Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Экспериментальные модели заболеваний сетчатки для разработки клеточных технологий (экспериментальные исследования)


1Центральная клиническая больница Российской академии наук
2Научно-исследовательский институт глазных болезней Российской академии медицинских наук
3Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова Российской академии наук


Учреждение РАН «Центральная клиническая больница РАН»,
Учреждение РАМН «НИИ глазных болезней РАМН»,
Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН, г. Москва
  
  Известно, что стратегия экспериментального изучения возможностей и эффективности современных способов лечения заболеваний сетчатки направлена на тщательный выбор экспериментальной модели заболевания и анализ ее адекватности поставленным задачам исследования. На это ориентированы программы поиска новых технологий, лекарств и способов их доклинического изучения. Поскольку наши экспериментальные исследования, по сути, посвящены доклиническим этапом изучения эффективности применения клеточной технологии трансплантации РПЭ при дегенеративнодистрофических заболеваниях глаз, то мы провели поиск уже известных моделей и разработали собственные модели, пригодные для этих целей. При выборе экспериментальных моделей дегенеративнодистрофических заболеваний сетчатки ориентировались на гистогенетическую приближенность к существующим в природе заболеваниям человека. В доступной литературе оказалось всего несколько моделей, используемых в аналогичных целях.
  Так, Korte с соавторами (1986) использовали системное внутривенное введение экспериментальным животным раствора NaIO3 из расчета дозы 35 мг/кг веса. В качестве экспериментальных животных служили мыши. После инъекции указанного раствора у животных к 14-му дню развилась ретинопатия с частичной атрофией РПЭ. Одним из недостатков этой модели является возможность самопроизвольной реставрации хориоретинального комплекса примерно к 21 дню без лечения. Это существенно затрудняет использование указанной модели для оценки эффективности трансплантации РПЭ в качестве терапевтической технологии.
  Wang с соавторами (1996) формировали модель жировой дистрофии хориоидеи и сетчатки с атрофией РПЭ у генно-модифицированных мышей, с дефицитом орнитин-дельта-аминотрансферазы. Этот фермент отвечает за переработку и усвояемость липидов разной плотности и молекулярного веса.
  Третьи авторы формировали модель атрофии хориокапилляров и РПЭ, нанося механическую травму, в ходе которой развивалась отслойка сетчатки и с депонированием в субретинальном пространстве обломков РПЭ. В качестве экспериментального животного предложены кролики.
  Kuwabara с соавт. (1981) использовали в этих же целях гидрохлорид L-орнитина, вводя его в полость стекловидного тела. В ответ на введение препарата развивался отек РПЭ, нарастающий в течение 4 часов после инъекции и нивелирующийся к 24-м часам. После этого развивалась атрофия РПЭ разной степени выраженности. К указанным изменениям позднее присоединялись дистрофия фоторецепторов. Модель развивалась одинаково хорошо у мышей, крыс, кроликов и обезьян.
  Как видно из приведенных публикаций, акцент воздействия при формировании модели дегенеративно-дистрофического заболевания сетчатки оказывался преимущественно на РПЭ. Используя этот принцип, мы поставили перед собой цель: разработать собственную модель атрофии РПЭ и хориокапиллярного слоя, а также модель атрофии диска зрительного нерва (ДЗН).
  
  Материал и методы. Экспериментальным животным формировали модели заболевания и лечили в полном соответствии с Резолюцией ARVO «По использованию животных в экспериментальных исследованиях», Принципами лечения лабораторных животных (публикация № 86-23 в NIH от 1985 г.) и ныне действующими правилами Good Clinical Practice (GCP).
  Модели атрофии РПЭ и ДЗН создавали на кроликах с помощью фотодинамического (ФДТ) повреждения сетчатки. Для этого животных предварительно сенсибилизировали фотосенсибилизатором (ФС) хлоринового ряда, в частности, радахлорином. Затем проводили ФДТ лазерным излучением соответствующей длиной волны, находящейся в максимуме поглощения ФС. Дозу излучения подбирали в ходе сеанса. Она была одинаковой на парных глазах. Предполагалось, что один глаз будет контролем — моделью заболевания, а на парном глазу будет выполняться имплантация донорского РПЭ на участок дефекта РПЭ реципиента.
  Выбор животных определялся размером глаза, что позволяло верифицировать ятрогенную зону на глазном дне с большей точностью и уверенностью.
  Предоперационная подготовка всех животных выполнена в едином алгоритме. Каждому кролику введено в ягодичную мышцу 0,5 мл/кг 5 % раствора кетамина и 0,5 мл/кг веса 2 % раствора рометара. В комбинации с местной инстилляционной анестезией 1 % раствором алкаина в конъюнктивальные своды устранялись любые болевые ощущения. Такая композиция препаратов позволяла достигать полной обездвиженности экспериментальных животных через 15–20 минут и поддерживать ее в течение 1,5–2 часов. В течение этого времени создавались все условия для проведения эксперимента.
  Суть эксперимента заключалась в дозированном воздействии на структуры глазного дна лазерным излучением длиной волны 669 нм различной мощности после предварительной фотосенсибилизации радахлорином в дозе 1,0 мг/кг веса. Размер светового пятна в фокальной плоскости также являлся постоянной величиной и составлял 2 мм в диаметре. Эффект контролировали визуально. Фокусировку лазерного воздействия осуществляли с помощью линзы Майнстера 130?. Мощность излучения была подобрана эмпирически. При этом ориентировались на скорость развития селективного фототромбоза в сосуде сетчатки или ожога сетчатки. Оптимальной оказалась мощность в 300 дж/см², в дальнейшем она стала величиной постоянной и не менялась в ходе эксперимента.
  
