Онлайн доклады

Онлайн доклады

Клинические случаи в офтальмологии

Клинические случаи в офтальмологии

Впервые выявленная глаукома: проблемы и возможности

Впервые выявленная глаукома: проблемы и возможности

Пироговский офтальмологический форум 2023

Пироговский офтальмологический форум 2023

Сателлитные симпозиумы в рамках Пироговского офтальмологического форума 2023

Сателлитные симпозиумы в рамках Пироговского офтальмологического форума 2023

Сателлитные симпозиумы в рамках III Всероссийской конференции с международным участием «Воспаление глаза 2023»

Сателлитные симпозиумы в рамках III Всероссийской конференции с международным участием «Воспаление глаза 2023»

Проблемные вопросы глаукомы: Искусственный интеллект в диагностике и мониторинге XII Международный симпозиум

Проблемные вопросы глаукомы: Искусственный интеллект в диагностике и мониторинге XII Международный симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках 23-го Всероссийского научно-практического конгресса с  международным участием «Современные технологии  катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках 23-го Всероссийского научно-практического конгресса с международным участием «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

NEW ERA Способы трансcклеральной фиксации ИОЛ

NEW ERA Способы трансcклеральной фиксации ИОЛ

Сателлитные симпозиумы в рамках XVI Российского общенационального офтальмологического форума

Сателлитные симпозиумы в рамках XVI Российского общенационального офтальмологического форума

Ромашка Фёдорова: 35 лет в движении. Всероссийская научно-практическая конференция

Ромашка Фёдорова: 35 лет в движении. Всероссийская научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках Северо-Кавказского офтальмологического саммита

Сателлитные симпозиумы в рамках Северо-Кавказского офтальмологического саммита

NEW ERA Новые молекулы в лечении макулярной патологии

NEW ERA Новые молекулы в лечении макулярной патологии

Сателлитные симпозиумы в рамках XXIX Международного офтальмологического конгресса «Белые ночи»

Сателлитные симпозиумы в рамках XXIX Международного офтальмологического конгресса «Белые ночи»

Сателлитные симпозиумы в рамках Всероссийской научно-практической конференции с международным участием  «Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия»

Сателлитные симпозиумы в рамках Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия»

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Сателлитные симпозиумы в рамках 20 Всероссийской научно-практической конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии»

Сателлитные симпозиумы в рамках 20 Всероссийской научно-практической конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии»

NEW ERA Особенности имплантации мультифокальных ИОЛ

NEW ERA Особенности имплантации мультифокальных ИОЛ

XXX Научно-практическая конференция офтальмологов  Екатеринбургского центра МНТК «Микрохирургия глаза»

XXX Научно-практическая конференция офтальмологов Екатеринбургского центра МНТК «Микрохирургия глаза»

Прогрессивные технологии микрохирургии глаза в реальной клинической практике. Научно-практическая конференция

Прогрессивные технологии микрохирургии глаза в реальной клинической практике. Научно-практическая конференция

Пироговский офтальмологический форум

Пироговский офтальмологический форум

Глаукома. Избранные вопросы патогенеза, профилактики, диагностики, лечения. Всероссийская офтальмологическая конференция

Глаукома. Избранные вопросы патогенеза, профилактики, диагностики, лечения. Всероссийская офтальмологическая конференция

Терапия глаукомы. Практический подход и поиск решений в дискуссии

Терапия глаукомы. Практический подход и поиск решений в дискуссии

NEW ERA Хирургическое лечение глаукомы: НГСЭ

NEW ERA Хирургическое лечение глаукомы: НГСЭ

Сателлитные симпозиумы в рамках 22-го Всероссийского научно-практического конгресса «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках 22-го Всероссийского научно-практического конгресса «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ - 2022

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ - 2022

Современные достижения лазерной офтальмохирургии Всероссийский научный симпозиум

Современные достижения лазерной офтальмохирургии Всероссийский научный симпозиум

Юбилейная X научно-практическая конференция, посвященная 35-летию Чебоксарского филиала ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н. Федорова»

Юбилейная X научно-практическая конференция, посвященная 35-летию Чебоксарского филиала ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н. Федорова»

NEW ERA Хирургия осложнённой катаракты

NEW ERA Хирургия осложнённой катаракты

NEW ERA Оптическая когерентная томография. Критерии активности макулярной неоваскуляризации

NEW ERA Оптическая когерентная томография. Критерии активности макулярной неоваскуляризации

