Онлайн доклады

Онлайн доклады

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Международный вебинар по глаукоме в области медико-хирургического лечения

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической  конференции офтальмологов

Конференция

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической конференции офтальмологов

ХVII Ежегодный конгресс  Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Конгресс

ХVII Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Конференция

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Симпозиум

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Симпозиум

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Конференция

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Международный вебинар по глаукоме в области медико-хирургического лечения

Новейшие и инновационные подходы в медико-хирургическом лечении глаукомы

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Белые ночи - 2020 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVI Международного офтальмологического конгресса

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые возможности оборудования NIDEK для диагностики патологии глазного дна

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Новые технологии лазерной рефракционной хирургии

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Конференция

Лечение глаукомы: Инновационный вектор

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Роговица IV. Диагностика и лечение. Научно-практическая конференция с международным участием

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической  конференции офтальмологов

Конференция

«Живая хирургия» в рамках XXVII научно-практической конференции офтальмологов

ХVII Ежегодный конгресс  Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Конгресс

ХVII Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты. Семнадцать мгновений зимы»

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Конференция

Пироговский офтальмологический форум. Ежегодная научно-практическая конференция

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

Симпозиум

Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

«Живая хирургия» компании «НанОптика»

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Симпозиум

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3D

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»

Все видео...

Клеточные механизмы внутриглазной пролиферации с позиций функциональной морфологии


1Сибирский государственный медицинский университет Минздрава РФ

В современной офтальмологии один из научно-познавательных акцентов связан с изучением патогенеза фиброваскулярной пролиферации, осложняющей течение различных патологических процессов в полости глазного яблока. Существенную помощь в исследовании клеточных механизмов развития пролиферативной ткани оказывает функциональная морфология, в культуре in vitro изучающая клетки в их реальном действии и взаимодействии с микроокружением. На современном этапе микроокружение рассматривается как полифункциональный комплекс, обладающий способностью модулировать клеточный потенциал к адгезии и пролиферации, морфологической и функциональной дифференцировке. Микроокружение – тот необходимый фон, на котором и при участии которого разворачиваются основные патогенетические события в патологическом очаге. В полости глазного яблока микроокружение складывается из взаимодействующего комплекса анатомо-физиологических особенностей и внестромальных компонентов регуляции. Анатомо-физиологические особенности определяются наличием направленного движения внутриглазной жидкости и фибриллярным строением стекловидного тела. Внестромальные компоненты представлены клеточными элементами, мигрирующими в витреальную полость (клетки ретинального пигментного эпителия, моноциты/макрофаги, фибробласты и т.д.), и гуморальными факторами (цитокины, факторы роста). Особый интерес, по нашему мнению, представляет направленное движение жидкости в полости глазного яблока, создаваемое градиентом давления.
Цель работы – в эксперименте изучить влияние направленного потока жидкости на морфофункциональное состояние фибробластов человека.

Материал и методы

Разработано устройство, позволяющее in vitro моделировать движение питательной среды, сходное с движением жидкости в полости глазного яблока. Устройство представляет собой замкнутую систему с камерой, содержащей полупроницаемый фильтр. Система предварительно заполняется питательной средой, содержащей 200,0 мл среды ДМЕМ в модификации Iscove и 4% раствор гентамицина (из расчета 0,02 мл на 10,0 мл среды). В качестве объекта исследования использовали культуру фибробластов легкого человека после 3-4 пассажей в концентрации 5·104 клеток/мл. Клеточный материал вводили в камеру и размещали на фильтре. Благодаря работе роликового насоса в системе создавалось равномерное направленное движение питательной среды со скоростью 2,1-2,4 мм³/мин. Первичную культуру инкубировали при постоянном движении среды с соблюдением условий культивирования в течение 24 и 48 ч. В качестве контроля фибробласты культивировали на полупроницаемом фильтре, помещенном в чашку Петри. Клеточный материал исследовали с помощью цитохимических методов. Методом компьютерной морфометрии цифровых изображений определяли оптическую плотность адгезированных к фильтру фибробластов. Статистическую обработку результатов проводили с использованием метода попарных сравнений связанных выборок. Достоверность различий между сравниваемыми группами оценивалась с помощью непараметрического критерия Уилкоксона (pZ).

Результаты

При проточном культивировании фибробластов получены следующие результаты. Через 24 ч от начала эксперимента цитохимически в культивируемых клетках отмечалась умеренная активность α-нафтилацетатэстеразы (20,97±0,90) и щелочной фосфатазы (10,23±1,05). Площадь клеточной поверхности составляла в среднем 238,94±5,36.
Спустя 48 ч в описываемых клетках отмечалось повышение активности обоих ферментов по сравнению с исходными показателями и клетками, культивируемыми в стандартных условиях (pZ<0,01). При этом уровень α-нафтилацетатэстеразы составлял 28,13±0,87, щелочной фосфатазы – 14,67±1,21. Площадь же клеточной поверхности фибробластов в среднем составляла 179,43±7,81 (pZ<0,001).
При культивировании фибробластов в стационарных условиях на протяжении всей серии экспериментов цитохимически в клетках отмечалась незначительная активность α-нафтилацетатэстеразы, которая постепенно повышалась в процессе культивирования (22,56±0,95 через 24 часа и 26,98±0,89 через 48 часов, pZ<0,05). Щелочная фосфатаза в культивируемых клетках не выявлялась. Площадь клеточной поверхности составляла через 24 часа – 307,19±6,02, через 48 часов – 211,66±5,29 (pZ<0,001).
Данные цитохимических исследований фибробластов, культивируемых в проточных условиях, по сравнению с показателями в статических условиях свидетельствуют о повышении активности как специфических (щелочная фосфатаза), так и неспецифических (α-нафтилацетатэстеразы) ферментных систем, что указывает на ускорение процесса дифференцировки клеток. Подтверждением этому служит и более существенное по сравнению с контролем уменьшение площади клеточной поверхности культивируемых в проточных условиях фибробластов как отражение степени их созревания.

Заключение

Таким образом, при культивировании фибробластов человека in vitro в условиях направленного движения питательной среды отмечается повышение их внутриклеточной ферментативной активности. При модулирующем влиянии факторов микроокружения (направленный поток жидкости, внеклеточный матрикс) ускоряется процесс дифференцировки клеток в зрелые формы. Полученные данные расширяют представление о влиянии микроокружения на морфофункциональный статус клеток фибробластической популяции и позволяют с новых позиций подойти к изучению клеточных механизмов развития фиброваскулярной пролиферации в полости глазного яблока.

Просмотров: 248