Изучение локального содержания простагландина E2 при экспериментальном иммуногенном увеите кроликов

  ГУ «Уфимский НИИ глазных болезней» АН РБ, г. Уфа
  
   Увеиты, являясь одними из самых тяжелых воспалительных заболеваний глаз, встречаются у 15–38 человек на 100 000 населения. Удельный вес данного заболевания в структуре глазной патологии достигает 5–15 % [1, 3]. В основном поражаются лица молодого и трудоспособного возраста, чем и определяется социальная значимость. Важно также, что заболевание часто имеет тяжелое и рецидивирующее течение, нередко приводящее к инвалидности по зрению [3, 4].
  Известно, что основная роль в развитии воспалительного процесса сосудистой оболочки глаза принадлежит медиаторам воспаления, а именно простагландинам (ПГ) — группе липидных физиологически активных веществ [7]. Наиболее важным биологическим медиатором у человека является ПГЕ₂, который синтезируется в различных клетках, стимулируемых как физиологическими, так и патологическими факторами [6]. Учитывая вышеизложенные данные, актуальным является дальнейшее углубленное изучение патогенеза увеита, а именно участие ПГЕ₂ в развитии воспалительного процесса сосудистой оболочки глаза.
  
  Цель — определить содержание простагландина Е₂ во влаге передней камеры при экспериментальном иммуногенном увеите кроликов в динамике развития заболевания.
  
  Материал и методы. Экспериментальные исследования были проведены на 12 кроликах (24 глаза) породы шиншилла массой тела 2,0–2,5 кг. Все кролики были мужского пола и находились на стандартном рационе питания. Осмотр животных проводился ежедневно в одно и то же время.
  Кролики были поделены на 2 группы, по 6 животных в каждой: 1-я — опытная — с развитием экспериментального иммуногенного увеита (ЭИУ), 2-я — контрольная — здоровые кролики. ЭИУ воспроизводили путем предварительной подкожной сенсибилизации нормальной лошадиной сывороткой (5,0 мл) и последующим, на 9-е сутки после сенсибилизации, интравитреальным введением ее разрешающей дозы (0,1 мл) под местной анестезией (инокаин 0,4 %) [5]. Животных выводили из опыта методом воздушной эмболии. Офтальмологическая картина контрольной группы животных во все сроки наблюдения соответствовала норме.
  Эксперимент проводили в соответствии с общепринятыми принципами гуманности и существующими международными нормативными документами и инструкциями МЗ РФ и РАМН по работе с лабораторными животными.
  Сбор образцов влаги передней камеры (ВПК), клинико-биомикроскопическое исследование глаз у экспериментальных животных выполняли до сенсибилизации, перед введением антигена в стекловидное тело, на 1-е, 3-и, 7-е, 14-е, 21-е и 30-е сутки развития увеита.
  Сбор ВПК у каждого кролика проводили под местной инстилляционной анестезией (инокаин 0,4 %) через парацентез с помощью инсулинового шприца. Контролем служила ВПК здоровых кроликов.
  Определение содержания простагландина Е₂ в образцах ВПК кроликов было проведено твердофазным иммуноферментным анализом с использованием тест-системы (R&D Systems, США) и автоматического фотометра «Multiscan» при длине волны 450 нм, результат исследования выражали в пг/ мл.
  Статистическую обработку полученных результатов проводили по стандартным методам параметрической и непараметрической статистики.
  
  Результаты и обсуждение. Полученные нами результаты по исследованию содержания ПГЕ₂ во ВПК у кроликов с ЭИУ в динамике заболевания отражены на диаграмме.
  Как видно из представленного рисунка, однократное подкожное введение нормальной лошадиной сыворотки кроликам не привело к изменениям уровня ПГЕ₂ во ВПК: он практически не отличался от контроля (1218,5±163,4 пг/мл и 1025,6±89,6 пг/мл соответственно).
  После интравитреального введения разрешающей дозы антигена кролику развивался иммунный воспалительный процесс — увеит, который клинически проявлялся светобоязнью, отеком век, хемозом, перикорнеальной инъекцией, отеком роговицы, преципитатами на эндотелии роговицы, опалесценцией ВПК, экссудатом в передней камере, рубеозом радужной оболочки глаза, образованием синехий и экссудацией в стекловидном теле.
  В динамике развития ЭИУ отмечался рост концентрации ПГЕ₂ во ВПК по сравнению с контролем во все сроки заболевания (p<0,001). При этом уровень ПГЕ₂ достигал пика своей концентрации к 3–7-м суткам, превышая в 3,8 и 4,4 раза таковой в контроле (соответственно на 3-и сутки — 3917,6±234,2 пг/мл и 7-е сутки — 4553,9±398,8 пг/мл), и сохранялся он примерно на этом уровне в течение 11 дней (на 14-е сутки — 3804,6±196,9 пг/мл). В дальнейшем — на 21-е сутки — его содержание достоверно снижалось (2014,5±115,8 пг/мл, p<0,05), однако оставалось выше контроля и на 30 день наблюдения (1759,0±105,3 пг/мл; p<0,001), что свидетельствует о незавершенности воспалительного процесса к этому моменту.
  По литературным данным, при травме, связанной с оперативным вмешательством по поводу возрастной катаракты, сопровождающейся имплантацией интраокулярной линзы, рост содержания ПГЕ₂ в слезе был зафиксирован на 1-е — 3-и сутки после операции, а к 7-м суткам началось его снижение [2]. Следовательно, в наших исследованиях при ЭИУ во ВПК была отмечена аналогичная динамика накопления ПГЕ₂ в первые 3-е суток наблюдения, что, вероятно, связано с общими механизмами развития воспалительного процесса. Однако динамика снижения концентрации этого медиатора отличалась, что может быть связано с различием в механизме развития воспалительного процесса: в первом случае он был обусловлен повреждением целостности тканей и имплантацией ИОЛ, а во втором — с действием антигена на сенсибилизированный организм.
  Таким образом, однократное подкожное введение нормальной лошадиной сыворотки кроликам не приводило к изменению уровня ПГЕ₂ во ВПК. При ЭИУ во ВПК содержание медиатора возрастало в течение 30 дней, достигая своего максимального уровня на 3–7 сутки. Вместе с тем уровень ПГЕ₂ во ВПК достоверно, снизившись к 21-м суткам, в дальнейшем практически не изменялся.
  
  Выводы. Развитие ЭИУ сопровождается повышением концентрации простагландина Е₂ во влаге передней камеры в течение всего срока наблюдения — 30 дней, достигая максимальных значений на 3–7-е сутки. Модель ЭИУ может быть полезной для доклинического отбора новых терапевтических средств.