Лабораторная диагностика аденовирусной инфекции глаз (обзор литературы)

    Важным моментом в диагностике аденовирусных поражений глаз является клиническая картина заболевания. Тем не менее, в ряде случаев бывает необходимо дополнительное проведение лабораторных исследований для подтверждения диагноза наиболее часто встречающихся аденовирусного конъюнктивита или кератоконъюнктивита из-за наличия сходных клинических проявлений, которые могут иметь место при других инфекциях.

    С целью диагностики аденовирусной инфекции глаз применяют цитологические, вирусологические, серологические и иммунологические исследования.

    Цитологическое изучение соскобов с конъюнктивы у больных аденовирусными заболеваниями глаз позволяет обнаружить деструкцию клеток эпителия, вакуоли в ядрах, распад хроматина, образование гранулярных ядер, что особенно характерно. Метод имеет вспомогательное значение для диагностики, поскольку помогает лишь ориентировочно выявлять вирусную природу заболевания. Для АВК и ЭКК особенно характерен мононуклеарный тип отделяемого с преобладанием лимфоцитов и моноцитов [1-4, 10, 13].

    Культуральный метод считается «золотым стандартом» в диагностике аденовирусных заболеваний глаз. Он основан на размножении аденовируса, имеющегося в исследуемом материале, в частности, в соскобе с конъюнктивы или роговицы, слезной жидкости, слизи из носоглотки и др., в культуре клеток (например, таких как Hep2 – клетки рака гортани, Hela – клетки рака шейки матки и др.), чувствительных к аденовирусам. Индикацию вируса в клеточных культурах проводят по характеру цитопатического действия. Однако, поскольку данный метод трудоемок и требует наличия специализированной лаборатории, а выделение вируса занимает значительный по времени срок от момента взятия материалов до получения результата – от 10 дней до месяца, то он с практической целью используется редко [2, 14].

    Серологические исследования (реакции связывания комплемента, нейтрализации, пассивной гемагглютинации, иммуноферментный анализ) направлены на определение диагностически значимого (в 4 раза и более) нарастания титра антител в парных сыворотках, взятых в начале заболевания и при выздоровлении. Преимущество иммуноферментного анализа (ИФА) среди других методов серодиагностики состоит в простоте постановки реакции, высокой чувствительности, хорошей воспроизводимости и быстроте получения результатов. Данные методы исследования, однако, в настоящее время для диагностики аденовирусных заболеваний глаз практически не используются [2, 13].

    Экспресс-метод флуоресцирующих антител (МФА), предложенный Анджеловым В.О. в 1971 г. и обладающий довольно высокой специфичностью и достоверностью, позволяет определить этиологию заболевания путем обнаружения свечения аденовирусного антигена в соскобах с конъюнктивы больных в 33-74% случаев [18]. Метод заключается в том, что материал соскоба с конъюнктивы и роговицы наносят на предметное стекло, фиксируют и добавляют «меченую» красителем сыворотку, содержащую антитела к аденовирусу. В результате реакции образуются комплексы «антиген-антитело», излучающие свечение, которое определяется с помощью люминесцентного микроскопа. Результаты иммунофлуоресценции считаются положительными, если в препарате удается обнаружить не менее 10% клеток со специфическим свечением аденовирусного антигена [2].

    Следует, однако, обратить внимание, что эффективность диагностики при использовании данного метода зависит от длительности заболевания на момент обследования, в частности, она значительно выше в первые 7-8 дней заболевания [5, 8]. Так, Анджелов В.О. [цит. по: 2] обнаружил антиген аденовируса в эпителии соскоба с конъюнктивы методом МФА в первую неделю заболевания в 51,3% случаев, тогда как в последующие дни болезни – лишь в 15% случаев. По данным Казакбаева А.Г. [6], при вспышке ЭКК в 1984 г. в Республике Башкортостан с помощью МФА удалось диагностировать заболевание в первые 4 дня болезни у 78% больных, на 5-8 день – у 44%, на 9-11 день – у 25%, на 12-16 день – только у 17%. Кроме того, результаты иммунофлуоресцентного изучения соскоба с конъюнктивы, несмотря на быстроту получения ответа, зависят также от качества диагностического препарата, квалификации исследователя и субъективности оценки исследования [8].

    Результаты сравнительной оценки вирусологических методов лабораторной диагностики спорадических случаев аденовирусных конъюнктивитов [2] показали, что наиболее эффективным тестом явилось иммунофлуоресцентное исследование соскоба с конъюнктивы или культуры клеток HEp-2, инфицированное ее смывом (61%). Меньшей диагностической ценностью обладала изоляция вируса из смыва (47%), индикация вируса в крови больного путем изоляции вируса из нее (28%) или иммунофлуоресцентные исследования инфильтрированной кровью культуры клеток (32%). Цитологические исследования редко обнаруживали в клетках соскоба с конъюнктивы внутриядерные включения (10%).

    Повышает диагностические возможности стандартных тестов их сочетанное применение. По данным некоторых авторов [2], наиболее эффективным явилось одновременное использование метода МФА с изоляцией вируса из ее смыва в культуре клеток (95%) либо иммунофлуоресцентным изучением клеточной культуры, инфицированной смывом (88%). При этом в затяжной стадии заболевания только иммунофлуоресцентное исследование соскоба с конъюнктивы сохраняло свою эффективность.

    В настоящее время для диагностики острых и хронических аденовирусных заболеваний глаз (в т.ч. конъюнктивитов, кератоконъюнктивитов и увеитов) широко применяют иммунологический метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), основанной на выявлении ДНК вируса. Данная методика, известная еще с середины 90-х гг. прошлого века, по своей высокой чувствительности и специфичности (100%) сравнима с культуральным методом [7-9, 16]. К относительным недостаткам данного метода можно отнести сравнительно позднее получение результатов и возможные ложноположительные результаты. Кроме того, этот метод требует специального дорогого оборудования и высококвалифицированных специалистов.

    Этих недостатков во многом лишены иммунохроматографические методы эксресс-диагностики аденовирусных инфекций (выявляющие аденовирус в слезе и мазке с конъюнктивы). Они отличаются быстротой получения ответа (уже через 10-15 минут от момента взятия анализа), простотой выполнения («прикроватная диагностика») и учета результатов. Для исследования нет необходимости в наличии специальной аппаратуры, результаты определяются визуально. Эти исследования буквально можно проводить у постели больного [8, 11].

    Для этого используются 2 тест-системы – «RPS Аденодетектор» (Adeno Detector, Rapid Pathogen, Screening, США) и QuickStripe Adenovirus (Savyon, Израиль). Основой теста является определение гексонов (инфекционных протеинов) в слезной жидкости (по реакции антигена с антителом), что позволяет выявить любой из известных серотипов аденовируса [12]. При наличии аденовирусных антигенов в слезной жидкости на тест-полоске с биологическим материалом появляются две линии, что расценивается как положительный результат теста [7, 15-17]. Следует отметить, что аденодетектор может показывать достоверные результаты при длительности заболевания не более 7 дней.

    Таким образом, наиболее быстрым, чувствительным, специфичным и рациональным методом выявления аденовируса является полимеразная цепная реакция. При этом врач-офтальмолог может основываться на результатах этого метода как при остром, так и хроническом течении аденовирусной инфекции. А применение RPS-аденодетектора для экспресс-диагностики последней можно рекомендовать только при остром процессе в течение первой недели заболевания.