Спектр и чувствительность микробиома глазной поверхности

    Актуальность

    В микробиоме конъюнктивальной полости превалирует грамположительная флора, однако нередко у пациентов с иммунодефицитными состояниями и сахарным диабетом встречается грамотрицательные микроорганизмы [1, 2]. Исследование микробиома век показало, что количество выделенных бактерий было больше, чем с конъюнктивы, при этом их спектр мало отличался [3]. По данным литературы, возбудителями эндофтальмита после хирургии катаракты в 88,6 % были грамположительные бактерии, в норме встречающиеся в конъюнктивальной полости, среди которых значимо преобладал Staphylococcus epidermidis (48,6 %) [4]. Это обусловливает важность антисептических мер профилактики, в особенности до и во время проведения факоэмульсификации [5]. Для профилактики эндофтальмита наиболее часто используются 5 % повидон-йод и препараты группы фторхинолонов (ФХ) [6].

    Однако необходимо обращать внимание на тенденции роста резистентности к препаратам этой группы [4] При этом данных о наличии резистентности к повидон-йоду в отличие от других антисептиков на данный момент в литературе нет. Рост антибиотикорезистентности прогнозируется как одна из самых больших угроз здоровью человека в будущем [7]. Альтернативой или дополнением к применению антибиотиков может быть использование препаратов группы бактериофагов, которые являются высокоспецифичными и высокоэффективными биологическими препаратами антибактериального действия, позволяют элиминировать возбудителя, не нарушая состав остальной микрофлоры и широко применяются с указанной целью в хирургии, оториноларингологии и других специальностях [8, 9, 10]. Именно поэтому проведение периодического мониторинга микрофлоры глазной поверхности с оценкой чувствительности к антимикробным препаратам и бактериофагам является важным этапом для понимания современных тенденций роста устойчивости и определения наиболее эффективных средств профилактики послеоперационных инфекционных осложнений.

    Цель

    Оценка спектрального состава и чувствительности к антимикробным препаратам, в том числе – к антисептикам, а также к бактериофагам микрофлоры глазной поверхности у пациентов перед факоэмульсификацией катаракты.

    Материал и методы.

    Обследованы 60 человек (60 глаз), 26 мужчин и 34 женщины, в возрасте от 48 до 85 лет. Средний возраст пациентов составил 71,40 ± 0,99 года.

    Всем пациентам на до операции произведен забор микробиологического материала из 3 локусов: конъюнктивальной полости (содержимое конъюнктивальной полости), свободного края век (отделяемое мейбомиевых желез), слезоотводящих путей (аспират). Материал доставлялся в лабораторию в тот же день для посева по методу «Голд» на следующие питательные среды: кровяной агар, желточно-солевой агар, агар Сабуро. После подращивания в термостате при 37 °С через 24 ч выделяли «чистую культуру» и проводили идентификацию микроорганизмов масс-спектрометрическим методом MALDI-TOF (Bruker) по протоколу EUCAST с дополнительной расширенной оценкой антимикробных, применяемых в офтальмологии и иммуно-биологических препаратов (бактериофагов). Чувствительность к противомикробным препаратам (АМП) определяли дискодиффузионным методом, а к бактериофагам – капельным методом. Среди бактериофагов оценка производилась у двух производителей: филиал АО НПО «Микроген» в г. Пермь «Пермское НПО «Биомед» (пиобактериофаг поливалентный – «Секстафаг», интести-бактериофаг – «Интестифаг» №1, стафилококковый бактериофаг – «Стафилофаг» №1, стрептококковый бактериофаг – «Стрептофаг») и филиал АО НПО «Микроген» в Нижнем Новгороде «ИМБИО» (пиобактериофаг комплексный – «Пиофаг», интести-бактериофаг – «Интестифаг» №2, стафилококковый бактериофаг – «Стафилофаг» №2). Всего от пациентов получено 180 проб клинического материала. В ходе исследования выявлены микроорганизмы как в монокультуре, так и в микробных ассоциациях, состоящих из 2 и более видов микробов. Таким образом, получено 149 (77,6 %) изолятов и 43 (22,4 %) случая отсутствия роста микробов.

    Результаты

    Спектр микроорганизмов

    Спектр бактерий в трех локусах был представлен в 70,6 % грамположительной флорой: Staphylococcus epidermidis (48,4 %), Staphylococcus aureus (3,1 %), Corynebacterium macginley (3,1 %), Staphylococcus lugdunensis (2,6 %), Staphylococcus hominis (2,1 %), Staphylococcus warneri (2,1 %), Streptococcus oralis (2,1 %), Corynebacterium amycolatum (2,1 %), Staphylococcus haemolyticus (1,0 %), Staphylococcus pasteuri (1,0 %), Corynebacterium mastitidis (1,0 %), Staphylococcus capitis (0,5 %), Micrococcus luteus (0,5 %), Kocuria kristinae (0,5 %) и Propionibacterium (0,5 %).

