Онлайн доклады

Онлайн доклады

Глаукома. Избранные вопросы патогенеза, профилактики, диагностики, лечения. Всероссийская офтальмологическая конференция

Глаукома. Избранные вопросы патогенеза, профилактики, диагностики, лечения. Всероссийская офтальмологическая конференция

Терапия глаукомы. Практический подход и поиск решений в дискуссии

Терапия глаукомы. Практический подход и поиск решений в дискуссии

NEW ERA Хирургическое лечение глаукомы: НГСЭ

NEW ERA Хирургическое лечение глаукомы: НГСЭ

Сателлитные симпозиумы в рамках 22-го Всероссийского научно-практического конгресса «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках 22-го Всероссийского научно-практического конгресса «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ - 2022

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ - 2022

Современные достижения лазерной офтальмохирургии Всероссийский научный симпозиум

Современные достижения лазерной офтальмохирургии Всероссийский научный симпозиум

Юбилейная X научно-практическая конференция, посвященная 35-летию Чебоксарского филиала ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н. Федорова»

Юбилейная X научно-практическая конференция, посвященная 35-летию Чебоксарского филиала ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н. Федорова»

NEW ERA Особенности лечения отслойки сетчатки

NEW ERA Особенности лечения отслойки сетчатки

NEW ERA Оптическая когерентная томография. Критерии активности макулярной неоваскуляризации

NEW ERA Оптическая когерентная томография. Критерии активности макулярной неоваскуляризации

NEW ERA Хирургия осложнённой катаракты

NEW ERA Хирургия осложнённой катаракты

Шовная фиксация ИОЛ

Мастер класс

Шовная фиксация ИОЛ

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Восток - Запад 2022 Международная конференция по офтальмологии

Восток - Запад 2022 Международная конференция по офтальмологии

Целевые уровни ВГД в терапии глаукомы

Вебинар

Целевые уровни ВГД в терапии глаукомы

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции «Невские горизонты - 2022»

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции «Невские горизонты - 2022»

Новые технологии в офтальмологии 2022

Новые технологии в офтальмологии 2022

ОКТ: новые горизонты

Сателлитный симпозиум

ОКТ: новые горизонты

Превентивная интрасклеральная фланцевая фиксация ИОЛ при подвывихе хрусталика

Вебинар

Превентивная интрасклеральная фланцевая фиксация ИОЛ при подвывихе хрусталика

Лечение глаукомы: инновационный вектор - 2022. III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Лечение глаукомы: инновационный вектор - 2022. III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Вебинар компании «Rayner»

Вебинар компании «Rayner»

Цикл онлайн дискуссий компании «Акрихин» «О глаукоме и ВМД в прямом эфире»

Цикл онлайн дискуссий компании «Акрихин» «О глаукоме и ВМД в прямом эфире»

Алгоритм ведения пациентов с астенопией после кераторефракционных операций

Вебинар

Алгоритм ведения пациентов с астенопией после кераторефракционных операций

Cовременные технологии диагностики патологий заднего отдела глаза

Сателлитный симпозиум

Cовременные технологии диагностики патологий заднего отдела глаза

Вебинары компании  «Акрихин»

Вебинары компании «Акрихин»

Снижение концентрации «Бримонидина», как новое решение в терапии у пациентов с глаукомой

Вебинар

Снижение концентрации «Бримонидина», как новое решение в терапии у пациентов с глаукомой

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Актуальные вопросы офтальмологии: в фокусе – роговица

Вебинар

Актуальные вопросы офтальмологии: в фокусе – роговица

XIX Конгресс Российского глаукомного общества  «19+ Друзей Президента»

XIX Конгресс Российского глаукомного общества «19+ Друзей Президента»

Пироговский офтальмологический форум

Пироговский офтальмологический форум

Кератиты, язвы роговицы

Вебинар

Кератиты, язвы роговицы

Актуальные вопросы офтальмологии

Вебинар

Актуальные вопросы офтальмологии

Всероссийский консилиум. Периоперационное ведение пациентов с глаукомой

Сателлитный симпозиум

Всероссийский консилиум. Периоперационное ведение пациентов с глаукомой

Трансплантация роговично-протезного комплекса у пациента с васкуляризированным бельмом роговицы