NEW ERA Особенности лечения отслойки сетчатки

NEW ERA Особенности лечения отслойки сетчатки

Шовная фиксация ИОЛ

Мастер класс

Шовная фиксация ИОЛ

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Сателлитные симпозиумы в рамках I Дальневосточного офтальмологического саммита

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Рефракционная хирургия хрусталика. Точно в цель. Научно-практический семинар

Восток - Запад 2022 Международная конференция по офтальмологии

Восток - Запад 2022 Международная конференция по офтальмологии

Целевые уровни ВГД в терапии глаукомы

Вебинар

Целевые уровни ВГД в терапии глаукомы

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции «Невские горизонты - 2022»

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции «Невские горизонты - 2022»

Новые технологии в офтальмологии 2022

Новые технологии в офтальмологии 2022

ОКТ: новые горизонты

Сателлитный симпозиум

ОКТ: новые горизонты

Превентивная интрасклеральная фланцевая фиксация ИОЛ при подвывихе хрусталика

Вебинар

Превентивная интрасклеральная фланцевая фиксация ИОЛ при подвывихе хрусталика

Лечение глаукомы: инновационный вектор - 2022. III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Лечение глаукомы: инновационный вектор - 2022. III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Вебинар компании «Rayner»

Вебинар компании «Rayner»

Цикл онлайн дискуссий компании «Акрихин» «О глаукоме и ВМД в прямом эфире»

Цикл онлайн дискуссий компании «Акрихин» «О глаукоме и ВМД в прямом эфире»

Алгоритм ведения пациентов с астенопией после кераторефракционных операций

Вебинар

Алгоритм ведения пациентов с астенопией после кераторефракционных операций

Cовременные технологии диагностики патологий заднего отдела глаза

Сателлитный симпозиум

Cовременные технологии диагностики патологий заднего отдела глаза

Вебинары компании  «Акрихин»

Вебинары компании «Акрихин»

Снижение концентрации «Бримонидина», как новое решение в терапии у пациентов с глаукомой

Вебинар

Снижение концентрации «Бримонидина», как новое решение в терапии у пациентов с глаукомой

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Актуальные вопросы офтальмологии: в фокусе – роговица

Вебинар

Актуальные вопросы офтальмологии: в фокусе – роговица

XIX Конгресс Российского глаукомного общества  «19+ Друзей Президента»

XIX Конгресс Российского глаукомного общества «19+ Друзей Президента»

Пироговский офтальмологический форум

Пироговский офтальмологический форум

Кератиты, язвы роговицы

Вебинар

Кератиты, язвы роговицы

Актуальные вопросы офтальмологии

Вебинар

Актуальные вопросы офтальмологии

Всероссийский консилиум. Периоперационное ведение пациентов с глаукомой

Сателлитный симпозиум

Всероссийский консилиум. Периоперационное ведение пациентов с глаукомой

Трансплантация роговично-протезного комплекса у пациента с васкуляризированным бельмом роговицы

Трансплантация роговично-протезного комплекса у пациента с васкуляризированным бельмом роговицы

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Клинические случаи в офтальмологии

Клинические случаи в офтальмологии

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Впервые выявленная глаукома: проблемы и возможности

Впервые выявленная глаукома: проблемы и возможности

Сателлитные симпозиумы в рамках Пироговского офтальмологического форума 2023

Сателлитные симпозиумы в рамках Пироговского офтальмологического форума 2023

Пироговский офтальмологический форум 2023

Пироговский офтальмологический форум 2023

Сателлитные симпозиумы в рамках III Всероссийской конференции с международным участием «Воспаление глаза 2023»

Сателлитные симпозиумы в рамках III Всероссийской конференции с международным участием «Воспаление глаза 2023»

Проблемные вопросы глаукомы: Искусственный интеллект в диагностике и мониторинге XII Международный симпозиум

Проблемные вопросы глаукомы: Искусственный интеллект в диагностике и мониторинге XII Международный симпозиум

Сателлитные симпозиумы в рамках 23-го Всероссийского научно-практического конгресса с  международным участием «Современные технологии  катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

Сателлитные симпозиумы в рамках 23-го Всероссийского научно-практического конгресса с международным участием «Современные технологии катарактальной, рефракционной и роговичной хирургии»

NEW ERA Способы трансcклеральной фиксации ИОЛ

NEW ERA Способы трансcклеральной фиксации ИОЛ

Сателлитные симпозиумы в рамках XVI Российского общенационального офтальмологического форума

Сателлитные симпозиумы в рамках XVI Российского общенационального офтальмологического форума

Ромашка Фёдорова: 35 лет в движении. Всероссийская научно-практическая конференция

