Онлайн доклады

Онлайн доклады

Научно-образовательные вебинары

Научно-образовательные вебинары

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ-2020

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ-2020

Расширенное заседание Экспертного Совета по проблемам глаукомы и группы «Научный авангард»

Конгресс

Расширенное заседание Экспертного Совета по проблемам глаукомы и группы «Научный авангард»

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Съезда Общества офтальмологов России

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Съезда Общества офтальмологов России

Современные технологии лечения заболеваний глаз. Научно-практическая конференция

Конференция

Современные технологии лечения заболеваний глаз. Научно-практическая конференция

Пироговский офтальмологический форум

Конференция

Пироговский офтальмологический форум

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Научно-образовательные вебинары

Научно-образовательные вебинары

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ-2020

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ-2020

Расширенное заседание Экспертного Совета по проблемам глаукомы и группы «Научный авангард»

Конгресс

Расширенное заседание Экспертного Совета по проблемам глаукомы и группы «Научный авангард»

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Съезда Общества офтальмологов России

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Съезда Общества офтальмологов России

Современные технологии лечения заболеваний глаз. Научно-практическая конференция

Конференция

Современные технологии лечения заболеваний глаз. Научно-практическая конференция

Пироговский офтальмологический форум

Конференция

Пироговский офтальмологический форум

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Все видео...

Морфологическая характеристика ретинального пигментного эпителия, культивируемого in vitro, как источника клеточной репарации



Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН,
Учреждение РАН «Центральная клиническая больница РАН», г. Москва
  
  Трансплантология сегодня — одно из лидирующих направлений медицины. В офтальмологии клеточные технологии на основе спектра стволовых и малодифференцированных клеток мало изучены и практически не реализованы. Между тем, в перспективе они могут быть использованы для решения проблемы репарации сетчатой оболочки глаза. Многие заболевания глаза, приводящие к потере зрения, такие как пигментный ретинит, возрастная макулодистрофия, диабетическая ретинопатия и глаукома, сопровождаются гибелью нейронов сетчатки. В связи с чем, поиск источника клеточной регенерации является чрезвычайно актуальной задачей современности.
  Совсем недавно считали, что нейрональные клетки центральной нервной системы (ЦНС) млекопитающих в период эмбрионального и раннего постнатального развития за счет экспрессии большого количества морфогенетически важных факторов имеют высокий регенеративный потенциал. В ходе дифференцировки нервной ткани эти факторы исчезают, а способность к регенерации утрачивается. Сегодня взгляды на регенерацию нервных клеток кардинально изменились. В мозге и сетчатке взрослых млекопитающих, к которым относится и человек, были выявлены клетки, обладающие свойствами стволовых клеток. В сетчатке свойствами стволовости наделяют ретинальный пигментный эпителий (РПЭ). Терапевтический потенциал РПЭ представляет особый интерес. Биологическая эволюция приспособила его для защиты сетчатки. Нейропротекторные свойства РПЭ осуществляет, экспрессируя ряд специфических факторов.
  
  Цель — изучить характеристику РПЭ, культивируемого in vitro, как источника клеточной репарации сетчатки.
  
  Материал и методы. Источником РПЭ служил аутопсийный материал. Глазные яблоки обрабатывались через 12–48 часов после смерти доноров. После процедуры извлечения РПЭ переносили в стерильную пробирку, пипетировали и центрифугировали 5 минут при 600 об/мин до осаждения клеток. Клетки ресуспендировали в ростовой среде, состоящей из DMEM/F12, 100 U/ml пенициллина и 100 μg/ml стрептомицина (Sigma, USA). Далее РПЭ равномерно распределяли в 1–2 стерильных пластиковых флаконах площадью 25 см². Первичную культуру РПЭ выращивали на двух средах DMEM/F12 и DMEM/ F12 с добавлением антибиотиков (см выше). Культуры культивировали при 37 °С, влажности воздуха 95 %, 5 %СО2. Через 3–4 дня среду аспирировали и удаляли. Клеточное прикрепление и образование колоний контролировали методом фазовоконтрастной микроскопии. Прикрепление клеток продолжалось в течение 2 недель.
  
  Результаты и обсуждение. Свежевыделенные эксплантаты РПЭ состояли из небольших групп и единичных клеток полигональной формы, а также крупных густо пигментированных эпителиоидных клеток.
  Жизнеспособные клетки РПЭ начинали делиться и создавать пигментированные первичные колонии сразу после прикрепления. Процесс адгезии клеток начинался в конце первых суток (24 часа) и продолжался до двух недель. Распластываясь на дне пластикового флакона, крупные клетки РПЭ принимали плоскую и полигональную форму. Гранулы пигмента собирались глыбками вокруг ядра, содержащего 1 или 2 ядрышка. Цитоплазма на периферии была тонкой и относительно прозрачной. Межклеточные границы были резко очерчены. Деление РПЭ сопровождалось измельчением размеров клеток и депигментацией. По мере созревания колоний в клетках полностью пропадал пигмент.
  На рост колоний играл факт плотности посадки: при высокой плотности — конфлюэнтный монослой образовывался быстро, при низкой — рост замедлялся. В первом случае клетки приобретали гексагональную форму; а во втором — веретенообразную с отростками или без них. Клетки РПЭ удлинялись при большем пространстве для роста. Достижение конфлюэнтности монослоем РПЭ ассоциировалось с гексагональной формой, характерной для эпителиоподобного типа клеток. Деление и миграцию РПЭ фиксировали исключительно по периферии колонии. В центре колонии клетки оставались статичными и не пролиферировали, т. е. РПЭ дедифференцировался. На скорость роста и плотность РПЭ в пласте влияли добавления в питательную среду различных ростовых факторов. В среде с N2 и bFGF колонии были более плотными и многочисленными по сравнению с культурами без них. При плотной посадке клеток РПЭ наблюдали некую многослойность: один пласт клеток начинал нарастать на другой.
  
  Выводы. Нативные клетки РПЭ при культивировании способны формировать неподвижный монослой, сохраняя способность к делению. В условиях in vitro РПЭ дедифференцируется и трансформируется, обретая округлую/веретенообразную клеточную форму, способность к активному делению и миграции, процесс сопровождается утратой способности синтеза пигмента. Таким образом, в зависимости от условий культивирования in vitro РПЭ может менять свою дифференцировку, переходя из состояния эпителиальной дифференцировки в дедифференцированное состояние и обратно. В сравнении с дифференцированными клетками дедифференцированный РПЭ обладает большими потенциями: он более активно пролиферирует, мигрирует, чрезвычайно пластичен. т. е. он может служить источником клеточной репарации сетчатки при повреждении ее различными патологическими процессами.


Страница источника: 241

Просмотров: 686