Онлайн доклады

Онлайн доклады

Клинические случаи в офтальмологии

Клинические случаи в офтальмологии

Впервые выявленная глаукома: проблемы и возможности

Впервые выявленная глаукома: проблемы и возможности

Пироговский офтальмологический форум 2023

Пироговский офтальмологический форум 2023

Сателлитные симпозиумы в рамках Пироговского офтальмологического форума 2023

Сателлитные симпозиумы в рамках Пироговского офтальмологического форума 2023

Сателлитные симпозиумы в рамках III Всероссийской конференции с международным участием «Воспаление глаза 2023»

Сателлитные симпозиумы в рамках III Всероссийской конференции с международным участием «Воспаление глаза 2023»

Проблемные вопросы глаукомы: Искусственный интеллект в диагностике и мониторинге XII Международный симпозиум

Проблемные вопросы глаукомы: Искусственный интеллект в диагностике и мониторинге XII Международный симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках 23-го Всероссийского научно-практического конгресса с  международным участием «Современные технологии  катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках 23-го Всероссийского научно-практического конгресса с международным участием «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

NEW ERA Способы трансcклеральной фиксации ИОЛ

NEW ERA Способы трансcклеральной фиксации ИОЛ

Сателлитные симпозиумы в рамках XVI Российского общенационального офтальмологического форума

Сателлитные симпозиумы в рамках XVI Российского общенационального офтальмологического форума

Ромашка Фёдорова: 35 лет в движении. Всероссийская научно-практическая конференция

Ромашка Фёдорова: 35 лет в движении. Всероссийская научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках Северо-Кавказского офтальмологического саммита

Сателлитные симпозиумы в рамках Северо-Кавказского офтальмологического саммита

NEW ERA Новые молекулы в лечении макулярной патологии

NEW ERA Новые молекулы в лечении макулярной патологии

Сателлитные симпозиумы в рамках XXIX Международного офтальмологического конгресса «Белые ночи»

Сателлитные симпозиумы в рамках XXIX Международного офтальмологического конгресса «Белые ночи»

Сателлитные симпозиумы в рамках Всероссийской научно-практической конференции с международным участием  «Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия»

Сателлитные симпозиумы в рамках Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия»

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Сателлитные симпозиумы в рамках 20 Всероссийской научно-практической конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии»

Сателлитные симпозиумы в рамках 20 Всероссийской научно-практической конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии»

NEW ERA Особенности имплантации мультифокальных ИОЛ

NEW ERA Особенности имплантации мультифокальных ИОЛ

XXX Научно-практическая конференция офтальмологов  Екатеринбургского центра МНТК «Микрохирургия глаза»

XXX Научно-практическая конференция офтальмологов Екатеринбургского центра МНТК «Микрохирургия глаза»

Прогрессивные технологии микрохирургии глаза в реальной клинической практике. Научно-практическая конференция

Прогрессивные технологии микрохирургии глаза в реальной клинической практике. Научно-практическая конференция

Пироговский офтальмологический форум

Пироговский офтальмологический форум

Глаукома. Избранные вопросы патогенеза, профилактики, диагностики, лечения. Всероссийская офтальмологическая конференция

Глаукома. Избранные вопросы патогенеза, профилактики, диагностики, лечения. Всероссийская офтальмологическая конференция

Терапия глаукомы. Практический подход и поиск решений в дискуссии

Терапия глаукомы. Практический подход и поиск решений в дискуссии

NEW ERA Хирургическое лечение глаукомы: НГСЭ

NEW ERA Хирургическое лечение глаукомы: НГСЭ

Сателлитные симпозиумы в рамках 22-го Всероссийского научно-практического конгресса «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках 22-го Всероссийского научно-практического конгресса «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ - 2022

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ - 2022

Современные достижения лазерной офтальмохирургии Всероссийский научный симпозиум

Современные достижения лазерной офтальмохирургии Всероссийский научный симпозиум

Юбилейная X научно-практическая конференция, посвященная 35-летию Чебоксарского филиала ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н. Федорова»