Ромашка Фёдорова: 35 лет в движении. Всероссийская научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках Северо-Кавказского офтальмологического саммита

Сателлитные симпозиумы в рамках Северо-Кавказского офтальмологического саммита

NEW ERA Новые молекулы в лечении макулярной патологии

NEW ERA Новые молекулы в лечении макулярной патологии

Сателлитные симпозиумы в рамках XXIX Международного офтальмологического конгресса «Белые ночи»

Сателлитные симпозиумы в рамках XXIX Международного офтальмологического конгресса «Белые ночи»

Сателлитные симпозиумы в рамках Всероссийской научно-практической конференции с международным участием  «Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия»

Сателлитные симпозиумы в рамках Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Лазерная интраокулярная и рефракционная хирургия»

Все видео...
 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст
УДК:УДК 577. 344

DOI: https://doi.org/10.25276/0235-4160-2018-1-78-82

Сравнительная оценка содержания меланина в составе меланосом и меланолипофусциновых гранул клеток ретинального пигментного эпителия глаза человека


    Актуальность

     Ретинальный пигментный эпителий (РПЭ) глаза человека содержит три основных типа пигментных гранул: меланопротеиновые гранулы или меланосомы, липофусциновые гранулы («пигмент старости») и сложные меланолипофусциновые гранулы, образующиеся при слиянии липофусциновых гранул с меланосомами [7, 9].

    Меланосомы – гранулы, в которых синтезируется меланопротеиновый биополимер, образуются в клетках РПЭ еще на стадии эмбрионального развития и выполняют свои физиологические функции в течение всей жизни организма, поскольку меланин в этих постмитотических клетках практически не обновляется [4].

    Два других типа пигментных гранул – липофусциновые и меланолипофусциновые – появляются и накапливаются в клетках РПЭ с возрастом [7, 9].

    Меланосомы, локализованные в теле и отростках клетки РПЭ глаза, выполняют несколько функций: экранирующую, уменьшая хроматическую аберрацию и тем самым увеличивая остроту зрения, и антиоксидантную, защищая клетку от окислительного стресса [10, 11, 13, 15]. С возрастом (как правило, после 40 лет) в клетках РПЭ происходит постепенное уменьшение концентрации меланина и количества меланосом, что было установлено еще в 80-е гг. в работах Feeney-Burns с использованием морфологических и биохимических методов [8, 16]. Если в возрастной группе до 20 лет меланосомы занимают примерно 8% объема клетки РПЭ, то в возрастной группе 41-90 лет этот объем постепенно уменьшается до 3,5% [9], а в возрастной группе 90-101 год меланосомы практически полностью заменяются смешанными меланолипофусциновыми гранулами [8].

    Предполагается, что меланолипофусциновые гранулы образуются как результат слияния меланосом с липофусциновыми гранулами, что происходит в клетках РПЭ с возрастом [7]. Именно этот процесс, возможно, и ведет к уменьшению количества меланосом в клетках РПЭ, а меланиновый пигмент в возрастной группе после 90 лет существует в основном только в виде меланолипофусцина [8]. Таким образом, с возрастом в клетках РПЭ количество меланосом уменьшается, а количество липофусциновых и меланолипофусциновых гранул увеличивается [7-9].

    Известно, что меланиновые пигменты как в составе меланосом, так и в виде синтетического меланина дают стабильный синглетный сигнал ЭПР с высокой концентрацией спинов и g-фактором свободного электрона [2, 6]. Поэтому метод ЭПР активно используется для исследования меланинсодержащих структур и тканей [2, 6].

    Цель

    Изучение содержания меланина в составе меланосом и меланолипофусциновых гранул, выделенных из клеток ретинального пигментного эпителия кадаверных глаз человека.

    Материал и методы

    Реактивы

    В работе использовали реактивы производства «Sigma», «Sigma-Aldrich» и «Fluka».

    Выделение меланосом и меланолипофусциновых гранул из клеток ретинального пигментного эпителия кадаверного глаза человека

    Кадаверные глаза доноров разных возрастов без видимых патологий были получены из Глазного тканевого банка ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России. Пигментные гранулы были выделены из клеток ретинального пигментного эпителия с помощью модифицированной методики, предложенной в работе [5]. Клетки РПЭ в 0,1 М К-фосфатном буфере, рН 7,4, обрабатывали ультразвуком два раза по 45 с, при 40° С и максимальном резонансе, после чего неразрушенные клеточные мембраны удаляли центрифугированием при 60g в течение 15 мин. Полученный супернатант центрифугировали при 6000g в течение 15 мин, осадок ресуспендировали в 0,3 М сахарозе и центрифугировали в градиенте плотности сахарозы (2,0; 1,8; 1,6; 1,55; 1,5; 1,4; 1,2; 1,0;) при 103000g в течение 1 часа. В процессе центрифугирования происходило разделение пигментных гранул на фракции. Меланосомы образовывали темно-коричневый осадок. Между слоями с плотностью сахарозы 1,5 и 1,6 М концентрировались слой меланолипофусциновых гранул.

