Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Клеточные механизмы внутриглазной пролиферации с позиций функциональной морфологии


1Сибирский государственный медицинский университет Минздрава РФ

В современной офтальмологии один из научно-познавательных акцентов связан с изучением патогенеза фиброваскулярной пролиферации, осложняющей течение различных патологических процессов в полости глазного яблока. Существенную помощь в исследовании клеточных механизмов развития пролиферативной ткани оказывает функциональная морфология, в культуре in vitro изучающая клетки в их реальном действии и взаимодействии с микроокружением. На современном этапе микроокружение рассматривается как полифункциональный комплекс, обладающий способностью модулировать клеточный потенциал к адгезии и пролиферации, морфологической и функциональной дифференцировке. Микроокружение – тот необходимый фон, на котором и при участии которого разворачиваются основные патогенетические события в патологическом очаге. В полости глазного яблока микроокружение складывается из взаимодействующего комплекса анатомо-физиологических особенностей и внестромальных компонентов регуляции. Анатомо-физиологические особенности определяются наличием направленного движения внутриглазной жидкости и фибриллярным строением стекловидного тела. Внестромальные компоненты представлены клеточными элементами, мигрирующими в витреальную полость (клетки ретинального пигментного эпителия, моноциты/макрофаги, фибробласты и т.д.), и гуморальными факторами (цитокины, факторы роста). Особый интерес, по нашему мнению, представляет направленное движение жидкости в полости глазного яблока, создаваемое градиентом давления.
Цель работы – в эксперименте изучить влияние направленного потока жидкости на морфофункциональное состояние фибробластов человека.

Материал и методы

Разработано устройство, позволяющее in vitro моделировать движение питательной среды, сходное с движением жидкости в полости глазного яблока. Устройство представляет собой замкнутую систему с камерой, содержащей полупроницаемый фильтр. Система предварительно заполняется питательной средой, содержащей 200,0 мл среды ДМЕМ в модификации Iscove и 4% раствор гентамицина (из расчета 0,02 мл на 10,0 мл среды). В качестве объекта исследования использовали культуру фибробластов легкого человека после 3-4 пассажей в концентрации 5·104 клеток/мл. Клеточный материал вводили в камеру и размещали на фильтре. Благодаря работе роликового насоса в системе создавалось равномерное направленное движение питательной среды со скоростью 2,1-2,4 мм³/мин. Первичную культуру инкубировали при постоянном движении среды с соблюдением условий культивирования в течение 24 и 48 ч. В качестве контроля фибробласты культивировали на полупроницаемом фильтре, помещенном в чашку Петри. Клеточный материал исследовали с помощью цитохимических методов. Методом компьютерной морфометрии цифровых изображений определяли оптическую плотность адгезированных к фильтру фибробластов. Статистическую обработку результатов проводили с использованием метода попарных сравнений связанных выборок. Достоверность различий между сравниваемыми группами оценивалась с помощью непараметрического критерия Уилкоксона (pZ).

Результаты

При проточном культивировании фибробластов получены следующие результаты. Через 24 ч от начала эксперимента цитохимически в культивируемых клетках отмечалась умеренная активность α-нафтилацетатэстеразы (20,97±0,90) и щелочной фосфатазы (10,23±1,05). Площадь клеточной поверхности составляла в среднем 238,94±5,36.
Спустя 48 ч в описываемых клетках отмечалось повышение активности обоих ферментов по сравнению с исходными показателями и клетками, культивируемыми в стандартных условиях (pZ<0,01). При этом уровень α-нафтилацетатэстеразы составлял 28,13±0,87, щелочной фосфатазы – 14,67±1,21. Площадь же клеточной поверхности фибробластов в среднем составляла 179,43±7,81 (pZ<0,001).
При культивировании фибробластов в стационарных условиях на протяжении всей серии экспериментов цитохимически в клетках отмечалась незначительная активность α-нафтилацетатэстеразы, которая постепенно повышалась в процессе культивирования (22,56±0,95 через 24 часа и 26,98±0,89 через 48 часов, pZ<0,05). Щелочная фосфатаза в культивируемых клетках не выявлялась. Площадь клеточной поверхности составляла через 24 часа – 307,19±6,02, через 48 часов – 211,66±5,29 (pZ<0,001).
Данные цитохимических исследований фибробластов, культивируемых в проточных условиях, по сравнению с показателями в статических условиях свидетельствуют о повышении активности как специфических (щелочная фосфатаза), так и неспецифических (α-нафтилацетатэстеразы) ферментных систем, что указывает на ускорение процесса дифференцировки клеток. Подтверждением этому служит и более существенное по сравнению с контролем уменьшение площади клеточной поверхности культивируемых в проточных условиях фибробластов как отражение степени их созревания.

Заключение

Таким образом, при культивировании фибробластов человека in vitro в условиях направленного движения питательной среды отмечается повышение их внутриклеточной ферментативной активности. При модулирующем влиянии факторов микроокружения (направленный поток жидкости, внеклеточный матрикс) ускоряется процесс дифференцировки клеток в зрелые формы. Полученные данные расширяют представление о влиянии микроокружения на морфофункциональный статус клеток фибробластической популяции и позволяют с новых позиций подойти к изучению клеточных механизмов развития фиброваскулярной пролиферации в полости глазного яблока.


Белые ночи - 2019 Сателлитные симпозиумы в рамках XXV Международного офтальмологического конгрессаБелые ночи - 2019 Сателлитные симпозиумы в рамках XXV Междун...

Новые технологии в офтальмологии - 2019 Всероссийская научно-практическая конференцияНовые технологии в офтальмологии - 2019 Всероссийская научно...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии – 2019 ХVII Всероссийская научно-практическаяконференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии –...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2019»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Роговица III. Инновации  лазерной коррекции зрения и кератопластикиРоговица III. Инновации лазерной коррекции зрения и кератоп...

ХVI Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты»ХVI Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вме...

Сессии в рамках III Всероссийского конгресса «Аутоимунные и иммунодефицитные заболевания»Сессии в рамках III Всероссийского конгресса «Аутоимунные и ...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

«Живая» хирургия в рамках конференции  «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018»«Живая» хирургия в рамках конференции «Современные технолог...

Сателлитные симпозиумы в рамках XI Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках XI Российского общенациональ...

Федоровские чтения - 2018 XV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2018 XV Всероссийская научно-практическ...

Актуальные проблемы офтальмологии XIII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XIII Всероссийская научная...

Восток – Запад 2018  Международная конференция по офтальмологииВосток – Запад 2018 Международная конференция по офтальмологии

«Живая хирургия» в рамках конференции «Белые ночи - 2018»«Живая хирургия» в рамках конференции «Белые ночи - 2018»

Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Между...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизонты -  2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизон...

Сателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКОСателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКО

VIII Евро-Азиатская конференция по офтальмохирургии (ЕАКО)VIII Евро-Азиатская конференция по офтальмохирургии (ЕАКО)

XVII Всероссийская школа офтальмологаXVII Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018 ХVI Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица II. Топография роговицы. Аберрации глаза 2018 Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица II. Топография роговицы. Аберрации глаза 2018 Научн...

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Top.Mail.Ru


Open Archives