Юбилейная X научно-практическая конференция, посвященная 35-летию Чебоксарского филиала ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н. Федорова»

NEW ERA Хирургия осложнённой катаракты

NEW ERA Хирургия осложнённой катаракты

NEW ERA Оптическая когерентная томография. Критерии активности макулярной неоваскуляризации

NEW ERA Оптическая когерентная томография. Критерии активности макулярной неоваскуляризации

NEW ERA Особенности лечения отслойки сетчатки

NEW ERA Особенности лечения отслойки сетчатки

Шовная фиксация ИОЛ

Мастер класс

Шовная фиксация ИОЛ

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Восток - Запад 2022 Международная конференция по офтальмологии

Восток - Запад 2022 Международная конференция по офтальмологии

Целевые уровни ВГД в терапии глаукомы

Вебинар

Целевые уровни ВГД в терапии глаукомы

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции «Невские горизонты - 2022»

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции «Невские горизонты - 2022»

Новые технологии в офтальмологии 2022

Новые технологии в офтальмологии 2022

ОКТ: новые горизонты

Сателлитный симпозиум

ОКТ: новые горизонты

Превентивная интрасклеральная фланцевая фиксация ИОЛ при подвывихе хрусталика

Вебинар

Превентивная интрасклеральная фланцевая фиксация ИОЛ при подвывихе хрусталика

Лечение глаукомы: инновационный вектор - 2022. III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Лечение глаукомы: инновационный вектор - 2022. III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Вебинар компании «Rayner»

Вебинар компании «Rayner»

Цикл онлайн дискуссий компании «Акрихин» «О глаукоме и ВМД в прямом эфире»

Цикл онлайн дискуссий компании «Акрихин» «О глаукоме и ВМД в прямом эфире»

Алгоритм ведения пациентов с астенопией после кераторефракционных операций

Вебинар

Алгоритм ведения пациентов с астенопией после кераторефракционных операций

Cовременные технологии диагностики патологий заднего отдела глаза

Сателлитный симпозиум

Cовременные технологии диагностики патологий заднего отдела глаза

Вебинары компании  «Акрихин»

Вебинары компании «Акрихин»

Снижение концентрации «Бримонидина», как новое решение в терапии у пациентов с глаукомой

Вебинар

Снижение концентрации «Бримонидина», как новое решение в терапии у пациентов с глаукомой

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Актуальные вопросы офтальмологии: в фокусе – роговица

Вебинар

Актуальные вопросы офтальмологии: в фокусе – роговица

XIX Конгресс Российского глаукомного общества  «19+ Друзей Президента»

XIX Конгресс Российского глаукомного общества «19+ Друзей Президента»

Пироговский офтальмологический форум

Пироговский офтальмологический форум

Кератиты, язвы роговицы

Вебинар

Кератиты, язвы роговицы

Актуальные вопросы офтальмологии

Вебинар

Актуальные вопросы офтальмологии

Всероссийский консилиум. Периоперационное ведение пациентов с глаукомой

Сателлитный симпозиум

Всероссийский консилиум. Периоперационное ведение пациентов с глаукомой

Трансплантация роговично-протезного комплекса у пациента с васкуляризированным бельмом роговицы

Трансплантация роговично-протезного комплекса у пациента с васкуляризированным бельмом роговицы

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Клинические случаи в офтальмологии

Клинические случаи в офтальмологии

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Впервые выявленная глаукома: проблемы и возможности

Впервые выявленная глаукома: проблемы и возможности

Сателлитные симпозиумы в рамках Пироговского офтальмологического форума 2023

Сателлитные симпозиумы в рамках Пироговского офтальмологического форума 2023

Пироговский офтальмологический форум 2023

Пироговский офтальмологический форум 2023

Сателлитные симпозиумы в рамках III Всероссийской конференции с международным участием «Воспаление глаза 2023»

Сателлитные симпозиумы в рамках III Всероссийской конференции с международным участием «Воспаление глаза 2023»