    Осадок меланосом, слои меланолипофусциновых гранул отмывали от сахарозы К-фосфатным буфером, ресуспендировали в фосфатном буфере и хранили в морозильной камере при -20° С.

    Количество гранул определяли микроскопически, используя флуоресцентный микроскоп, снабженный фотокамерой (Olympus DP22), и камеру Горяева.

    Измерение сигнала ЭПР меланина

    Спектры ЭПР-образцов были получены в Центре магнитной спектроскопии Института биохимической физики РАН.

    Образцы меланосом и меланолипофусциновых гранул для анализа методом ЭПР готовили с помощью насадки из тефлоновой трубочки длиной 10-15 мм и внутренним диаметром 0,45 мм. На каждую пробу отбирали суспензию меланосом и меланолипофусциновых гранул объемом 0,3 мл и быстро в тефлоновой трубочке замораживали в жидком азоте (-196°С). Затем из трубочки поршнем выдавливали замороженный столбик образца. Образцы сохраняли в замороженном виде до момента измерения. Регистрацию спектров ЭПР-образцов проводили при 77°К на радиоспектрометре ЭПР «Bruker EMX» (Германия). Условия записи спектров ЭПР: ΔН развертка – 50 Гс; Н центр – 3476 Гс; амплитуда модуляции – 3 Гс, постоянная времени – 100 мсек, мощность СВЧ – 20 мкВт. Эталон для определения концентрации спинов – УДА № 5, сертификат о калибровке № 905/910-2012.

    Синтез ДОФА-меланина

    Синтетический ДОФА-меланин был получен в ходе окислительной полимеризации диоксифенилаланина в слабощелочной среде (рН 8,2) и очищен по методике, описанной в работе [12].

    Статистическая обработка данных

    Статистическая обработка данных была выполнена с использованием t-критерия Стьюдента с доверительным интервалом 95%.

    Результаты

     В первой серии опытов изучались и сравнивались спектры ЭПР и параметры этих спектров для меланосом и меланолипофусциновых гранул, выделенных из клеток РПЭ кадаверных глаз человека, и синтетического ДОФА-меланина (рис., табл. 1).

    На рисунке представлены спектры ЭПР меланосом (А) и меланолипофусциновых гранул (В), выделенных из клеток РПЭ доноров разных возрастов, и синтетического ДОФА-меланина (С).

    Как видно из рисунка, спектры ЭПР обоих типов гранул похожи и представляют собой одиночную синглетную линию, слегка ассиметричную. Стабильный узкий сигнал с высокой концентрацией спинов характерен для природных эумеланинов и ДОФА-меланина – синтетического аналога эумеланинов [1, 3, 6, 14].

    В таблице 1 сравниваются основные параметры спектров ЭПР – g- фактор и ΔН (полуширина линии) меланосом и меланолипофусциновых гранул РПЭ доноров разных возрастов и ДОФА-меланина. Как видно, значения данных параметров спектров ЭПР для обоих типов гранул и синтетического ДОФА-меланина достаточно близки и свидетельствуют об одном источнике происхождения этих спектров – меланине.

    В следующей серии опытов (табл. 2) изучались и сравнивались концентрации парамагнитных центров в меланосомах и меланолипофусциновых гранул из РПЭ глаз доноров разных возрастных категорий.

    Как следует из табл. 2, практически для всех РПЭ разных возрастных групп соблюдается следующая тенденция: концентрация парамагнитных центров в одной меланосоме превышает концентрацию парамагнитных центров в одной меланолипофусциновой грануле.

    Из девяти исследованных возрастных групп доноров только в двух группах концентрация спинов на одну гранулу была примерно одинакова для меланосом и меланолипофусциновых гранул РПЭ.

    Наблюдаемый разброс в концентрации парамагнитных центров на одну гранулу для меланосом варьирует в пределах (0,8-3,5)×106 спинов, а для меланолипофусциновых гранул – в пределах (0,8-2,4)×106 спинов. Подобный разброс, возможно, связан с индивидуальными особенностями доноров, а именно с различиями в пигментации глаз доноров [9].

