Изучение процесса рубцевания операционной зоны в ранние сроки после антиглаукоматозной хирургии в эксперименте

    Избыточный процесс рубцевания сформированных путей оттока в послеоперационном периоде при антиглаукоматозных операциях является основной причиной неудовлетворительных гипотензивных результатов. Спаечный процесс в операционной зоне зависит от многих факторов, но основным остаётся травма тканей, нанесённая во время операции.

    Цель — изучить процесс рубцевания операционной зоны на гистоморфологическом и макроскопическом уровне в ранние послеоперационные сроки после антиглаукоматозной хирургии на лабораторных животных.

    Материал и методы

    Данное исследование проводилось в соответствии с требованиями приказа № 267 МЗ РФ от 19.06.2003 г. на базе ФГБОУ ВПО «Пензенская государственная сельскохозяйственная академия». Все эксперименты, уход и содержание животных осуществлялись в соответствии с Директивой № 63 от 22.09.2010 г. Президиума и Парламента Европы «О защите животных, используемых для научных исследований» и приказом Минздрава РФ № 267 от 19.06.2003 г. «Об утверждении правил лабораторной практики». Получено разрешение локального этического комитета ГБОУ ДПО «Пензенский институт усовершенствования врачей» Министерства здравоохранения РФ на проведение экспериментального исследования, протокол № 97 заседания от 19.02.2014 г.

    Все операции были проведёны на половозрелых самцах кроликов породы Шиншилла. Было сформировано две группы лабораторных животных одного возраста и одинакового веса по 3 головы в каждой. Длительность эксперимента составила 1 неделю.

    На глазах кроликов 1 группы (3 животных) были проведены следующие манипуляции: конъюнктива отсепарована от склеры, затем на поверхность последней нанесено 20 коагулятов с экспозицией 0,5 секунды. Далее выкроен склеральный лоскут на 1/3 её толщины склеры размером 5х5 мм. В конце на конъюнктиву наложен непрерывный шов. Коагуляция проводилась высокочастотным электрохирургическим аппаратом ЭХВЧ Фотек Е80 в режиме «би — коаг» на третьем уровне мощности коагуляции.

    На глазах кроликов 2 группы (3 животных) выполнена отсепаровка конъюнктивы от склеры с дальнейшим выкраиванием склерального лоскута без применения коагуляции. В ходе операции при отсепаровке лоскута возникло кровоизлияние из сосудов эписклеры, в связи с чем был проведен гемостаз. В конце на конъюнктиву наложен непрерывный шов.

    Весь ход операции является прототипом непроникающей глубокой склерэктомии и проведен для имитации воспалительного процесса в зоне операции с формированием рубцовой ткани.

    Методом воздушной эмболии лабораторные животные были выведены из эксперимента через 1 неделю после операции. Удалённые участки зоны операции фиксированы в 10% растворе нейтрального формалина, с последующим обезвоживанием и обезжириванием в спиртах восходящей концентрации. Из каждого фрагмента после стандартной проводки изготовили парафиновые блоки, после чего выполнили срезы толщиной 4 — 6 мкм и получили по 5 микропрепаратов, которые окрасили гематоксилин — эозином.

    Совместно с кафедрой «Клиническая морфология и судебная медицина с курсом онкологии» Медицинского института ФГБОУ ВПО «ПГУ» проводилось исследование гистологических срезов с использованием микроскопа фирмы «CarlZeiss» и фотографической насадки «Axioskop». Выполнили по 5 микрофотографий с каждого препарата. Проводили количественные измерения клеточного состава ткани в зоне операции — подсчитано число клеток соединительной ткани. Результаты обрабатывали вариационно — статистическими методами с помощью программы «Micromed Statistica».

    Результаты и обсуждение

    При осмотре оперированных глаз у кроликов первой группы в раннем послеоперационном периоде наблюдалось слизистое отделяемое, швы конъюнктивы состоятельны, края раны адаптированы, незначительные субконъюнктивальные кровоизлияния, выраженная воспалительная реакция в виде смешанной инъекции сосудов в зоне операции. Роговица прозрачная, глубина передней камеры средняя, водянистая влага и хрусталик прозрачные, рефлекс с глазного дна розовый. Пик воспалительного процесса наблюдался на 2 — 3 сутки.

    У кроликов второй группы воспалительная реакция оперированных глаз была выражена в умеренной степени и проявлялась в незначительной инъекции сосудов в области хирургического вмешательства. В зоне операции было выраженное субконъюнктивальное кровоизлияние.

    При гистоморфологическом исследовании препаратов, полученных через неделю после операции, в зоне коагуляции видны отложения фибриноида; отек, выражающийся в расслоении волокон, расширении щелевых пространств; беспорядочное расположение волокон соединительной ткани.

    При увеличении х400 среднее число фибробластов в поле зрения составило 41,2±6,6 клеток, число фиброцитов — 28,7±6,9 клеток. Соотношение фиброцитов и фибробластов в данном случае составило 1,4, что говорит об активном течении репаративного процесса.

    При гистоморфологическом исследовании препаратов, полученных у кроликов 2 — й группы, через неделю после операции все проявления повреждения (отложение фибриноида, отек и беспорядочное расположение волокон) были выражены в меньшей степени.

    При увеличении х400 среднее число фибробластов в поле зрения составило 37,3±7,5 клеток, число фиброцитов — 25,8±5,2 клеток. Соотношение фиброцитов и фибробластов в данном случае составило 1,4, что говорит об активном течении репаративного процесса.

    Выводы

    1. Применение диатермокоагуляции во время операции вызывает в раннем послеоперационном периоде выраженный воспалительный процесс в операционной зоне глаз кроликов.

    2. При гистоморфологическом исследовании препаратов проявления повреждения (отложение фибриноида, отек, беспорядочное расположение волокон) в первой группе были выражены в большей степени, чем во второй.

    3. При количественном измерении клеточного состава ткани в зоне операции число фибробластов и фиброцитов в первой группе больше, чем во второй.

    4. Интраоперационное применение диатермокоагуляции является существенной травмой для тканей глаза, которая вызывает выраженную воспалительную реакцию, ведущую к избыточному воспалению операционной зоны.