Рис. 1. Корнеосклеральный лоскут помещен в усовершенствованную искусственную переднюю камеру Barron эндотелием вверх (эндотелий окрашен трипановым синим)
Рис. 2. А – Изображение стромы роговицы глаза кролика после выкраивания эпикератомом, полученное с помощью оптической микроскопии, фрагменты десцеметовой мембраны и эпителиального слоя не визуализируются. Б – Изображение отсепарованной десцеметовой мембраны: наличие фрагментов стромы роговицы не выявлены, в отдельных зонах визуализируется эпителиальный слой, прилежащий к десцеметовой мембране (указано стрелками)
Доктор Kymionis с соавт. оценили возможность автоматизированного механического выкраивания донорского аутологичного трансплантата, состоящего из десцеметовой мембраны и эндотелиального слоя, в эксперименте.
Исследование провели с использованием глаз (n=10) кроликов (n=5) весом от 2,5 до 3,5 кг.
Животных забивали посредством внутривенной инъекции пентобарбитала натрия (80 мг/кг веса), глаза энуклеировали. Затем выкраивали корнеосклеральный донорский материал диаметром от 13,0 до 15,0 мм. Полученные образцы помещали в охлажденный 2,5% раствор глютаральдегида (буферный раствор при рН 7,4). Затем материал укладывали в усовершенствованную искусственную переднюю камеру Barron эндотелием вверх (рис. 1). Давление внутри камеры поддерживали путем введения сбалансированного солевого раствора, эндотелий окрашивали трипановым синим. Десцеметову мембрану выкраивали эпикератомом, после чего трансплантаты помещали в 2,0% раствор тетроксида осмия (буферный раствор при рН 7,4) на 1 час при температуре 4°С, дегидратировали в растворе спирта и оксида пропилена, после чего помещали на поверхность эпоксидной смолы. Для проведения зеркальной микроскопии выкраивали фрагмент толщиной 1-3 мкм и окрашивали его трихромным красителем. Далее образец исследовали на оптическом микроскопе.
Трансплантат, содержащий только десцеметову мембрану и эндотелий, удалось выкроить на 7 глазах из 10 глаз, в двух случаях выкроить не удалось, в 1 случае удалось выкроить частично из-за остановки эпикератома. Оптическая микроскопия не выявила наличия фрагментов стромы роговицы во всех полученных образцах, эндотелиальный слой роговицы визуализировался в нескольких зонах трансплантатов (рис. 2 А, Б).
Проведенное исследование имело ряд ограничений: небольшое количество использованных роговиц кроликов, нестабильность уровня давления в искусственной передней камере, отсутствие результатов анализа жизнеспособности клеток эндотелия после выкраивания трансплантата. Тем не менее работа показала возможность автоматизированного выкраивания трансплантата с помощью механического эпикератома. N
