Экспресс-метод диагностики хламидийного конъюнктивита

    Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) рассматривает хламидийную инфекцию как одну из важных проблем здравоохранения. Внимание практических врачей хламидиоз привлекает с 70 — х гг. XX в. По данным ВОЗ, 15 — 20% населения земли страдает этим заболеванием [5]. Хламидийные конъюнктивиты (ХК) были известны еще в глубокой древности под названием трахома, а позднее — паратрахома (конъюнктивит с включениями). Возбудитель тогда не был известен. От заболевания страдали жители Китая, Греции и Рима, включая таких известных личностей, как Цицерон и Гораций [5]. В Европу трахома была завезена крестоносцами с Ближнего Востока, а затем войсками Наполеона в 1798 г. В развивающихся странах мира до сих пор около 500 млн. чел. страдают этим заболеванием [5].

    В настоящее время насчитывается более 20 нозологических форм, связанных с хламидийной инфекцией, обусловленной Chlamydia trachomatis. Из них поражения слизистой глаз: трахома, хламидийный конъюнктивит взрослых и новорожденных, синдром Рейтера [3]. Трахома — хронический инфекционный кератоконъюнктивит, характеризующийся появлением фолликулов (с последующим их рубцеванием) и сосочков на конъюнктиве, воспалением роговицы, а на поздних стадиях — деформацией век [4]. Хламидийный конъюнктивит взрослых (паратрахома) — подострый или хронический конъюнктивит, характеризующийся образованием многочисленных, не склонных к рубцеванию фолликулов [4]. Хламидийный конъюнктивит новорождённых протекает как острый папиллярный и подострый инфильтративный конъюнктивит [4]. Частота хламидийных конъюнктивитов в последние годы увеличивается, составляя около 40% всех конъюнктивитов новорожденных [2]. Синдром (болезнь) Рейтера (конъюнктивально — урогенитальный синдром) характеризуется триадой — сочетанием поражения мочеполовых органов (обычно в форме уретрита), суставов (реактивный олиго — или моноартрит) и глаз (конъюнктивит) [2].

    Возбудители хламидиозов — мелкие грамотрицательные кокковидные бактерии, размер которых составляет 0,25 — 1,5 мкм. Хламидии имеют общий термостабильный родоспецифический антиген (ЛПС — липополисахарид), который по составу близок к липополисахаридам грамотрицательных бактерий, термолабильные видо — и типоспецифические антигены (АГ). Структура клеточной стенки хламидий сходна со структурой клеточной стенки грамотрицательных бактерий. Она состоит из внутренней цитоплазматической и наружной мембран (обе являются двойными, обеспечивая прочность клеточной стенки). Антигенные свойства хламидий определяются внутренней мембраной, которая представлена липополисахаридами. В нее интегрированы так называемые белки наружной мембраны — OMP (Outer Membrane Proteins). На основной белок наружной мембраны MOMP (Major Outer Membrane Protein) приходится 60% общего количества белка. Установлено, что MOMP — гликопротеин, и именно его гликозидная часть вовлекается в процесс инфицирования клетки — хозяина [6].

    В настоящее время для диагностики офтальмохламидиоза используют следующие методы лабораторной диагностики: культуральный, цитологический, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный, ПЦР. Вышеназванные методы являются наиболее чувствительными и специфичными лабораторными методами, но они трудоемки, дорогостоящи, длительны, зачастую недоступны.

    Применение иммунохроматографического экспресс — метода позволяет быстро определить антигены хламидий в материале и получить результат за 10 мин. Метод заключается в определении появления цветной полосы в области тестовой линии вследствие соединения АГ Сhlamydia trachomatis в материале с антителами (АТ), нанесенными на тестовую мембрану. Это качественный иммунологический метод, применяемый в качестве скрининга в диагностике хламидиоза, предназначенный для диагностики хламидиоза у женщин в мазке из цервикального канала шейки матки, у мужчин в мазке из уретры и в пробе мочи. Иммунохроматографический анализ указывает только на наличие в материале антигена как жизнеспособных, так и нежизнеспособных хламидий. С помощью этого качественного теста нельзя определить концентрацию антигена Сhlamydia trachomatis.

    Цель — изучение информативности и достоверности иммунохроматографического экспресс — метода лабораторной диагностики хламидийного конъюнктивита.