Трансплантация роговично-протезного комплекса у пациента с васкуляризированным бельмом роговицы

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Глаукома. Избранные вопросы патогенеза, профилактики, диагностики, лечения. Всероссийская офтальмологическая конференция

Глаукома. Избранные вопросы патогенеза, профилактики, диагностики, лечения. Всероссийская офтальмологическая конференция

Терапия глаукомы. Практический подход и поиск решений в дискуссии

Терапия глаукомы. Практический подход и поиск решений в дискуссии

NEW ERA Хирургическое лечение глаукомы: НГСЭ

NEW ERA Хирургическое лечение глаукомы: НГСЭ

Сателлитные симпозиумы в рамках 22-го Всероссийского научно-практического конгресса «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках 22-го Всероссийского научно-практического конгресса «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ - 2022

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ - 2022

Современные достижения лазерной офтальмохирургии Всероссийский научный симпозиум

Современные достижения лазерной офтальмохирургии Всероссийский научный симпозиум

Юбилейная X научно-практическая конференция, посвященная 35-летию Чебоксарского филиала ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н. Федорова»

Юбилейная X научно-практическая конференция, посвященная 35-летию Чебоксарского филиала ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н. Федорова»

NEW ERA Особенности лечения отслойки сетчатки

NEW ERA Особенности лечения отслойки сетчатки

NEW ERA Оптическая когерентная томография. Критерии активности макулярной неоваскуляризации

NEW ERA Оптическая когерентная томография. Критерии активности макулярной неоваскуляризации

NEW ERA Хирургия осложнённой катаракты

NEW ERA Хирургия осложнённой катаракты

Шовная фиксация ИОЛ

Мастер класс

Шовная фиксация ИОЛ

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Все видео...

Количественная оценка секреции VEGF и PEDF клетками ретинального пигментного эпителия глаза взрослого человека в культуре



¹ Учреждение РАН «Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН»,
² Учреждение РАН «Центральная клиническая больница РАН», г. Москва
  
  Дисбаланс про- и антиангиогенных факторов играет важную роль в развитии и прогрессировании ряда дегенеративно-дистрофических заболеваний глаз, включая возрастную макулярную дегенерацию (ВMД). Ключевым проангиогенным фактором, запускающим патологический неоангиогенез признан фактор роста эндотелия сосудов (VEGF). Контроль проангиогенной активности VEGF осуществляет другой пептид: фактор роста пигментного эпителия (PEDF). По влиянию на эндотелиальные клетки сосудов сетчатки эти факторы роста выступают как антагонисты. VEGF, стимулирует пролиферацию и миграцию эндотелиальных клеток, предотвращает их апоптоз, оказывая проангиогенный эффект. PEDF ингибирует VEGF-индуцированную активность эндотелиальных клеток, подавляя передачу сигналов в PI3 K/Akt пути. Показано, что увеличение уровня VEGF и/или уменьшение уровня PEDF в стекловидном теле и во влаге передней камеры коррелирует с прогрессированием ВМД и ПДР. При этом диапазон вариабельности показателей их продукции в норме точно не установлен. Между тем, именно эти параметры показывают отклонения в ту или иную сторону и определяют вид антиангиогенной терапии: блокирование/подавление VEGF-зависимого сигнального пути ангиогенеза или замещение дефицита антиангиогенных факторов роста.
  Установлено, что основными клеткамипродуцентами VEGF и PEDF является ретинальный пигментный эпителий (РПЭ). Признание этого факта a priore является одним из аргументов в пользу предположения, что трансплантация РПЭ может решить проблему анатомической, морфологической и функциональной сохранности сетчатки при AMD. Известно, что секреция VEGF и PEDF в здоровом глазе осуществляется на противоположных сторонах клеток РПЭ: VEGF секретируется на базальной стороне, а PEDF — на апикальной стороне. Количественная оценка секреции VEGF и PEDF при культивировании клеток РПЭ представляет научно-практический интерес в аспекте изучения их баланса, или вариабельности этих показателей в условиях нормального поддержания жизнедеятельности РПЭ.
  
  Цель — количественная оценка секреции VEGF и PEDF клетками РПЭ взрослого человека в условиях культивирования.
  
