Патогенетическое обоснование применения флавоноидов для коррекции системы гемостаза культуры клеток конъюнктивального эпителия (in vitro) у больных хроническим неспецифическим конъюнктивитом

     Хронические конъюнктивиты (ХК) являются достаточно частым заболеванием в практике офтальмолога [8]. Более 40% обращений к врачу-офтальмологу в поликлинику составляют больные с конъюнктивитами [3]. По данным литературы число больных с конъюнктивитами возрастает, в зависимости от регионов, от 20 до 40-50% взрослого населения имеют хроническую форму заболевания [3].

    Этиологический фактор (вирусы, бактерии) способствуют острому развитию заболевания, но в силу разных причин (развития иммуно-биохимических процессов в тканях глаза) заболевание приобретает хроническое латентное течение, доставляя пациентам много неудобств. Причинами этого могут быть ухудшение экологической обстановки, широкое бесконтрольное применение различных медикаментов, использование токсических агентов в быту и на производстве, снижение общего иммунитета, отсутствие должной иммунной защиты со стороны самого глаза и организма в целом [10].

    Хронический воспалительный процесс на уровне эпителия при остром конъюнктивите в дальнейшем затрагивает все нижележащие слои, интерстициальную ткань и приводит к формированию основных морфологических, а также клинических проявлений конъюнктивита –гиперемии, множественным фолликулам, инфильтрации, отеку (вплоть до хемоза), слизисто-гнойному отделяемому и др. [1, 9, 16].

    Существование воспалительного процесса на уровне эпителия создает благоприятные условия (снижение иммунных факторов защиты) для внедрения микроорганизмов и их токсинов в ткань конъюнктивы, что приводит к прогрессированию и обострению ХК [5, 13].

    Повреждение эпителия облегчает доступ раздражающих экзогенных факторов к нервным окончаниям, способствует проникновению антигенных и аллергенных субстанций в подслизистый слой к клеткам, секретирующим провоспалительные медиаторы, что сопровождается снижением продукции нейтральных эндопептидаз, нейтрализующих биологически активные вещества и др. [2].

    В предыдущих наших исследованиях были выделены два варианта течения ХК с повышенным уровнем цитокинов (IL-1β и IL-4) в общем кровотоке и с нормальным уровнем провоспалительных цитокинов [7]. Нужно отметить, что у больных с повышенным уровнем цитокинов в системном кровотоке был более выраженный иммунный дисбаланс: экспрессия В-лимфоцитами поверхностных рецепторов CD14+ была повышена, чем у подобных больных с физиологическим уровнем провоспалительных цитокинов [7]. Нарушение гомеостатических механизмов на разных уровнях регуляции приводит к нарушению и извращению стереотипной динамики процесса, разобщению воспаления и регенерации, неадекватному фиброзу [4]. Процесс теряет защитно-приспособительный характер, и его можно назвать дисрегенерацией (патологическая регенерация) [2, 6, 11, 12]. Под влиянием липофлавона (в эксперименте in vitro) экспрессия СD14+ рецепторов лимфоцитов снижалась, что позволило нам дальнейшее исследование этого препарата.

    Липофлавон – оригинальный липосомальный препарат, лиофилизированный порошок для приготовления глазных капель, изготовленный с помощью нанотехнологий. Это противовоспалительное, репарационное, ангиопротекторное средство, объединяющее антиоксидантные, противовоспалительные, противовирусные свойства биофлавоноида кверцетина с антигипоксантным, антиоксидантным, мембранопротекторным действием липосомально-организованного фосфатидилхолина [6].

    ЦЕЛЬ

    Изучить влияние флавоноида – липофлавона – на функциональную активность процессов гемокоагуляции и фибринолиза культуры клеток конъюнктивального эпителия (in vitro) у больных хроническим неспецифическим конъюнктивитом.

    МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

    Обследовано 78 чел. (156 глаз). Из них 54 (108 глаз) пациента с ХК были разделены на группы в зависимости от уровня провоспалительных цитокинов (IL-1β, IL-4 и TNF-a): 1-я группа – 25 пациентов ХК с физиологическим уровнем провоспалительных цитокинов в системном кровотоке, что составило 46,3% от общего числа исследованных; 2-я группа – 29 пациентов ХК с повышенным уровнем цитокинов в сыворотке крови (53,7% соответственно).

    Контролем служили 24 здоровых донора, показатели крови которых были приняты за норму.

    Определение IL-1β, IL-4 и TNF-a в сыворотке крови и культуральной среде культуры клеток эпителия конъюнктивы определяли иммуноферментным методом с использованием наборов (ООО «Цитокины» IL-1b, протеиновый контур – TNF-a, IL-4).

    Оценка результатов осуществлялась фотометрически.

    Материалом исследования для определения фибринолитической и прокоагулянтной активности клеток эпителия конъюнктивы служили соскобы конъюнктивы. С клетками эпителия конъюнктивы каждого больного параллельно проводились несколько экспериментов: опыт 1: культивация эпителия в термостате при 37 °С в течение трех суток ® определение фибринолитической (активаторной) активности (ФА) культуральной среды по методу Astrup T., Mullertz S. [14], времени рекальцификации (ВР) по Bergerhof H., Roca L. [15]; опыт 2: культивация в тех же условиях, но с преинкубацией клеток эпителия с липофлавоном (0,05 мл) перед введением в культуральную среду ® культивация ® определение ФА, ВР; опыт 3: культивация в тех же условиях, но липофлавоном (0,05 мл/мл культуральной среды) вводится непосредственно в культуральную среду ® определение ФА, ВР.