  Результаты и обсуждение. Известно, что хлорины обладают тропизмом к эндотелиальным клеткам сосудов, в которых накапливаются в первые 15–45 минут после системного введения. На основании этого факта было сделано предположение о том, что депонирование препарата в указанные сроки произойдет в сосудах хориоидеи или сетчатки, а избирательное дозированное облучение приведет к индукции фототромбозов, которые в ранние сроки приведут к экссудативной отслойке РПЭ или ишемии ЗН, а в более поздние сроки приведут к атрофии РПЭ и ДЗН.
  С помощью указанной выше методики было сформировано 24 модели у 12 кроликов. При этом в 12 случаях воздействие осуществляли в 1 мм над и под ДЗН. Получали на глазном дне экспериментального животного вначале очаг экссудативной отслойки РПЭ, переходящий в поздние сроки в атрофию РПЭ. Аналогичная картина глазного дна развивается при болезнях географической центральной ползучей атрофии РПЭ, а также при осложненной миопии высокой степени, врожденных абиотрофиях, возрастной форме макулярной дегенерации сетчатки и т. д.
  Воздействие на магистральные сосуды сетчатки в местах их выхода на ДЗН сопровождалось фототромбозами ЦВС с последующей атрофией ДЗН. Мы получили 12 моделей тромбоза ЦВС у 6 кроликов на парных глазах.
  
  Выводы. Разработанные модели заболеваний глазного дна легко воспроизводимы, пригодны для оценки эффективности клеточных технологий и могут быть рекомендованы в этих целях.


Страница источника: 249


Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании «Алкон»Школа рефракционного хирурга. Сателлитный симпозиум компании...

Сложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеосимпозиум в формате 3DСложные и нестандартные случаи в хирургии катаракты. Видеоси...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракционной хирургии - 2019Современные технологии катарактальной, роговичной и рефракци...

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках XII Российского общенационал...

Федоровские чтения - 2019 XVI Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2019 XVI Всероссийская научно-практичес...

Актуальные проблемы офтальмологии XIV Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XIV Всероссийская научная ...

Современные тенденции развития офтальмологии - фундаментально-прикладные аспекты Всероссийская научно-практическая конференцияСовременные тенденции развития офтальмологии - фундаментальн...

Восток – Запад 2019 Международная конференция по офтальмологииВосток – Запад 2019 Международная конференция по офтальмологии

Академия ZiemerАкадемия Ziemer

Белые ночи - 2019 Сателлитные симпозиумы в рамках XXV Международного офтальмологического конгрессаБелые ночи - 2019 Сателлитные симпозиумы в рамках XXV Междун...

Новые технологии в офтальмологии - 2019 Всероссийская научно-практическая конференцияНовые технологии в офтальмологии - 2019 Всероссийская научно...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии – 2019 ХVII Всероссийская научно-практическаяконференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии –...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2019»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Роговица III. Инновации  лазерной коррекции зрения и кератопластикиРоговица III. Инновации лазерной коррекции зрения и кератоп...

ХVI Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты»ХVI Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вме...

Сессии в рамках III Всероссийского конгресса «Аутоимунные и иммунодефицитные заболевания»Сессии в рамках III Всероссийского конгресса «Аутоимунные и ...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

«Живая» хирургия в рамках конференции  «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018»«Живая» хирургия в рамках конференции «Современные технолог...

Сателлитные симпозиумы в рамках XI Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках XI Российского общенациональ...

Федоровские чтения - 2018 XV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2018 XV Всероссийская научно-практическ...

Актуальные проблемы офтальмологии XIII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XIII Всероссийская научная...

Восток – Запад 2018  Международная конференция по офтальмологииВосток – Запад 2018 Международная конференция по офтальмологии

«Живая хирургия» в рамках конференции «Белые ночи - 2018»«Живая хирургия» в рамках конференции «Белые ночи - 2018»

Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Между...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизонты -  2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизон...

Сателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКОСателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКО

Top.Mail.Ru


Open Archives