Проблемные вопросы глаукомы: Искусственный интеллект в диагностике и мониторинге XII Международный симпозиум

Проблемные вопросы глаукомы: Искусственный интеллект в диагностике и мониторинге XII Международный симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках 23-го Всероссийского научно-практического конгресса с  международным участием «Современные технологии  катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках 23-го Всероссийского научно-практического конгресса с международным участием «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

NEW ERA Способы трансcклеральной фиксации ИОЛ

NEW ERA Способы трансcклеральной фиксации ИОЛ

Сателлитные симпозиумы в рамках XVI Российского общенационального офтальмологического форума

Сателлитные симпозиумы в рамках XVI Российского общенационального офтальмологического форума

Ромашка Фёдорова: 35 лет в движении. Всероссийская научно-практическая конференция

Ромашка Фёдорова: 35 лет в движении. Всероссийская научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках Северо-Кавказского офтальмологического саммита

Сателлитные симпозиумы в рамках Северо-Кавказского офтальмологического саммита

NEW ERA Новые молекулы в лечении макулярной патологии

NEW ERA Новые молекулы в лечении макулярной патологии

Сателлитные симпозиумы в рамках XXIX Международного офтальмологического конгресса «Белые ночи»

Сателлитные симпозиумы в рамках XXIX Международного офтальмологического конгресса «Белые ночи»

Сателлитные симпозиумы в рамках Всероссийской научно-практической конференции с международным участием  «Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия»

Сателлитные симпозиумы в рамках Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия»

Все видео...
 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст
УДК:617.713-004.1-085

Изучение in vitro антиангиогенной активности природных ингибиторов ангиогенеза: эндостатина, тумстатина и PEDF


Неоваскуляризация роговицы и ее осложнения являются причиной снижения зрительных функций при ряде глазных болезней, таких как пролиферативная диабетическая ретинопатия (ПДР), возрастная макулярная дегенерация (ВМД), офтальмогистоплазмоз, псевдогистоплазмозный синдром и осложненная миопия высокой степени. Рост глазных болезней, сопровождающихся неоваскуляризацией, и, как следствие, стойкой, а порой и необратимой потерей зрения, а также невысокая и непродолжительная эффективность VEGF-блокирующих методов лечения заставляют ученых всего мира искать новые способы и методы борьбы с патологическим ростом сосудов.

Накопленные фундаментальные знания о неоангиогенезе позволяют с высокой степенью уверенности говорить о том, что антиангиогенная терапия должна быть длительной либо действие препарата пролонгированным, а значит, он не должен вызывать лекарственной резистентности и системных побочных эффектов. Такими свойствами обладают природные ингибиторы ангиогенеза, постоянно вырабатываемые в организме. Среди 27 известных в настоящее время эндогенных ингибиторов ангиогенеза наиболее перспективными признаны эндостатин, тумстатин и фактор, выделенный из пигментного эпителия сетчатки — PEDF. Эти пептиды были взяты в разработку в рамках научного проекта, финансируемого РФФИ в 2008-2009 гг.

Цельнастоящей работы — изучение in vitro антиангиогенной активности эндостатина, тумстатина и PEDF.

Материал и методы

Блок антиангиогенных препаратов, состоящий из фрагментов природных ингибиторов ангиогенеза (эндостатина, тумстатина и PEDF), был создан с помощью биотехнологии генной инженерии (лаборатория биотехнологий ИБХ РАН, зав. лаб. — акад. Мирошников А.И.). Вначале осуществлены химико-ферментативный синтез и клонирование в Esherichia coli искусственных генов, кодирующих фрагмент тумстатина Tum8 (69-95), фрагмент PEDF (24-57) и фрагмент эндостатина (1-49). Сконструированы рекомбинантная плазмида, содержащая гибридный ген белка, в котором соединены аминокислотные последовательности фрагмента PEDF (24-57); плазмида, содержащая гибридный ген белка, в котором соединены аминокислотные последовательности фрагмента эндостатина (1-49), и плазмида, содержащая гибридный ген белка, в котором соединены аминокислотные последовательности фрагмента тумстатина (69-95). Созданы высокоэффективные штаммы-продуценты и наработаны опытные партии целевых пептидов. Биологическая активность полученных препаратов с целью изучения их механизмов и терапевтического потенциала изучалась на моделях in vitro.

