Изменение внутриглазного баланса цитокинов у пациентов с миопической хориоидальной неоваскуляризацией

    Актуальность.

    Миопическая хориоидальная неоваскуляризация (мХНВ) имеет свои клинические особенности, отличающие ее от влажной формы возрастной макулярной дегенерации (ВМД) [2, 7]. При этом местные иммунологические факторы, оказывающие влияние на развитие ВМД, изучены на сегодняшний день достаточно хорошо, в то время как в исследованиях регуляции ангиогенеза при миопической ХНВ до сих пор существует большое количество «белых пятен» [4-6, 8].

    Цель.

    Определение концентрации интраокулярных цитокинов у пациентов с миопической хориоидальной неоваскуляризацией.

    Материал и методы.

    В Иркутском филиале ФГАУ «МНТК «Микрохирургия глаза» было обследовано 18 пациентов (19 глаз) с миопической хориоидальной неоваскуляризацией, среди них женщин было 14, мужчин – 4. Степень миопической рефракции составила в среднем 9,44±4,72 дптр, длина глаза – 27,16±2,06 мм. Средний возраст пациентов был 48,52±15,49 года. Критерием включения являлось наличие признаков активности ХНВ.

    В контрольную группу вошли 12 пациентов (15 глаз) с миопией, которым проводилось оперативное лечение катаракты преимущественно с рефракционной целью. У пациентов контрольной группы не было отмечено иной сопутствующей патологии, при этом они соответствовали клинической группе по полу, возрасту и степени миопической рефракции.

    Всем пациентам были проведены стандартные офтальмологические обследования. Кроме того, применялись дополнительные методы исследования: оптическая когерентная томография высокого разрешения (ОСТ) (HD OCT 4000, Carl Zeiss, Германия), компьютерная периметрия (Twinfield Oculus, США), электроретинография (ЭРГ) (Tomey ЕР-1000 РС, Япония), флуоресцентная ангиография сетчатки (ФАГ) (Topcon TRS- 50DX, Япония).

    Пациентам с миопической ХНВ в качестве метода лечения применяли ранибизумаб, который вводился интравитреально, в условиях стерильной операционной по стандартной технологии в дозе 0,5 мг. В ходе операции перед инъекцией препарата производился забор камерной влаги в количестве 100 мкл. Концентрацию цитокинов (ЦК) оценивали методом проточной флуориметрии на двухлучевом лазерном автоматизированном анализаторе (Bio-Plex Protein Assay System, «Bio-Rad Laboratories», США) с использованием коммерческих тест-систем Bio-Plex Pro Human Cytokine Panel, 27-Plex в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Панель была рассчитана на определение содержания 27 цитокинов.

    Результаты обработаны статистически с применением методов непараметрической статистики. Статистические данные всех исследуемых показателей представлялись в виде определения среднего значения и стандартного отклонения. Различия между исследуемой группой и контролем определялись с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни (Mann-Whitney). Все расчеты производились с помощью программы STATISTICA 8.0, Stat Soft. Inc., США.

    Результаты и обсуждение.

    Выявлены достоверные различия структурно-функциональных и иммунологических показателей у пациентов клинической группы и группы контроля.

    Результаты проведенных иммунологических исследований показали, что во влаге передней камеры глаза у пациентов с миопической хориоидальной неоваскуляризацией определялась концентрация 17 цитокинов, 10 цитокинов оказались ниже чувствительности метода.

    Сравнительный анализ содержания цитокинов во влаге передней камеры глаза пациентов основной и контрольной групп выявил у больных с мХНВ статистически достоверную разницу в концентрации 10 цитокинов.

    При этом уровень эндотелиального сосудистого фактора роста (VEGF) у пациентов с миопической ХНВ был практически в 2 раза снижен по сравнению с группой контроля (191,15±142,30 и 320,06±170,05 пг/мл соответственно) (p<0,05).

    В то же время у больных с мХНВ регистрировалось достоверное увеличение концентрации 9 цитокинов – представителей различных эффекторных групп [1, 3].

    По сравнению с группой контроля, при мХНВ в 7 раз был увеличен тромбоцитарный фактор роста PDGF-BB (21,70±24,89 против 3,82±6,69 пг/мл) (p<0,01).

    Выявлено статистически значимое увеличение концентраций провоспалительных цитокинов: интерлейкина-2 (IL-2) – в 3,5 раза, интерлейкина-15 (IL-15) – на 50%, интерлейкина-17А (IL-17А) – 4-кратно, фактора некроза опухолей a (TNFa) – в 3,5 раза при мХНВ по сравнению контролем.

    Также наблюдалось увеличение концентрации и противовоспалительных цитокинов. По сравнению с группой контроля в 1,5 раза был повышен уровень интерлейкина-5 (IL-5) и более чем в 2 раза – уровень интерлейкина-13 (IL-13) (p<0,05).

    Выявлено повышение представителей класса хемокинов. Во влаге передней камеры пациентов с миопической ХНВ определено увеличение в 3 раза концентрации интерлейкина-8 (IL-8) и более чем 11-кратное повышение уровня фактора регуляции активации, экспрессии и секреции нормальных Т-клеток (RANTES) (p<0,05).

    При проведении корреляционного анализа между показателями, характеризующими офтальмологический статус, и уровнем цитокинов выявлено, что длина глаза – фактор, характеризующий миопию, имеет значительную обратную взаимосвязь с VEGF (r= – 0,57) и значительную прямую зависимость с интерлейкином-7 (IL-7) и макрофагальным воспалительным белком (MIP-1a) (r=0,63 и r=0,61 соответственно).

    Одной из функциональных характеристик, отражающих состояние ганглиозных клеток сетчатки и зрительного нерва (внутренних слоев сетчатки), является показатель электрической чувствительности и лабильности зрительного нерва (пороговый электрический фосфен). В клинической группе наблюдались прямые тесные корреляционные связи электрической чувствительности с уровнем интерлейкина-10 (IL-10) (r=0,7) и эотаксином (Eotaxin) (r=0,72). Электрическая лабильность имела обратную зависимость от интерлейкина-9 (IL-9) и TNFa (r= –0,56 и r= –0,62 соответственно).

    Кроме того, провоспалительный цитокин IL-2 четко коррелирует с объемом макулы (r=0,63).

    Таким образом, полученные корреляционные зависимости еще раз подтверждают своеобразный характер иммунологических реакций у больных с миопией, осложненной хориоидальной неоваскуляризацией.

    Заключение.

    1. У пациентов с миопической хориоидальной неоваскуляризацией выявлено повышение уровня про- и противовоспалительных цитокинов, хемокинов и факторов роста при значительном снижении концентрации VEGF.

    2. Иммунологический статус пациентов с миопической хориоидальной неоваскуляризацией кардинально отличается от других заболеваний, сопровождающихся неоваскуляризацией, что может свидетельствовать о включении иных патогенетических механизмов.

    3. Необходимы дальнейшие исследования для определения иммунологических факторов, детерминирующих механизмы развития неоангиогенеза сетчатки при патологической миопии.