Рис. 1. Биомикроскопическое исследование (А, х16) и зеркальная микроскопия (Б) правого глаза пациентки через 2 года после операции: роговица прозрачна, слой эндотелиальных клеток без патологии
Рис. 2. Проведение ОКТ (А), биомикроскопического исследования (Б, х10) и кератотопографии (В) того же глаза через 6 мес. после операции: роговица прозрачна, ее толщина – в норме, складок и признаков отторжения трансплантата не выявлено
Пациентке 76 лет с эндотелиальной дистрофией Fuchs при жизни провели эндотелиальную кератопластику с трансплантацией десцеметовой мембраны на правом глазу. Через 2 года после операции больная скончалась. В течение 36 час. после смерти оба глазных яблока были энуклеированы, из них выкроили два корнеосклеральных лоскута. Три аутопсированных глаза, которые невозможно было использовать для трансплантации, послужили контролем. До момента исследования все образцы хранились в органической среде. Корнеосклеральные лоскуты разделили на квадранты.
Рис. 3. Тот же глаз через 2 года после операции: проведение денситометрии показало, что полученные данные не отличаются от показателей контрольных роговиц
Рис. 4. Проведение зеркальной микроскопии того же глаза через 2 года после операции: рубцовой ткани или признаков воспалительной реакции в зоне интерфейса «донор-реципиент» не выявлено, коллагеновые волокна соединяют стромальное ложе реципиента с донорским трансплантатом (указано стрелками). Граница донорского трансплантата от задних слоев стромы реципиента визуализируется как зона прорастания (гематоксилин, х20)
Квадрант также разрезали на тонкие фрагменты, которые помещали в 1,0% буферный раствор тетраоксида осмия, после чего дегидратировали и размещали на эпоксидной смоле. Фрагменты толщиной 1,0 мкм разрезали и окрашивали толуидином синим для правильной ориентации. Далее ультратонкие фрагменты (70 нм) разрезали и окрашивали ацетатом уранила и цитратом свинца.
Трансмиссионную электронную микроскопию (ТЭМ) провели с использованием микроскопа CM 100 (Philips/FEI Corporation, Нидерланды). Глубину прорастания коллагеновых фибрилл измеряли с помощью анализатора изображения ImageJ (Bethesda).
Рис. 5. Проведение ТЭМ того же глаза (А) и контрольных глаз (Б) через 2 года после операции. В зоне интерфейса «донор-реципиент» выявлено прочное прилегание донорского трансплантата с роговичному ложу репициента, а также прорастание коллагеновых фибрилл стромы в донорский трансплантат (указано стрелками), глубина прорастания в среднем составляет ±400 нм. Ультраструктура ткани в зоне интерфейса «донор-реципиент» практически однородна и не отличима от данных контроля
Рис. 6. Проведение зеркальной микроскопии того же глаза: в зоне интерфейса «донор-реципиент» не видно образования рубцовой или гипертрофической ткани, визуализируется центральная область десцеметорексиса, а зона края донорского трансплантата по виду не отличается от прочих областей роговицы, расположенных ближе к центру роговицы
По виду оперированный глаз ничем не отличался от парного, роговица была прозрачной. Трансплантат плотно прилегал к роговичному ложу реципиента, признаков перекрытия ткани в зоне интерфейса «донор-реципиент» не выявлено.
При осмотре за щелевой лампой; на изображении, полученном по технологии Scheimpflug; а также при проведении оптической когерентной томографии (ОКТ) складок или признаков отторжения роговичного трансплантата не выявлено (рис. 2).
Аналогичные данные были получены при проведении гистологического исследования. Данные денситометрии, проведенной по технологии Scheimpflug, соответствовали данным, полученным при исследовании парного глаза в течение всего срока наблюдения (рис. 3).
Проведение зеркальной микроскопии исследуемого образца не выявило наличия рубцов или других патологических процессов, роговица после эндотелиальной кератопластики по виду не отличалась от роговицы контрольных глаз. Проведение ТЭМ в зоне интерфейса «донор-реципиент» выявило наличие нормальной ультраструктуры ткани. Выявлено прорастание коллагеновых фибрилл в донорский трансплантат, которые ничем не отличались от волокон контрольных роговиц (рис. 4, 5). При исследовании края донорского трансплантата с помощью зеркальной микроскопии отметили наличие нормальной архитектуры ткани без гипертрофии или рубцов, что было аналогичным состоянием ткани контрольных образцов (рис. 6).
Отсутствие патологических процессов, образования рубцовой и гипертрофированной ткани, разрыва коллагеновых волокон стромы, вновь образованного слоя в зоне интерфейса «донор-реципиент» свидетельствует о преимуществах эндотелиальной кератопластики с трансплантацией десцеметовой мембраны по сравнению с другими видами кератопластики.
E. Livny, J.S. Parker, M. van der Kaaij, et al. Postmortem ultrastructural analysis of a cornea transplanted with descemet membrane endothelial keratoplasty // Cornea.– 2014.– Vol. 33.– P. 790-794.