Спектральный анализ флуоресценции флуорофоров липофусциновых гранул ретинального пигментного эпителия в эксперименте

Актуальность Работа направлена на повышение информативности нового неинвазивного метода диагностики в офтальмологии — метода аутофлуоресценции глазного дна. Метод основан на регистрации in vivo аутофлуоресценции липофусциновых гранул (ЛГ), накапливающихся с возрастом в норме в клетках ретинального пигментного эпителия (РПЭ). При развитии патологического процесса в сетчатке и клетках РПЭ картина аутофлуоресценции глазного дна существенным образом меняется. Источником аутофлуоресценции ЛГ являются различные флуорофоры — производные ретиналя (хромофорной группы зрительных пигментов). Считается, что основным флуорофором, вносящим вклад в картину аутофлуоресценции глазного дна, является N-ретинил-N-ретинилиденэтаноламин (А2Е). Однако в ряде публикаций имеются сведения о накоплении в клетках РПЭ и других атипических флуорофоров, потенциально способных оказывать фототоксическое действие.
Цель — определение спектральных характеристик различных флуорофоров липофусциновых гранул ретинального пигментного эпителия трупных глаз человека разных возрастных групп.
Материал и методы. Анализ флуоресценции нормальных и атипических (патологических) флуорофоров ЛГ в изолированных клетках РПЭ, выделенных из кадаверных глаз человека разных возрастных групп, проводили по результатам флуоресцентной цитоспектрографии, выполненной на флуоресцентном конфокальном микроскопе. Всего изучено 127 образцов, выделенных из 67 глаз 37 доноров-трупов.
Результаты. Сравнительное исследование относительного содержания различных флуорофоров в ЛГ, полученных из одиночных кадаверных глаз без видимой патологии, показало, что с возрастом увеличивается как относительное содержание окисленных и деградированных форм А2Е, так и содержание иных флуорофоров. Таким образом, в развитии дегенеративных процессов в сетчатке и РПЭ важную роль играют как А2Е, другие флуорофоры/группы флуорофоров, так и продукты их фотоокисления.

Выводы.
1. С помощью флуоресцентной конфокальной микроскопии ЛГ в изолированных клетках РПЭ, выделенных из кадаверных глаз человека разных возрастных групп, установлено, что с возрастом происходит накопление большого количества флуорофоров/групп флуорофоров в клетках РПЭ, что отражается на суммарной картине флуоресценции глазного дна.
2. В результате анализа флуорофоров ЛГ установлено, что хорошо известный флуорофор А2Е не является доминирующим при возбуждении аутофлуоресценции длиной волны 488 нм, используемой при исследовании на конфокальном сканирующем лазерном офтальмоскопе.