Изучение биологической активности пептидов целевого назначения проводили с помощью классических методов, принятых при анализе активности про- и антиангиогенных препаратов.

Под антиангиогенной активностью понимали наличие у рекомбинантных пептидов:

· способности оказывать цитотоксический эффект на эндотелиальные клетки (ЭК), обеспечивающие жизнеспособность кровеносных сосудов;

· способности подавлять пролиферацию ЭК (1 этап ангиогенеза);

· способности подавлять миграцию ЭК (1 этап ангиогенеза);

· способности ингибировать образование трубочкоподобных структур (2 этап ангиогенеза);

· способности подавлять или останавливать образование анастомозов с близлежащими сосудами и препятствовать запуску кровотока (3 этап ангиогенеза);

· способности разрушать сформированные сосуды (аваскулогенная терапия).

Во избежание ложно-позитивных результатов использовали многоуровневую систему оценки на моделях in vitro. Исследования выполнялись двумя независимыми экспертами. Первичный скрининг активности пептидов на моделях in vitro проводили в лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей НИИ ЭДиТО РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН (докт. мед. наук Е.В. Степанова).

Для оценки цитотоксического эффекта использовали культуру эндотелиальных клеток (ЭК) мыши SVEC-4-10, трансформированной вирусом SV40 [2]. В качестве количественного показателя, отражающего глубину цитотоксического эффекта, использовали индекс процентного соотношения количества ЭК в опытном тестируемом образце к аналогичному показателю в контроле. Индекс выражался в процентах.

Антипролиферативная активность препаратов определялась модифицированным «митогенным» методом с использованием красителя Crystal violet на культуре ЭК мыши SVEC-4-10.

Миграционная активность ЭК оценивалась по способности препарата подавлять миграцию. Препараты тестировали с помощью модифицированного метода «раневой поверхности». Результаты оценивали как процент мигрирующих клеток в опыте по отношению к контролю (контроль: клетки в среде ДМЕМ, содержащей 10% эмбриональной сыворотки, 2 нМ глутамина).

Способность препаратов ингибировать образование трубочкоподобных структур ЭК SVEC-4-10 анализировали в имплантате матригеля in vivo (на мышах-самках BDA) по методике Passaniti A. [1]. В качестве количественных показателей использовали длину трубочек и количество контактов между трубочками в имплантате матригеля.

Все пептиды (PEDF, тумстатин и эндостатин) проходили одинаковое тестирование в диапазоне концентраций от 20 до 0,1 нМ.

Полученные in vitro результаты сопоставляли.

Результаты и обсуждение

Было установлено, что препараты обладают неодинаковой цитостатической активностью. Наибольшим цитостатическим эффектом обладал PEDF. В присутствии PEDF в культуральной среде в концентрации 20 нМ выживаемость ЭК составляла 84±3%. Цитостатический эффект тумстатина был несколько ниже и составлял 90±1% при той же концентрации. Эндостатин не оказывал цитостатического эффекта на ЭК (табл. 1).

Антипролиферативная активность препаратов также различалась. Наибольшей активностью обладал тумстатин: пролиферация была подавлена на 65% в концентрации 20 нМ, ИК50 составила 10 нМ. Для сравнения: аналогичные показатели PEDF составили 53%, но достигались при более низкой концентрации препарата: ИК50 — 1 нМ. Таким образом, максимальное ингибирование пролиферации клеток наблюдалось при концентрации PEDF 1 нМ в среде (47% от контроля) (табл. 2).

На рис. 1-7 демонстрируются результаты теста образования трубочкоподобных структур в матригеле.

