Онлайн доклады

Онлайн доклады

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Восток - Запад 2022 Международная конференция по офтальмологии

Восток - Запад 2022 Международная конференция по офтальмологии

Целевые уровни ВГД в терапии глаукомы

Вебинар

Целевые уровни ВГД в терапии глаукомы

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции «Невские горизонты - 2022»

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции «Невские горизонты - 2022»

Новые технологии в офтальмологии 2022

Новые технологии в офтальмологии 2022

ОКТ: новые горизонты

Сателлитный симпозиум

ОКТ: новые горизонты

Превентивная интрасклеральная фланцевая фиксация ИОЛ при подвывихе хрусталика

Вебинар

Превентивная интрасклеральная фланцевая фиксация ИОЛ при подвывихе хрусталика

Лечение глаукомы: инновационный вектор - 2022. III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Лечение глаукомы: инновационный вектор - 2022. III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Вебинар компании «Rayner»

Вебинар компании «Rayner»

Цикл онлайн дискуссий компании «Акрихин» «О глаукоме и ВМД в прямом эфире»

Цикл онлайн дискуссий компании «Акрихин» «О глаукоме и ВМД в прямом эфире»

Алгоритм ведения пациентов с астенопией после кераторефракционных операций

Вебинар

Алгоритм ведения пациентов с астенопией после кераторефракционных операций

Cовременные технологии диагностики патологий заднего отдела глаза

Сателлитный симпозиум

Cовременные технологии диагностики патологий заднего отдела глаза

Вебинары компании  «Акрихин»

Вебинары компании «Акрихин»

Снижение концентрации «Бримонидина», как новое решение в терапии у пациентов с глаукомой

Вебинар

Снижение концентрации «Бримонидина», как новое решение в терапии у пациентов с глаукомой

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Актуальные вопросы офтальмологии: в фокусе – роговица

Вебинар

Актуальные вопросы офтальмологии: в фокусе – роговица

XIX Конгресс Российского глаукомного общества  «19+ Друзей Президента»

XIX Конгресс Российского глаукомного общества «19+ Друзей Президента»

Пироговский офтальмологический форум

Пироговский офтальмологический форум

Кератиты, язвы роговицы

Вебинар

Кератиты, язвы роговицы

Актуальные вопросы офтальмологии

Вебинар

Актуальные вопросы офтальмологии

Всероссийский консилиум. Периоперационное ведение пациентов с глаукомой

Сателлитный симпозиум

Всероссийский консилиум. Периоперационное ведение пациентов с глаукомой

Трансплантация роговично-протезного комплекса у пациента с васкуляризированным бельмом роговицы

Трансплантация роговично-протезного комплекса у пациента с васкуляризированным бельмом роговицы

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Восток - Запад 2022 Международная конференция по офтальмологии

Восток - Запад 2022 Международная конференция по офтальмологии

Целевые уровни ВГД в терапии глаукомы

Вебинар

Целевые уровни ВГД в терапии глаукомы

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции «Невские горизонты - 2022»

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции «Невские горизонты - 2022»

Новые технологии в офтальмологии 2022

Новые технологии в офтальмологии 2022

ОКТ: новые горизонты

Сателлитный симпозиум

ОКТ: новые горизонты

Превентивная интрасклеральная фланцевая фиксация ИОЛ при подвывихе хрусталика

Вебинар

Превентивная интрасклеральная фланцевая фиксация ИОЛ при подвывихе хрусталика

Лечение глаукомы: инновационный вектор - 2022. III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Лечение глаукомы: инновационный вектор - 2022. III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Вебинар компании «Rayner»

Вебинар компании «Rayner»

Цикл онлайн дискуссий компании «Акрихин» «О глаукоме и ВМД в прямом эфире»

Цикл онлайн дискуссий компании «Акрихин» «О глаукоме и ВМД в прямом эфире»

Алгоритм ведения пациентов с астенопией после кераторефракционных операций

Вебинар

Алгоритм ведения пациентов с астенопией после кераторефракционных операций

Cовременные технологии диагностики патологий заднего отдела глаза

Сателлитный симпозиум

Cовременные технологии диагностики патологий заднего отдела глаза

Все видео...

4.3. Определение антипролиферативной активности и цитотоксичности эверолимуса


    4.3.1. Определение антипролиферативной активности эверолимуса

     Исходная плотность монослоя через сутки после пересева практически не отличалась между группами и составила 172 (172; 178) кл/мм2. После внесения эверолимуса в питательную среду культуры в течение 24 часов находились в лаг-фазе из-за смены условий культивирования, и значительного изменения плотности монослоя не происходило: наблюдали либо слабовыраженное ее увеличение, либо незначительное снижение плотности вне зависимости от концентрации эверолимуса в питательной среде. Клетки находились на большом расстоянии друг от друга, сохраняли адгезивную способность. Границы клеток были четкими, цитоплазма гомогенной, ядра визуализировались. В концентрации 15 мкг/мл наблюдали единичные клетки округлой формы (Рисунок 21).

    Через 72 часа культивирования в присутствии эверолимуса количество клеток изменилось незначительно во всех концентрациях. В монослое обнаруживали много свободных от клеток пространств. Клетки характеризовались четкими границами, гомогенной цитоплазмой и наличием укороченных отростков. Адгезивная способность была сохранена (Рисунок 22).

