Перспективы анализа профиля провоспалительных цитокинов при эпителиальных опухолях слезной железы

    Актуальность

    Опухоли слезной железы (ОСЖ) представляют собой редкую, но клинически значимую группу новообразований орбиты. Среди них эпителиальные опухоли, такие как плеоморфная аденома (ПА) и рак слезной железы (РСЖ), составляют до 50% случаев. ПА считается наиболее частой доброкачественной опухолью слезной железы, в то время как РСЖ представляет собой злокачественное новообразование с агрессивным течением с инвазивным ростом и высоким риском метастазирования [1–3]. Дифференциальная диагностика между ПА и РСЖ представляет значительные трудности в клинической практике, что затрудняет выбор оптимальной тактики лечения и прогнозирования заболевания. Существующие на сегодняшний день инструментальные методы исследования не позволяют с высокой точностью отличить доброкачественные образования от злокачественных. Это подчеркивает необходимость поиска дополнительных диагностических инструментов, способных повысить точность дифференциальной диагностики эпителиальных ОСЖ. Одним из перспективных направлений является изучение иммунологических маркеров, в частности цитокинов, в биологических жидкостях. Цитокины играют ключевую роль в регуляции иммунного ответа и воспалительных процессов, а их дисбаланс может отражать патологические изменения в тканях, включая опухолевые трансформации. Анализ цитокинового профиля в слезной жидкости (СЖ) может предоставить информацию о локальных иммунных изменениях, связанных с опухолевым процессом, и служить дополнительным инструментом в дифференциальной диагностике между ПА и РСЖ.

    Кроме того, определение цитокинового профиля может иметь прогностическое значение, позволяя оценить агрессивность опухоли и потенциальный риск рецидива после лечения.

    Цель

    Оценить профиль основных провоспалительных цитокинов (IL-6, TNF-α, IL-17A) в слезной жидкости и сыворотке крови (СК) пациентов с эпителиальными ОСЖ.

    Материал и методы

    В исследование вошли 30 пациентов, включая здоровых добровольцев. Помимо стандартного офтальмологического обследования и таких визуализирующих методов исследования, как компьютерная томография и ультразвуковое исследование орбит, на этапе предоперационной подготовки проводился забор СЖ из обоих глаз пациентов в объеме не менее 50 мкл с помощью спринцовки со стерильным наконечником, а также СК. До проведения исследований пробы хранились при температуре минус 70 °C. Всех пациентов подвергли хирургическому лечению – орбитотомии. По результатам патогистологического исследования эпителиальные опухоли выявлены в 11 случаях, которые в дальнейшем разделены на 2 группы: 6 случаев ПА и 5 случаев РСЖ. Третью группу составили здоровые добровольцы. Тест-пробами для иммунологических исследований служили пробы СЖ и СК (53 пробы). К критериям исключения относились наличие воспалительных заболеваний глаз, тяжелой соматической патологии, системных инфекционных заболеваний, состояния иммунодефицита и прием иммунотропных препаратов. С помощью проточного цитометра BD FACS Canto II (Becton Dickinson, CША) и тест-системы IFN-γ/IL-2/IL-4/IL-6/IL- 10/IL-17A/TNFα Multiplex Detection Kits (Immunofluorescence Luminescence, China) определяли качественное и количественное содержание цитокинов в биологических жидкостях методом проточной цитофлуориметрии, затем в программе FACS Diva последовательно анализировали образцы, после чего в программе FlowCytomix Pro 2.3 производили расчет данных для получения калибровочных кривых и результатов. Полученные результаты сравнивали между группами и внутри групп с проведением статистического анализа.

    Результаты и обсуждение

    Результаты исследования частоты встречаемости и концентрации исследуемых провоспалительных цитокинов в СЖ и СК во всех трех группах представлены в таблице.

    Как видно из представленных данных, частота выявления исследуемых провоспалительных цитокинов в СЖ у пациентов с эпителиальными ОСЖ оказалась выше, чем в контрольной группе, как на стороне поражения, так и на здоровой контралатеральной стороне. Исключение составил IL-17A при РСЖ на стороне опухоли. В СК, напротив, частота выявления большинства цитокинов оказалась ниже, за исключением IL-6 при ПА. Концентрации большинства цитокинов в СЖ при наличии опухоли превышали медианные значения контрольной группы, особенно при злокачественном процессе, что, вероятно, отражает более выраженный локальный иммуновоспалительный ответ при РСЖ. Наиболее выраженную диагностическую информативность показал TNF-α: его уровень на стороне поражения при РСЖ более чем в 16 раз превышал соответствующие значения при ПА (p < 0,05), и он определялся у всех пациентов данной группы, тогда как при ПА выявлялся реже. В СК различия концентрации между группами были менее выраженными и неинформативными, что подчеркивает преимущество анализа локальных изменений в СЖ как более чувствительного диагностического подхода. Полученные результаты требуют подтверждения на более крупной выборке пациентов для оценки специфичности и диагностической ценности исследуемых цитокинов в дифференциальной диагностике эпителиальных ОСЖ.

    Цитокины, продуцируемые в опухолевом микроокружении, играют ключевую роль в патогенезе опухолей, принимая участие не только в инициации, но и в прогрессировании и метастазировании через сложные иммунные и клеточные взаимодействия. В литературе встречается ряд исследований, продемонстрировавший диагностическую ценность анализа цитокинов в СЖ при офтальмологических заболеваниях – воспалительных, аутоиммунных и опухолевых. Так, Kijlstra и соавт. первыми показали возможность использования СЖ для диагностики воспалительных состояний глаза, включая увеиты и кератиты, определяя уровни IL-1 и TNF-α [4]. В работе Garriz A. и соавт. на экспериментальных моделях было показано, что провоспалительные цитокины, включая TNF-α и IL-6, способны подавлять секреторную функцию железы [5]. Matsumura и соавт. обнаружили, что у детей с обструкцией слезных путей концентрации IL-6 и IL-8 в СЖ значительно повышены и коррелируют с клиническими симптомами [6]. В исследовании Huang и соавт. при эндокринной офтальмопатии также выявлены повышенные уровни IL-6, TNF-α и IL-17A, последний – в ассоциации с увеличением объема слезной железы [7]. Leonardi и соавт. зафиксировали повышение Th2-ассоциированных цитокинов (IL-4, IL-5, IL-13) у пациентов с весенним кератоконъюнктивитом, причем уровень IL-4 коррелировал с эозинофильной инфильтрацией [8]. Кроме того, цитокиновый профиль СЖ изучался при увеальной меланоме. Авторы показали, что на фоне манифестации опухоли в слезе повышались уровни 12 провоспалительных цитокинов, включая IL-6, IL-17A и TNF-α. Повышение VEGF-A и SDF-1α дополнительно свидетельствовало об активации ангиогенеза в условиях опухолевого воспаления [9].

    Заключение

    Таким образом, анализ цитокинового профиля в СЖ отражает локальные иммунные изменения при эпителиальных ОСЖ более точно, чем анализ СК, и может оказаться полезным в понимании отдельных аспектов патогенеза, а также открывать перспективы как для развития неинвазивных методов дифференциальной диагностики, так и для создания таргетных терапевтических стратегий, направленных на ключевые процессы канцерогенеза, роста и прогрессии опухоли.