Онлайн доклады

Онлайн доклады

Научно-образовательные вебинары

Научно-образовательные вебинары

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ-2020

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ-2020

Расширенное заседание Экспертного Совета по проблемам глаукомы и группы «Научный авангард»

Конгресс

Расширенное заседание Экспертного Совета по проблемам глаукомы и группы «Научный авангард»

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Съезда Общества офтальмологов России

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Съезда Общества офтальмологов России

Современные технологии лечения заболеваний глаз. Научно-практическая конференция

Конференция

Современные технологии лечения заболеваний глаз. Научно-практическая конференция

Пироговский офтальмологический форум

Конференция

Пироговский офтальмологический форум

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Научно-образовательные вебинары

Научно-образовательные вебинары

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ-2020

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ-2020

Расширенное заседание Экспертного Совета по проблемам глаукомы и группы «Научный авангард»

Конгресс

Расширенное заседание Экспертного Совета по проблемам глаукомы и группы «Научный авангард»

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Съезда Общества офтальмологов России

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Съезда Общества офтальмологов России

Современные технологии лечения заболеваний глаз. Научно-практическая конференция

Конференция

Современные технологии лечения заболеваний глаз. Научно-практическая конференция

Пироговский офтальмологический форум

Конференция

Пироговский офтальмологический форум

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Все видео...

Способ количественной оценки эффективности клеточных технологий при репарации сетчатки



Учреждение РАН «Центральная клиническая больница РАН»,
Учреждение РАМН «НИИ глазных болезней РАМН»,
Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН, г. Москва
  
   Основная цель клеточной терапии — замена, восстановление или увеличение сроков биологической функции поврежденной ткани или органа. Это достигается трансплантацией изолированных и специализированных клеток в целевой орган в достаточном «количестве и качестве», чтобы их выживание было достаточно долгим для восстановления функции. К настоящему моменту отсутствуют количественные методы оценки эффективности клеточных технологий. Между тем, они необходимы при подборе адекватной дозы клеточного трансплантата, изучении механизмов, сравнения эффективности разных подходов.
  
  Цель — разработка количественных методов оценки эффективности клеточной технологии трансплантации ретинального пигментного эпителия (РПЭ).
  
  Материал и методы. Формировали экспериментальную модель атрофии РПЭ на обоих глазах кроликов, используя метод фотодинамической терапии фотосенсиблизированных фотодитазином тканей глаза. Серия трансплантаций выполнена 3 кроликам (№ 1, 2, 4) (3 глаза) через 3,5 мес. после воспроизведения модели ретинального повреждения. Трансплантацию культивированных клеток 1 и 4 пассажей РПЭ взрослого человека проводили в субретинальное пространство инсулиновым шприцем в дозе 1 млн кл. в 0,02–0,03 мл физ. раствора. В качестве контроля служили парные глаза без введения РПЭ. Животных выводили из эксперимента на 14, 30 и 45 сутки после трансплантации РПЭ. Глаза энуклеировали и изучали морфологически.
  Энуклеированные глаза (n=6) префиксировали смесью параформальдегида и глютаральдегида по Карновскому, фиксировали в 1 % растворе тетраоксида осмия, заливали в аралдит. Готовили полутонкие (1 мкм) срезы. Окрашивали метиленовым синим — азуром II и основным фуксином.
  Трансплантат РПЭ человека в глазу кролика верифицировали иммунофлюоресцентным методом с первичными антителами Human nuclei (маркер ядер человека). Окрашивали каждый 10-й серийный срез (выполнено 10 срезов) глаза кролика. В качестве положительного контроля использовали криостатные срезы глаза взрослого человека.
  Количественная оценка терапевтического потенциала технологии трансплантации РПЭ проводили комплексно на основании сравнения в опыте и контроле следующих количественных показателей:
  — площади дефекта в наружном отделе фоторецепторов;
  — плотности фоторецепторов на единицу площади в зоне просмотра;
  — суммарной площади дефектов в наружном зернистом слое;
  — соотношения площади дефектов к плотности клеточных элементов в зоне воздействия;
  — плотности клеток в слое наружном зернистом на единицу площади.
  Таким образом, в целом использовали 5 количественных показателей, позволяющих дать оценку эффективности клеточной технологии.
  Площадь дефекта анализировали с помощью программы анализа эффективности ФДТ на фундус-камере. Индекс плотности фоторецепторов на единицу площади вычисляли колориметрически с помощью программы Photoshop следующим образом. Из микрофотографий одинакового увеличения контроля и опыта вырезались прямоугольные фрагменты одинакового размера с фоторецепторными отростками. Затем с помощью инструмента выделения «Волшебная палочка» с допуском 50 % выделяли пиксели составляющие изображение фоторецепторов и подсчитывали их количество, которое затем делили на количество пикселей всего изображения. Соответственно большему количеству пикселей, составляющих изображение фоторецепторов, соответствовал более высокий индекс плотности. Индекс дефектов в слое фоторецепторов вычислялся аналогичным образом, с той лишь разницей, что выделялись пиксели, составляющие изображение пустых пространств между фоторецепторами.
  Индекс суммарной площади дефектов в наружном зернистом слое оценивали аналогичным образом. Плотность клеток подсчитывали по количеству ядер на определенном отрезке сетчатки.
  
  Результаты и обсуждение. Результаты применения разработанного нами способа количественной оценки эффективности клеточной технологии трансплантации ретинального пигментного эпителия человека в глаз кролика с моделью атрофии РПЭ представлены в таблице.
  
  Выводы. Разработанный нами способ количественной оценки позволяет дать комплексную оценку эффективности клеточной технологии трансплантации РПЭ, сформировать доказательную базу на основе статистически достоверной разницы между опытом и контролем для подтверждения выводов, сопоставить результаты одной клеточной технологии с другой, осуществить подбор адекватной дозы вводимых клеток, проследить результаты в динамике. Она может быть рекомендована для практического применения.
  


Страница источника: 247

Просмотров: 742