Заключение

В работе проводится сравнительный анализ антиангиогенной активности природных ингибиторов ангиогенеза. Известно, что большинство природных ингибиторов ангиогенеза представляют собой большие белковые молекулы, не обладающие антиангиогенными свойствами, например коллаген XVIII, из которого был получен первый ингибитор ангиогенеза — эндостатин. По своей сути природные ингибиторы представляют собой предшественников ингибиторов ангиогенеза и относятся к белкам экстраклеточного матрикса (ЭКМ), базальной мембраны сосудов и/или к белкам свертывания крови (плазминоген). Только небольшая часть природных ингибиторов является фрагментами белков, способных ингибировать ангиогенез, как, например, кальретикулин и/или продукт его расщепления — вазостатин. По своей структуре ингибиторы ангиогенеза в основном являются полипептидами, т.е. состоят из большого количества аминокислот. Чтобы иметь возможность проанализировать их эффекты и попытаться управлять ими, предложено использовать определенную последовательность фрагментов аминокислот. Установлено, что точки приложения различных фрагментов одного и того же антиангиогенного пептида, как, впрочем, и их биологические свойства, различаются. Поиск и идентификация фрагментов с антиангиогенной активностью — перспективное направление антиангиогенной терапии.

В настоящей статье авторы представили блок природных ингибиторов ангиогенеза, созданный с помощью современных биотехнологий рекомбинантной генно-конструктивной инженерии, состоящий из 3-х пептидов. Потенциально все 3 пептида обладали биологической активностью, которая могла проявляться на различных этапах ангиогенеза, а следовательно, все они могли быть пригодны в лечении неоваскулярных заболеваний глаз. Для тестирования применили международную схему тестирования про- и антиангиогенных препаратов. В работе представлены результаты первого этапа тестирования in vitro.

Мишенями природных ингибиторов ангиогенеза, как правило, являются эндотелиальные клетки. Основная их цель не убить ЭК, как структурную единицу сосудистой сети, а ингибировать ее пролиферацию и/или миграцию, и/или дифференцировку. Подавление именно этих функций ЭК прекращает рост новых сосудов. Все 3 тестируемых пептида обладали дозозависимой антиангиогенной активностью in vitro. Вместе с тем, их биологические эффекты проявлялись на разных этапах ангиогенеза. PEDF и тумстатин оказывали цитостатический эффект на культуре ЭК, блокировали их пролиферацию и образование трубочкоподобных структур. Эндостатин блокировал только образование трубочкоподобных структур и не влиял на выживаемость, пролиферацию и миграцию ЭК (табл. 3).

Теоретически тестируемые фрагменты могут оказаться полезными при офтальмопатологии. Однако для окончательного вывода необходимы экспериментальные исследования на животных. Учитывая, что в природе скорость ангиогенеза определяется балансом про- и антиангиогенных пептидов в органе-мишени (т.е. в тканях глаза), вторым этапом оценки терапевтического потенциала тестируемых ингибиторов должны быть экспериментальные исследования с использованием моделей заболеваний глаз, протекающих с неоангиогенезом.

OAI-PMH ID: oai:eyepress.ru:article8849
Просмотров: 10594



Офтальмохирургия

Офтальмохирургия

Новое в офтальмологии

Новое в офтальмологии

Мир офтальмологии

Мир офтальмологии

Российская офтальмология онлайн

Российская офтальмология онлайн

Российская детская офтальмология

Российская детская офтальмология

Современные технологии в офтальмологии

Современные технологии в офтальмологии

Точка зрения. Восток - Запад

Точка зрения. Восток - Запад

Новости глаукомы

Новости глаукомы

Отражение

Отражение

Клинические случаи в офтальмологии

Клинические случаи в офтальмологии
Bausch + Lomb
Reper
NorthStar
ЭТП
Rayner
Senju
Фармстандарт
Гельтек
santen
Акрихин
Ziemer
Tradomed
Екатеринбургский центр Микрохирургия глаза
МТ Техника
Nanoptika
R-optics
Фокус
sentiss
nidek
aseptica