Характеристика 2D-культуры мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток лимба, полученной с использованием бессывороточной питательной среды

    Актуальность. Необходимость четкой стандартизации культивирования мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК), а также повышение его безопасности требует подбора бессывороточных сред.

    Цель. Оценить 2D-культуру ММСК лимба, полученную при использовании бессывороточной среды.

    Материал и методы. ММСК получены путем культивирования фрагментов лимба, выделенных из кадаверных глаз человека. Культивирование осуществлялось в двух различных составах питательных сред: контрольная группа – стандартная среда (DMEM/F12 (1:1), L-глутамин 2 мМ, антибиотики 1%, инсулин, дексаметазон, 10 об. % фетальной бычьей сыворотки (ФБС), опытная группа – бессывороточная среда (Stem MACS MSC Expansion Media XF). Культивирование осуществлялось в стандартных условиях (5% СО2, 37°C) с заменой питательной среды каждые 3 суток. Определения фенотипа клеток проводилось методом проточной цитофлуориметрии с использованием набора следующих маркеров: CD105, CD90, CD44, CD14, CD10, CD45, CD73, CD133, CD29, CD34, CD271. Оценивали способность полученных клеточных культур к дифференцировке в адипогенном, остеогенном и хондрогенном направлениях.

    Результаты. Полученные клеточные культуры имели характерную вытянутую фибробластоподобную форму. Проведенное цитофлуориметрическое исследование культуры клеток в обеих группах показало наличие экспрессии характерных маркеров ММСК CD105, CD90, CD44, CD73 СВ10, СВ29 и отсутствие экспрессии CD45, CD34, CD271. В опытной группе была выявлена экспрессия CD133 (1,5%). Результаты дифференцировки клеток были сопоставимы в обеих группах.

    Выводы. Применение бессывороточной среды Stem MACS MSC Expansion Media XF способствует получению культуры ММСК из зоны лимба донорского глаза, фенотипически и функционально схожей с культурой клеток ММСК, полученной при культивирование в стандартной среде. Эти данные могут быть использованы для применения в клинических исследованиях.