    Материал и методы

    В Чебоксарском филиале ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» диагностика офтальмохламидиоза ведется на основе лабораторных методов, в частности, применяются цитологический и экспресс — методы. В данном исследовании мы проводили исследование мазков с конъюнктивы глаз 33 пациентов с различными конъюнктивитами (бактериальными, хламидийными, вирусными, аллергическими). Возраст пациентов — от 20 до 60 лет.

    При проведении классического цитологического метода исследования хламидиоза обнаруживали цитоплазматические включения в эпителиальных клетках, или «тельца Провачека — Хальберштедтера» (четко ограниченные микроколонии от бесцветного до темно — фиолетового цвета).

    Для выполнения экспресс — метода диагностики использовали тест — наборы фирмы «ACOM» (Сан — Диего, США). Возможность использования этого теста для диагностики офтальмохламидиоза ранее не изучалась. Для забора проб мазка с конъюнктивы использовали тампон, имеющийся в наборе, или же использовали стерильную петлю. Перед проведением анализа тест — кассету, реактивы (контрольные растворы) доводили до комнатной температуры (от +15 до +300 С), затем извлекали из герметичной упаковки тест — кассету и использовали ее как можно скорее. Для получения качественных результатов анализ проводили сразу после вскрытия упаковки из фольги. В бутылочку с реактивом А (0,2М NaOH), держа ее вертикально, добавляли 5 полных капель реагента А (приблизительно 300 мкл) в пробирку для анализа и сразу же помещали тампон в пробирку. Эту пробирку с тампоном трясли 15 раз и давали постоять 2 минуты. Держа бутылочку с реактивом В (0,2N HCl) вертикально, добавляли 6 полных капель реагента В (приблизительно 250 мкл) в пробирку для экстракции. Раствор становился мутным. Трясли пробирку с тампоном до тех пор, пока раствор не становился прозрачным и приобретал слегка зеленоватый или синеватый оттенок. Если тампон был окровавлен, то цвет был желтым или коричневым. Давали постоять 1 минуту. Затем, прижимая тампон к стенке пробирки, отжимали и вынимали его так, чтобы в пробирке осталось как можно больше жидкости. Закрепляли наконечник — капельницу на пробирке для анализа. Помещали тест — кассету для анализа на чистую и ровную поверхность. Наносили 3 полные капли раствора предварительно подготовленной пробы (приблизительно 100 мкл) в лунку для образца (S) в тест — полоске, затем включали таймер. Через 10 минут получали результат.

    В области тестовой линии на мембране нанесены антитела, специфичные к антигену Chlamydia trachomatis. При проведении теста антиген Chlamydia trachomatis в мазке с конъюнктивы глаза вступает в реакцию с антителами, которые нанесены на мембрану кассеты. Вследствие этого образуются две четкие цветные линии: одна линия в контрольной области (С), а другая — в тестовой области (Т). Появление линии в тестовой области означает положительный результат, а ее отсутствие — отрицательный. Если контрольная линия (С) не появляется, то это говорит о недостоверности результата. Чаще это происходит из — за недостаточного объема пробы или неправильного выполнения методики проведения анализа.

    Результаты и обсуждение

    Проанализированы результаты 33 исследований на офтальмохламидиоз мазков и соскобов с конъюнктивы, выполненных цитологическим и экспресс — методами (иммунохроматографический тест). 5 образцов (15%) в обоих случаях оказались положительными. При помощи цитологического теста были обнаружены «включения», или «тельца Провачека — Хальберштедтера» (колонии от бесцветного до темно — фиолетового цвета) в 5 пробах.

    При выполнении иммунохроматографического теста на тест — кассете появились две четкие цветные линии в этих же 5 пробах. Совпадение результатов этих двух методов оказалось 100%.

    Выводы

    Диагностика хламидийных инфекций базируется на данных лабораторных исследований, но ни один из применяемых методов не может дать исчерпывающего ответа по тем или иным причинам. Поэтому целесообразно применение нескольких методов, позволяющих выявить возбудителя, определить стадию процесса.

    Примененные нами цитологический и иммунохроматографический экспресс — методы лабораторной диагностики имели 100% совпадение результатов, что свидетельствует о достаточной диагностической чувствительности тест — систем и возможности их применения в скрининге диагностики офтальмохламидиоза наряду с цитологическим методом.