  Материал и методы. Секрецию VEGF и PEDF изучали в кондиционированных средах первичных культур и культур 1-го и 2-го пассажей клеток РПЭ. Для получения адгезивных культур клетки РПЭ из аутопсийного материала от 5 доноров в возрасте от 32 до 58 лет с неизвестным офтальмологическим анамнезом культивировали в пластиковых флаконах площадью 25 см². В среду для культивирования (DMEM/F12) добавляли 10 % эмбриональную телячью сыворотку, N2, оФРФ и пенициллинстрептомицин до достижения клеточными культурами конфлюэнтного монослоя. Перед пассированием РПЭ клеточные культуры переводили на 48 ч на бессывороточную среду (DMEM/F12 с добавкой N2, оФРФ и пенициллина-стрептомицина). Супернатанты собирали дважды: перед переводом клеточной культуры РПЭ на бессывороточную среду (синоним: кондиционированная сывороточная среда) в течение 72 ч (КСС), и перед непосредственным пассированием клеточной культуры РПЭ (синоним: кондиционированная бессывороточная среда) в течение 48 ч (КБС). Супернатанты забирали, центрифугировали, аликвотировали и хранили при температуре — 80 °C до количественной оценки факторов роста.
  Для количественного определения PEDF в КСС и КБС использовали твердофазный иммуноферментный анализ. Сэндвич-анализ проводили при помощи набора «Human PEDF ELISA» (BioVendor, Чехия), чувствительного до уровня 0,045 нг/мл, в соответствии с инструкцией производителя без этапа разведения образцов. Образцы оценивали в дубликатах. Измерение оптической плотности образцов проводили при длине волны 450 нм с использованием референс-светофильтра с длиной волны 630 нм на микропланшетном фотометре StatFax2100 (Awareness Technology INC, США).
  VEGF в КБС анализировали методом восьмицветной проточной цитометрии на приборе «FACS Canto-II» (Becton Dickinson, США).
  
  Результаты и обсуждение. Уровень PEDF в КСС первичных культур и культур 1-го и 2-го пассажей клеток РПЭ составил: 6,0±1,3; 5,5±2,1 и 5,2±2,0 нг/мл, соответственно. Уменьшение концентрация PEDF в супернатантах культур клеток РПЭ ассоциировалось со снижением их пролиферативной активности и завершением экспоненциальной фазы роста культуры, а также с отсутствием сыворотки в ростовой среде. Увеличение секреции PEDF, напротив, отмечалось при переводе клеточных культур с сывороточной среды на бессывороточную. Так, уровень PEDF в КБС первичных культур и культур 1-го и 2-го пассажей клеток РПЭ составил: 7,20±0,60; 5,50±2,30 и 6,75±0,95 нг/мл, соответственно.
  Уровень VEGF в КБС первичных культур и культур 1-го и 2-го пассажей сильно варьировал и составил: 578,99±514,54; 330,17±268,74 и 402,55±263,08 пг/мл, соответственно.
  
  Выводы. В условиях культивирования клетки РПЭ взрослого человека сохраняют способность к синтезу и секреции PEDF и V EGF.
  Увеличение уровня секреции PEDF ассоциируется со снижением пролиферативной активности клеток РПЭ и наблюдается в конце экспоненциальной фазы роста культуры. Снижение секреции PEDF отмечается в клеточных культурах РПЭ по мере пассирования, т. е. со старением культуры.
  Концентрация VEGF в супернатантах первичных культур и культур 1-го и 2-го пассажей клеток РПЭ была умеренной, ее значения были сопоставимы с литературными данными по уровню VEGF в стекловидном теле больных с непролиферативной стадией ДР. По мере пассирования клеточных культур РПЭ прослеживалась тенденция к снижению уровня секреции VEGF.
  Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (ГК № 11-04-00510) и Министерства образования и науки Российской Федерации (ГК № 16.512.11.2158).


Страница источника: 243

OAI-PMH ID: oai:eyepress.ru:article9940
Просмотров: 6416




Johnson & Johnson
Bausch + Lomb
Reper
NorthStar
ЭТП
Rayner
Senju
Фармстандарт
Гельтек
santen
Акрихин
Ziemer
Tradomed
Nanoptika
R-optics
Фокус
sentiss
nidek