Способ децеллюляризации и криоконсервации роговичной лентикулы для интрастромальной кератофакии

    Патент РФ № 2793384 (31.03.2023)

    Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано с целью проведения рефракционных вмешательств на роговице с помощью интрастромальной кератофакии, используя при этом в качестве трансплантата криоконсервированную и децеллюляризированную роговичную лентикулу.

    Способ децеллюляризации и криоконсервации роговичной лентикулы для интрастромальной кератофакии характеризуется тем, что в стерильных условиях инкубируют лентикулу в 1,5 М растворе хлорида натрия в течение 48 часов с заменой через 24 часа, затем лентикулу инкубируют в растворе ДНКазы 5 Ед/мл и РНКазы 5 Ед/мл в течение 48 часов, после чего лентикулу промывают в фосфатно-буферном растворе (PBS), рН 7,4, в течение 72 часов с заменой раствора PBS каждые 24 часа; на всех этапах децеллюляризации лентикулы используют непрерывное встряхивание в термошейкере при комнатной температуре; после децеллюляризации лентикулу криоконсервируют в стерильных условиях, для чего лентикулу сначала трижды по 5 минут отмывают в растворе PBS и переносят в криопробирку, содержащую 0,9 мл раствора для хранения роговицы и 0,1 мл 10% диметилсульфоксида, далее криопробирку с лентикулой помещают в контейнер для криоконсервации, который на ночь переносят в холодильник с температурой минус 80 градусов по Цельсию, на следующий день контейнер с лентикулой переносят в сосуд Дьюара до запланированной процедуры интрастромальной кератофакии, лентикулу извлекают из сосуда Дьюара и размораживают в течение 5 минут на водяной бане при 37 градусах по Цельсию, затем проводят ее трехкратный цикл отмывания в растворе PBS, после чего лентикулу переносят в операционный блок для проведения процедуры интрастромальной кератофакии. Изобретение обеспечивает создание банка роговичной ткани – лентикул, обладающих сохранностью коллагенового каркаса и отсутствием клеточного содержимого, что обусловливает их высокую прозрачность и низкий уровень иммунногенности.