    Наибольший прирост плотности монослоя за фазу логарифмического роста культуры наблюдали в контрольной группе – 163 (158; 170) кл/мм2. В культурах других групп отмечали постепенное уменьшение прироста плотности монослоя в пределах концентраций эверолимуса от 0,5 мкг/мл до 5,0 мкг/мл до значений 26 (12; 32) кл/мм2. В пределах концентраций 10,0-20,0 мкг/мл происходило небольшое увеличение прироста плотности монослоя до 120 (91;126) кл/мм2 (Рисунок 23). Однако во всех группах, культивируемых в присутствии эверолимуса, прирост плотности монослоя за фазу логарифмического роста был достоверно меньше прироста в группе контроля.

     Через 7 суток плотность монослоя во всех исследуемых культурах с эверолимусом была достоверно меньше плотности культур контрольной группы (Таблицы 16). Морфофункциональные особенности клеток были сохранены, нарушений адгезивной способности не наблюдали (Рисунок 24).

    Показатели интенсивности пролиферации в культуре – индекс пролиферации и время удвоения культур определяли в фазу логарифмического роста, когда происходило наиболее интенсивное деление клеток. Количество удвоений культуры рассчитывали по завершении всего эксперимента через 7 суток. Значения индекса пролиферации и количества удвоений культуры были достоверно ниже, а время пролиферации – достоверно выше значений, полученных для контрольной группы, во всех изучаемых концентрациях эверолимуса. Дозозависимость антипролиферативного эффекта от концентрации препарата в питательной среде прослеживали в пределах концентраций от 0,5 до 10,0 мкг/мл с высокой силой связи по шкале Чеддока (коэффициенты корреляции Спирмена -0,84 и 0,85 для индекса пролиферации и времени удвоения культуры соответственно). При оценке всего изучаемого диапазона концентраций дозозависимости выявлено не было. В присутствии эверолимуса отмечали замедление пролиферации фибробластов теноновой капсулы человека в 1,7-7,4 раз, наиболее выраженное в концентрации 10 мкг/мл. (Таблица 17).

    В течение всего эксперимента наблюдали достоверное снижение пролиферативной активности фибробластов теноновой капсулы человека при их культивировании в присутствии эверолимуса в концентрации 0,5-20,0 мкг/мл.

     4.3.2. Определение цитотоксичности эверолимуса

    Согласно данным определения ЯЦС в культурах клеток, значения медианы и квартилей Q1 и Q3 группы контроля составили 0,14 (0,07; 0,15) отн. ед., в то время как данные значения медиан в образцах, культивируемых с добавлением эверолимуса, составили от 0,10 до 0,15 отн. ед. Статистически достоверных различий между исследуемыми группами и группой контроля не было (Таблица 18). Присутствие в питательной среде эверолимуса не оказывало цитотоксического влияния на фибробласты теноновой капсулы человека в исследуемых концентрациях, и на 7 день эксперимента все культуры находились в стационарной фазе вне активной пролиферации. При этом торможение пролиферации в группе эверолимуса происходило за счет ее замедления, а не за счет гибели клеток.

     При окраске монослоя трипановым синим отмечали единичные клетки с поврежденными мембранами, диффузно окрашенные в синий цвет во всех концентрациях эверолимуса (Рисунок 25).

    При окраске суданом IV и гематоксилином отмечали сохранение морфофункциональных особенностей фибробластов во всех изученных концентрациях эверолимуса. Границы клеток оставались четкими, цитоплазма – гомогенной. Ядра имели базофильную окраску, хорошо визуализировались ядрышки. В концентрациях 1,0 мкг/мл и 20 мкг/мл обнаруживали единичные клетки с липидными включениями, окрашенными в красный цвет (Рисунок 26).

    Окраска набором флуорофоров («Live/Dead Cell-Mediated Cytotoxicity Kit») выявила единичные поврежденные клетки с ядрами, окрашенными в красный цвет, во всех концентрациях препарата без дозозависимого эффекта (Рисунок 27). Во всех исследуемых концентрациях эверолимуса доля поврежденных клеток значимо не отличалась в сравнении с контрольной группой и не превышала 5,3% против максимального значения 6,4% в группе контроля (Таблица 19).

     Таким образом, и циклоспорин А, и эверолимус оказывали прямой антипролиферативный эффект на фибробласты теноновой капсулы человека в эксперименте in vitro, замедляя скорость пролиферации клеток в 1,5-5,1 раз и 1,7-7,4 раз соответственно.

    При этом антипролиферативный эффект циклоспорина А имел выраженный дозозависимый характер в пределах изучаемых концентраций от 0,05 до 2,0 мкг/мл в отличие от эверолимуса, при добавлении которого в питательную среду культур клеток происходило замедление клеточной пролиферации, не связанное с концентрацией препарата в пределах 0,5-20,0 мкг/мл.

     Ни циклоспорин А, ни эверолимус не оказывали цитотоксического эффекта на фибробласты теноновой капсулы человека в концентрациях, высвобождаемых дренажами, при культивировании в течение 7 дней, что свидетельствует о достаточном уровне безопасности местного применения данных препаратов.


Страница источника: 77-84

OAI-PMH ID: oai:eyepress.ru:article47024
Просмотров: 461



Johnson & Johnson
Bausch + Lomb
Reper
NorthStar
ЭТП
Rayner
Senju
Гельтек
santen
Акрихин
Ziemer
Eyetec
МАМО
Tradomed
Nanoptika
R-optics
Фокус
sentiss
nidek