    Грамотрицательная флора выявлена только в 6,8 % посевов и была представлена Enterobacter cloacae (4,7 %), Moraxella osloensis (1,6 %), Acinetobacter pitii (0,5 %).

    Таким образом, больше 1/2 спектра (60,8 %) представлена различными стафилококками, где наибольший удельный вес занимает эпидермальный стафилококк. При этом среди грамположительных палочек чаще всего встречались коринебактерии (6,2 %), а среди грамотрицательных – E. cloacae (4,7 %). Распределение микроорганизмов по локусам представлено в табл. 1.

    Чувствительность выявленных микроорганизмов к АМП и бактериофагам

    Результаты определения чувствительности выделенных изолятов представлены в табл. 2.

    Полученный видовой состав микрофлоры характерен преобладанием стафилококковой флоры, в частности эпидермального стафилококка, что согласуется с данными большинства исследований [1–3, 11, 12]. Сравнительно большая обсемененность век S. epidermidis (52 %) в отличие от конъюнктивальной полости (42 %) соответствует данным другого исследования, где S. epidermidis выделяли с век в большем числе случаев (94,7 %), в сравнении с конъюнктивальной полостью (54,28 %) [3]. Однако в нашем исследовании разница в обсемененности исследуемых локусов между собой была меньше. При этом конъюнктивальная полость характеризовалась более разнообразной микробиотой.

    Все изоляты показали 100 % чувствительность к кожным антисептикам №1 и №2 (раствор этилового спирта 79 % и хлоргексидина биклюконата 0,5 %; раствор пропилового спирта 70 % и дидецилдиметиламмония хлорит 0,1 %). Интересным фактом оказалось, что разведения повидон-йода до 3 % все еще обладали антимикробной активностью для 100 % выделенных микроорганизмов при оценке in vitro. При исследовании местных антисептиков к пиклоксидину не было получено резистентных изолятов, в отличие от «Окомистина». Высокую активность в отношении микрофлоры конъюнктивальной полости пиклоксидин также демонстрирует и в другом исследовании [11]. Среди всех штаммов стафилококков ни один не обладал устойчивостью к «Стафилофагу» №2 и только 1 % был устойчив к «Интестифагу» №2. Наибольшее количество микроорганизмов, резистентных к АМП, используемым в офтальмологии, зафиксировано к препаратам группы ФХ: ципрофлоксацину (16,7 %), левофлоксацину (16,1 %), моксифлоксацину (16,1 %), а также к цефтазидиму (16,1 %) и азитромицину (15,4 %). Низкоэффективными против стафилококковой флоры оказались «Интестифаг» №1, «Стафилофаг» №1, «Пиофаг» и «Секстафаг» с частотой выявления устойчивости от 40 до 100 %. Наименьший удельный вес резистентных микроорганизмов отмечался у антибиотиков группы аминогликозидов: тобрамицина (3,4 %) и гентамицина (3,4 %).

    По данным литературы, в 2008 г. у представителей микрофлоры, выделенных из конъюнктивальной полости пациентов с катарактой, отмечалась низкая резистентность к препаратам группы ФХ и аминогликозидов [12]. Через 10 лет по данным схожего исследования отмечали больший удельный вес устойчивых бактерий среди аминоглизидов: тобрамицина (21,25 %), гентамицина (17,5 %), чем ФХ: ципрофлоксацина (13,75 %), офлоксацина (10 %), левофлоксацина (10 %), моксифлоксацина (0 %) [11]. В нашем исследовании наблюдается противоположная картина: доля резистентных микроорганизмов к ФХ оказалась выше в сравнении с аминогликозидами.

    Заключение

    Антимикробная активность исследуемых АМП и бактериофагов различалась в отношении разных видов микроорганизмов. Ввиду изменчивости активности АМП с течением времени, по данным литературы, разумно проводить периодический мониторинг. В зависимости от полученных данных корректировать схемы противомикробной профилактики. По нашим результатам, кожные антисептики, используемые для обработки операционного поля, местные антисептики, антибиотики группы аминогликозидов и «Стафилофаг» №2, «Интестифаг» №2 обладают наибольшей антимикробной активностью для выделенных микроорганизмов при оценке in vitro. Исходя из этого, целесообразно дальнейшее изучение по применению препаратов «Стафилофаг» №2 и «Интестифаг» №2.