозиум

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Симпозиум

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Конференция

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Все видео...

3.1. Оптимизация этапа технологии получения богатой тромбоцитами плазмы крови


     Для решения первой задачи диссертации был оптимизирован этап технологии получение плазмы с высоким содержанием тромбоцитов путем одноэтапного закрытого центрифугирования из небольшого количества крови.

    Получение БоТП проводилось в центре фундаментальных и прикладных медико-биологических проблем ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова МЗ РФ.

    Для этого проводили забор 12,5-13,5 мл крови в шприц с антикоагулянтом (Цитрат натрия + Декстроза) – 1,5 мл, перенесение крови в пробирку (YCELLBIO-KIT, Корея) и центрифугирование (центрифуга «Armed» 80-2s, Россия) в течение 5 минут на скорости 4000 оборотов в минуту.

    Образец крови брали из кубитальной вены за 30 минут до операции, перед премедикацией. Подготавливали катетер-бабочку, место прокола обрабатывли 70% спиртом и давали высохнуть. После введения иглы в вену жгут тотчас же расслабляли. Забор крови проводился в подсоединенный к катетеру шприц объемом 20 мл с предварительно набранным антикоагулянтом, учитывая пол пациента (12,5 или 13,5 мл) (Таблица 4).

     Затем шприц закрывали и перемешивали содержимое путем 6-8-кратного переворачивания или вращения (без встряхивания).

    В данном исследовании получение БоТП проводилось в стерильных пробирках YCELLBIO-KIT (РУ № РЗН 2014/2149 от 08.12.2014). Конструктивно пробирка имеет расширенную и узкую части. При введении в пробирку определенного объёма крови (12,5-13,5 мл) и однократного центрифугирования, происходило ее разделение на эритроцитарную массу и плазму таким образом, что плазма богатая тромбоцитами собиралась в узкой части пробирки. Особенности конструкции пробирки позволяли проводить закрытое центрифугирование, что исключило непосредственный контакт крови пациента с внешней средой, предотвращая вторичную контаминацию в ходе манипуляций с кровью и плазмой. Герметичная крышка обеспечивала стерильность и неизменность состава плазмы.

    Пробирка снабжена поворотным колпачком, который позволял менять расположение уровня плазмы (Рисунок 1).

    Кровь вводили в боковое отверстие крышки пробирки под углом 45° иглой 18 G (Рисунок 2).

    Универсальный размер пробирки подходит для всех типов центрифуг: с угловым ротором (угол наклона ротора 45° ) и ротор-крестовиной с подвесными стаканами.

     Время между взятием образца крови из вены и центрифугированием составляло не более 10 минут. Центрифугирование проводили на лабораторной центрифуге «Armed»:80-2S (Shanghai Medical Instruments, КНР) с угловым ротором при комнатной температуре (от +18 до +24 ° С).

    Диапазон скорости вращения прибора – от 1000 до 4000 об/мин с шагом 500 об/мин. Для контроля работы пользовались таймером с установкой времени центрифугирования.

    Балансировка центрифуги – один из важнейших факторов в процессе разделения крови на фракции (Рисунок 3).

    Пробирку с кровью помещали в центрифугу. В противоположную ячейку ставили такую же пробирку, заполненную водой, в качестве противовеса для уравновешивания образцов (Рисунок 4).

     Настройка параметров частоты вращения и времени определили опытным путем и устанавливали на панели управления прибором: время центрифугирования 5 минут скорость вращения центрифуги 4000 об/мин. Конусообразная форма пробирки позволила разделить кровь на БоТП плазму и эритромассы (Рисунок 5).

    В некоторых случаях необходимо было поднять или опустить слой БоТП для удобства его извлечения (Рисунок 6).

    Вращение поворотного колпачка позволяло менять уровень БоТП (Рисунок 7).

     Сужение в центральной части пробирки обеспечило точное извлечение слоя БоТП (Рисунок 8), которое проводили тупоконечной тонкостенной канюлей 27G через центральной отверстие в крышке пробирки (Рисунок 9).

    В отличие от традиционных игл с косым срезом, канюля с тупым концом позволяет наиболее точно поместить конец ее среза в слой плазмы.

    Тонкие стенки увеличивают скорость потока жидкости а система Luer Lock обеспечивает надежное соединение со шприцом.

     В клинико-диагностической лаборатории ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России проведен анализ полученной БоТП и подсчет тромбоцитов в образцах крови 20 пациентов, случайно отобранных из контрольной группы, на гематологическом анализаторе Drew 3-PAC (DREW Scientific (Великобритания – США)) (Рисунок 10).

    В результате зафиксировано количество тромбоцитов, превышающее физиологическую норму в 7-9 раз (Рисунок 11).

    Таким образом, в результате использования пробирок конусообразной формы, стало возможным получить более 1 млн. кл/мкл тромбоцитов из небольшого количества крови путем закрытого центрифугирования.

    Разделение веществ основано на разном поведении частиц в центробежном поле центрифуги - частицы, имеющие разную плотность, форму и размеры, осаждаются с разной скоростью. Установка времени центрифугирования 5 минут при скорости вращения центрифуги 4000 об/мин привело к тому, что слой БоТП располагался в суженной прозрачной горловине пробирки, что позволило проводить центрифугирование в один этап и сделало технологию получения плазмы проще.


Страница источника: 50-58

Просмотров: 116