Экспериментальное обоснование применения вископротекции эндотелия роговичного трансплантата для задней послойной кератопластики, сформированного при помощи фемтосекундного лазера

    

    Актуальность

    За последние годы селективная кератопластика, в частности задняя послойная (ЗПК), вытеснила сквозную при лечении различных эндотелиальных дистрофий и псевдофакической буллезной кератопатии [4, 5, 7]. Глобальное распространение получили две методики выкраивания трансплантата для ЗПК: предложенный в 2006 г. M. Gorovoy метод задней автоматизированной послойной кератопластики (ЗАПК) с использованием микрокератома и способ заготовки трансплантата с помощью фемтосекундного лазера (ФЛ-ЗПК) [4, 6]. При этом рядом отечественных авторов уже проводился сравнительный анализ по динамике потери плотности эндотелиальных клеток (ПЭК) в послеоперационном периоде после ЗПК. Из него следует, что потеря ПЭК больше при формировании трансплантата с помощью фемтосекундного лазера, чем при формировании трансплантата с помощью микрокератома [1]. Поэтому остается актуальным вопрос о модифицировании и совершенствовании этапов ФЛ-ЗПК, на которых будет уменьшена потеря ПЭК трансплантата, и вследствие этого улучшены клинико-функциональные постоперационные результаты.

    Цель

    Экспериментально обосновать применение вископротекции эндотелия роговичного трансплантата для задней послойной кератопластики при выкраивании фемтосекундным лазером.

    Материалы и методы

    В нашей работе было использовано 12 свиных корнеосклеральных дисков, заготовленных в глазном тканевом банке (МНТК «Микрохирургия глаза», г. Москва). Свиные глаза не были подвержены термической или химической обработке. Время от энуклеации до выкраивания корнеосклеральных дисков составляло в среднем 6±2 часа. После заготовки полученный материал помещали в раствор для хранения роговиц. Время консервации до эксперимента составляло в среднем 12±4 часа. Роговицы были разделены на 2 группы. В условиях операционной формирование трансплантата осуществляли с помощью фемтосекундного лазера LDV Z8 (Ziemer, Швейцария) с эндотелиальной стороны. Перед аппланацией донорской роговицы и головки фемтолазера на эндотелий наносили 1%-й раствор гидроксипропилметилцеллюлозы (ГПМЦ) – опытная группа. Контрольная группа аппланировалась по стандартной методике – с нанесением нескольких капель раствора для хранения роговиц. Затем проводился контроль и оценка аппланации лазерной оптической когерентной томографией. Далее трансплантат отделяли от ложа и переносили в консервационную среду. В лабораторных условиях для определения жизнеспособности эндотелиальных клеток трансплантат окрашивали «витальным» красителем с коммерческим названием Life and Dead (Abcam, Великобритания) и помещали в конфокальный лазерный сканирующий микроскоп. Подсчет эндотелиальных клеток проводился с помощью программы ImageJ.

    Результаты и обсуждение

    В опытной и контрольной группах количество живых эндотелиальных клеток (ЭК) составило 91,06±1,49% и 83,86±2,14% соответственно (p<0,001). Количество мертвых ЭК в контрольной группе было на 7,2±0,65% больше, чем опытной и составляло 16,14±2,14% и 8,94±1,49% соответственно (p<0,001). Известно, что одним из ведущих механизмов поддержания долгосрочной прозрачности роговицы, в том числе и пересаженной, является плотность ЭК и динамика ее потери [3]. При ФЛ-ЗПК существует множество причин утраты ЭК, таких, как изначальная толщина трансплантата (чем меньше толщина, тем травма клеток больше), работа шпателем в интерфейсе с целью рассечения перемычек и тканевых мостиков, оставшихся после фемтолазерного реза. Немаловажную роль играет и воздействие самого лазерного излучения (при повышении энергии клетки страдают в большей степени). Но наиболее существенным является сам факт аппланации, при которой происходит прямой контакт интерфейса лазера с клетками [8, 9]. Некоторые хирурги с целью уменьшения потери ПЭК рекомендуют наносить на поверхность ЭК вискоэластик (ВЭ) перед этапом аппланации. Но хочется отметить, что использование вископротекции ЭК во время контакта с головкой лазера, приветствуется далеко не всеми. Например, Яковлева C.C. с соавторами в ходе эксперимента обнаружили, что нанесение ВЭ на поверхность эндотелия сопровождается появлением складчатости роговицы при аппланации, следствием чего является формированием неравномерного по толщине трансплантата [2]. Тем не менее, в ходе экспериментального исследования зарубежных авторов, в котором использовались различные растворы ВЭ для защиты ЭК в момент аппланации, было установлено, что использование ВЭ, в частности, ГПМЦ уменьшает потерю ЭК до 6% [10]. Из чего можно сделать вывод, что вопрос о применении ВЭ перед этапом аппланации для уменьшения потери ПЭК при выкраивании трансплантата фемтосекундным лазером для ЗПК остается дискуссионным. Следует адекватно подходить к выбору раствора ВЭ и соблюдать баланс между защитой ЭК и соблюдением регулярности поверхности профиля роговицы в момент аппланации, которая влияет на качество фемтолазерного реза.

    Заключение

    Исследование продемонстрировало, что использование вископротекции эндотелия роговичного трансплантата для задней послойной кератопластики достаточно эффективно и в значительной мере снижает потерю ЭК на этапе выкраивания трансплантата фемтосекундным лазером.