    Результаты исследований обработаты методами вариационной статистики по программе «Medstat».

    РЕЗУЛЬТАТЫ

    Результаты исследования ФА культуры клеток эпителия конъюнктивы у больных 1-й и 2-й групп и динамика данного показателя под влиянием липофлавона представлены в табл. 1. Нами учитывался тот факт, что сама культуральная среда фибринолитической активностью не обладает, а в использованной нами культуральной модели присутствуют только клетки эпителия конъюнктивы. Поэтому фибринолитическая (активаторная) активность культуральной среды может быть обусловлена только синтезом активатора плазминогена непосредственно.

    Установлено, что у пациентов 2-й группы ФА эпителиальных клеток в сравнении с пациентами 1-й группы повышена в 1,9 раза (p<0,001).

    Если принять за основу, что данная модель в определенной степени моделирует процессы, происходящие в тканях конъюнктивы in vivo, то можно сделать вывод, что у пациентов 2-й группы повышение ФА in loko morbi, с одной стороны, является механизмом саногенеза, направленным на уменьшение фибриновых отложений, являющихся основой для прогрессирования воспаления и ремоделирования ткани в очаге воспаления. С другой стороны, увеличение протеолитической (фибринолитической) активности на уровне конъюнктивы, как указывают Solomon A. c соавт. [17], играет ключевую роль в трансформации неактивного IL-1α в биологически активную форму IL-1β с резким возрастанием цитокинового потенциала на уровне конъюнктивы.

    В опытах 2 и 3 под влиянием преинкубации клеток эпителия с липофлавоном у пациентов 1-й группы исследованный показатель возрастает на 38,7– 33,2% , а у пациентов 2-й группы – он снижается на 13,4–4,8% (табл. 1).

    При оценке полученных результатов нами учитывалось, что сфокусированная миграция лейкоцитов в зону воспаления связана с формированием градиента (ступенчатого нарастания от сосудистой стенки к центру очага воспаления) концентрации хемотаксинов, к которым относится и активатор плазминогена. Поэтому обнаруженное нами оппозитное действие липофлавона у пациентов 1-й и 2-й группы на ФА культуры эпителиальных клеток конъюнктивы можно оценить с позиции закона «биологической целесообразности» – повышение эффективности «шомпольной» функции ферментных систем конъюнктивы у пациентов 1-й группы, а также сбалансированности регионарного (ткани конъюнктивы) цитокинового потенциала и существенный механизм, направленный против ремоделирования (например, прогрессирования воспаления) тканей конъюнктивы у пациентов 2-й группы [2, 11].

    Также нами проведены исследования прокоагулянтной активности культуры клеток эпителия конъюнктивы у пациентов 1-й и 2-й групп и изучена динамика показателя под влиянием липофлавона (табл. 2).

    Анализируя представленные данные, нами учитывалось, что ВР укорачивается (показатель уменьшается) при повышении темпов свертывания и увеличивается при недостатке прокоагулянтов и повышении антикоагулянтной активности крови (здесь – культуральной среды). У пациентов 2-й группы ВР культуральной среды в сравнении с пациентами 1-й группы уменьшено на 19,9%. В экспериментальных моделях с липофлавоном (опыты 2 и 3) прокоагулянтная активность клеток эпителия снижается – исследованный показатель возрастает у пациентов 1-й группы на 15,8–12,5% , у пациентов 2-й группы – на 27,2–24,2% (табл. 2).

    Таким образом, нами установлена возможность липофлавон-опосредованной коррекции не только фибринолитической, но и прокоагулянтной активности тканей конъюнктивы, что способствует восстановлению естественного баланса в системе гемостаза и активации местного иммунитета [7].

    Указанные факты расцениваются нами как патофизиологическое обоснование целесообразности использования липофлавона для коррекции дисбаланса системы «гемокоагуляция-фибринолиз» (повышении фибринолитической и снижении прокоагулянтной активности) в тканях конъюнктивы у пациентов с ХК, что может позволить повысить эффективность лечения больных с ХК.

    ВЫВОДЫ

    Особенностью патогенеза хронического неспецифического конъюнктивита с повышенным уровнем IL-1β в системном кровотоке является особая форма регенераторно-пластической недостаточности, характеризующаяся достоверно более глубокими нарушениями фибринолитической (синтез активатора плазминогена) и прокоагулянтной активности клеток эпителия.

    Флавоноид – липофлавон – оказывает модулирующее влияние на систему гемостаза эпителия конъюнктивы, заключающееся в повышении фибринолитической и снижении прокоагулянтной активности эпителиоцитов.

    Указанные факты можно расценивать как патогенетическое обоснование целесообразности использования флавоноидов (липофлавона) для коррекции функциональной (фибринолитической) и прокоагулянтной активности клеток эпителия конъюнктивы у пациентов ХК, прежде всего, у лиц с повышенным уровнем IL-1β в системном кровотоке и соответственно более сниженным местным клеточным иммунитетом.

    

    Сведения об авторах

    Иванова Нанули Викторовна – доктор медицинских наук, профессор, зав. кафедрой офтальмологии ГУ «Крымский государственный медицинский университет им. С.И. Георгиевского».

    Короткова Елена Юрьевна – врач-офтальмологического микрохирургического отделения ГБУЗ РК «РКБ им. Н.А.Семашко»

    Ляшенко Наталья Игоревна – ассистент кафедры офтальмологии ГУ «Крымский государственный медицинский университет им. С.И. Георгиевского».