Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Изучение патогенеза избыточной регенерации в условиях проточного культивирования


1Сибирский государственный медицинский университет Минздрава РФ

Актуальность.
Процессы гиперрегенерации тканей глаза являются причиной неудовлетворительных исходов антиглаукомных операций. Профилактика избыточного рубцевания, несмотря на внедрение большого количества новых методов, недостаточно эффективна. Очевидно, что решение этой проблемы возможно только на основе углубленного изучения патогенетических механизмов пролиферативного синдрома. Поэтому выявление роли патогенетических факторов избыточной регенерации после антиглаукомных операций представляется актуальным.
Для оценки морфофункционального состояния клеток, принимающих участие в процессах регенерации, широко используется их культивирование в посуде, выполненной из стекла или пластика, и заполненной питательной средой. Инкубирование клеточной культуры выполняют при строгом соблюдении температурного режима (37oC), содержания CO2 (5–7%) и уровня влажности (100%). Однако возможности такого способа культивирования ограничены, поскольку изучаемые клетки помещают в среду, содержащую необходимые для жизнеобеспечения компоненты, но все же лишь в незначительной степени воспроизводящей естественные условия организма (в данном случае – полость глазного яблока).
Цель – изучение влияния однонаправленного тока жидкости на морфофункциональное состояние фибробластов человека.
Материал и методы. Исследование проводили с помощью оригинального устройства, позволяющего in vitro моделировать движение питательной среды, сходное с движением жидкости в полости глазного яблока. Устройство представляет собой замкнутую систему с камерой, содержащей полупроницаемый фильтр. Систему предварительно заполняли питательной средой IMDM (ДМЕМ в модификации Iscove), объемом 200 мл, к которой добавляли 4%-ный раствор гентамицина (0,02 мл на каждые 10 мл питательной среды). В качестве объекта исследования была выбрана культура фибробластоидных клеток легкого человека после 3–4 пассажей в концентрации 5?104 клеток/мл. Клеточный материал вводили в камеру и помещали на фильтр. Камеру соединяли с емкостью через роликовый насос, благодаря его работе создавалось равномерное направленное движение питательной среды со скоростью 2,1-2,4 мм³/мин. Первичную клеточную культуру инкубировали при постоянном движении жидкой питательной среды. В качестве контроля изучаемые клетки культивировали на полупроницаемом фильтре, помещенном в чашку Петри с необходимой питательной средой, при строгом соблюдении температурного режима (37oC), содержания CO2 (5–7%) и уровня влажности (100%).
Длительность проточного культивирования составила 48 часов. Клетки, культивируемые в стандартных условиях, исследовали через 24 и 48 часов. По окончании экспериментов клеточный материал, находящийся на полупроницаемом фильтре, исследовали с помощью цитохимических методов. Обнаруживали активность щелочной фосфатазы – специфического маркера фибробластических клеток и неспецифической эстеразы.
Результаты. В процессе культивирования in vitro фибробластов в условиях направленного движения питательной среды получены следующие результаты. Через 48 ч культивирования клеток цитохимически отмечали высокую активность щелочной фосфатазы и неспецифической эстеразы. Реакция на щелочную фосфатазу в клетках, выращенных в стационарных условиях, через 24 и 48 часов была отрицательной. Однако в этих клетках была отмечена высокая активность неспецифической эстеразы в такие же сроки наблюдения.
Цитохимические методы дают представление о распределении естественных ферментных систем в клетках. В период интенсивной дифференцировки клеток происходит увеличение активности ферментативных реакций. Культивирование фибробластов в динамических условиях позволило выявить увеличение активности как специфических, так и неспецифических ферментных систем, что указывает на ускорение дифференцировки клеток, по сравнению с результатами культивирования в статических условиях.
Выводы. Таким образом, при культивировании фибробластов в условиях однонаправленного тока жидкости мы отмечали повышение их внутриклеточной ферментативной активности. Было показано, что воздействие факторов микроокружения (направленный поток жидкости, внеклеточный матрикс) ускоряет процесс дифференцировки фибробластов в зрелые коллагенсинтезирующие формы. Полученные данные позволяют получить новые знания о влиянии микроокружения на морфофункциональное состояние фибробластов и участии их в процессах регенерации.
Abstract
We used the device allowing to create in vitro one-way fluid flow similar to the fluid flow taking place in the eyeball. The culture of human pulmo fibroblasts cells was incubated on fibrous membranes under a constant directional flow of the nutrient medium. The incubation period was lasting 48 h. Intracellular enzyme activity of fibroblasts cells increased under dynamic conditions, differentiation of fibroblasts cells being accelerated.


Федоровские чтения - 2019 XVI Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2019 XVI Всероссийская научно-практичес...

Актуальные проблемы офтальмологии XIV Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XIV Всероссийская научная ...

Современные тенденции развития офтальмологии - фундаментально-прикладные аспекты Всероссийская научно-практическая конференцияСовременные тенденции развития офтальмологии - фундаментальн...

Восток – Запад 2019 Международная конференция по офтальмологииВосток – Запад 2019 Международная конференция по офтальмологии

Академия ZiemerАкадемия Ziemer

Белые ночи - 2019 Сателлитные симпозиумы в рамках XXV Международного офтальмологического конгрессаБелые ночи - 2019 Сателлитные симпозиумы в рамках XXV Междун...

Новые технологии в офтальмологии - 2019 Всероссийская научно-практическая конференцияНовые технологии в офтальмологии - 2019 Всероссийская научно...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии – 2019 ХVII Всероссийская научно-практическаяконференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии –...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2019»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Роговица III. Инновации  лазерной коррекции зрения и кератопластикиРоговица III. Инновации лазерной коррекции зрения и кератоп...

ХVI Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты»ХVI Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вме...

Сессии в рамках III Всероссийского конгресса «Аутоимунные и иммунодефицитные заболевания»Сессии в рамках III Всероссийского конгресса «Аутоимунные и ...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

«Живая» хирургия в рамках конференции  «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018»«Живая» хирургия в рамках конференции «Современные технолог...

Сателлитные симпозиумы в рамках XI Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках XI Российского общенациональ...

Федоровские чтения - 2018 XV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2018 XV Всероссийская научно-практическ...

Актуальные проблемы офтальмологии XIII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XIII Всероссийская научная...

Восток – Запад 2018  Международная конференция по офтальмологииВосток – Запад 2018 Международная конференция по офтальмологии

«Живая хирургия» в рамках конференции «Белые ночи - 2018»«Живая хирургия» в рамках конференции «Белые ночи - 2018»

Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Между...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизонты -  2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизон...

Сателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКОСателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКО

VIII Евро-Азиатская конференция по офтальмохирургии (ЕАКО)VIII Евро-Азиатская конференция по офтальмохирургии (ЕАКО)

XVII Всероссийская школа офтальмологаXVII Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Top.Mail.Ru


Open Archives