    В среднем, по всем изученным глазам (160 глаз, p<0,05) концентрация парамагнитных центров, отнесенная на одну гранулу, составляла (2,37±0,36)×106 и (1,60±0,22)×106 для меланосом и меланолипофусциновых гранул соответственно.

    Средняя величина (по всем образцам и всем возрастным категориям) превышения концентрации меланина в меланосоме по сравнению с меланолипофусциновой гранулой (т.е. величина отношения концентрации парамагнитных центров МС/МЛФ) составляла 1,49±0,35 (p<0,05). То есть в среднем содержание меланина в меланосомах в полтора раза выше содержания меланина в меланолипофусциновых гранулах; в отдельных опытах количество меланина в меланосомах превышало количество меланина в меланолипофусциновых гранулах даже в два раза.

    Падение концентрации меланина в меланолипофусциновой грануле может быть связано с его деструкцией в этой сложной грануле.

    Обсуждение

    Следует отметить, что изучению парамагнитных свойств меланосом РПЭ человека посвящено довольно много работ [1, 3, 14] , в то время как данных по ЭПР-спектрам меланолипофусциновых гранул РПЭ в литературе практически нет.

    В нашей работе получены и сравнивались спектры ЭПР меланолипофусциновых гранул из клеток РПЭ со спектрами ЭПР меланосом и синтетическим ДОФА-меланином. Обнаружено, что спектры ЭПР меланолипофусциновых гранул по своим параметрам соответствуют как спектрам ЭПР меланосом, так и синтетического ДОФА-меланина. Это позволяет говорить об одном и том же источнике происхождения парамагнитных свойств меланолипофусциновых гранул и меланосом РПЭ – меланине (эумеланине). Результат этот является достаточно ожидаемым, поскольку меланолипофусциновые гранулы, как предполагается многими авторами [7-9, 13], образуются в результате слияния липофусциновых гранул с меланосомами.

    Сравнение концентрации парамагнитных центров в меланосомах и меланолипофусциновых гранулах из клеток РПЭ глаз разных возрастных групп доноров позволяет сделать вывод о том, что концентрация парамагнитных центров в одной меланосоме, как правило, превышает концентрацию парамагнитных центров в одной меланолипофусциновой грануле. В среднем это превышение могло достигать 50%.

    Только в двух группах из девяти исследованных возрастных групп доноров концентрация спинов на одну гранулу была примерно одинакова для меланосом и меланолипофусциновых гранул РПЭ.

    Напомним, что меланолипофусциновые гранулы, как и липофусциновые, образуются с возрастом в клетках РПЭ человека, вероятнее всего, при слиянии меланосом и липофусциновых гранул.

    Полученные нами данные позволяют полагать, что меланолипофусциновые гранулы, вероятнее всего, образуются в результате слияния одной меланосомы с одной липофусциновой гранулой, так как концентрация меланина в меланолипофусциновой грануле никогда не превышала концентрации меланина в меланосоме.

    Можно также предположить, что уменьшенная концентрация меланина в меланолипофусциновых гранулах по сравнению с меланосомами в клетках РПЭ человека связана с его деструкцией под действием активных форм кислорода, образующихся в ходе фотоиндуцированного восстановления кислорода флуорофорами липофусцина.

    Выводы

    1. В меланолипофусциновых гранулах так же, как и в меланосомах, содержится пигмент меланин (эумеланин), о чем свидетельствует сходство их парамагнитных свойств.

    2. Содержание меланина в меланосомах выше, чем в меланолипофусциновых гранулах, исходя из концентрации парамагнитных центров при расчёте на одну гранулу, в среднем в полтора раза.


Страница источника: 78-82

OAI-PMH ID: oai:eyepress.ru:article27135
Просмотров: 15366


Офтальмохирургия

Офтальмохирургия

Новое в офтальмологии

Новое в офтальмологии

Мир офтальмологии

Мир офтальмологии

Российская офтальмология онлайн

Российская офтальмология онлайн

Российская детская офтальмология

Российская детская офтальмология

Современные технологии в офтальмологии

Современные технологии в офтальмологии

Точка зрения. Восток - Запад

Точка зрения. Восток - Запад

Новости глаукомы

Новости глаукомы

Отражение

Отражение

Клинические случаи в офтальмологии

Клинические случаи в офтальмологии
Bausch + Lomb
Reper
NorthStar
ЭТП
Rayner
Senju
Фармстандарт
Гельтек
santen
Акрихин
Ziemer
Tradomed
Екатеринбургский центр Микрохирургия глаза
МТ Техника
Nanoptika
R-optics
Фокус
sentiss
nidek
aseptica