Укрепление орбитальной культи с помощью аутологичных мононуклеарных клеток крови в эксперименте

     Современная офтальмология достигла значительных успехов в лечении глазных заболеваний, тем не менее тяжелая патология и травмы органа зрения нередко приводят к слепоте и требуют радикального хирургического лечения — удаления глазного яблока.
    В случае потери зрения и глаза как органа пациентам требуются косметическая и социальная реабилитация. Ежегодно в России свыше 12 тыс. больных нуждаются в проведении подобных операций, 58% из них составляют лица трудоспособного возраста, в связи с чем необходимо получение максимального косметического эффекта после хирургического вмешательства [8]. Однако, по данным ряда авторов, в 75% случаев энуклеация производится без формирования опорно-двигательной культи [7, 8, 10, 11]. Это, безусловно, снижает качество производимых операций и последующую медико-социальную реабилитацию пациентов.
    Для получения хорошего косметического результата при протезировании после энуклеации необходимо создание объёмной выпуклой культи, поэтому пространство, освободившееся после удаления глаза, должно быть заполнено каким-либо пластическим материалом, что невозможно без использования вкладышей-имплантатов [11]. Однако офтальмохирурги не всегда используют орбитальные имплантаты после энуклеации, а в случае применения многих из них возможно развитие таких осложнений, как смещение, обнажение и отторжение имплантатов, а также получение неудовлетворительного косметического эффекта из-за резорбции биологического и малого объема небиологического материала [2, 4].
    Для укрепления орбитальной культи используются различные материалы: кожно-жировой лоскут, апоневроз с височной зоны, донорская склера, твёрдая мозговая оболочка и др. [1, 3, 7-9, 12-19]. Однако есть предположение, что покрытие имплантата может препятствовать васкуляризации, имеется опасность передачи реципиенту различных инфекций [18, 20]. Всё вышеизложенное служит основанием для поиска и разработки нового эффективного способа укрепления орбитальной культи после энуклеации.
    Цель В эксперименте изучить морфологические особенности течения воспалительно-репаративного процесса при формировании орбитальной культи с помощью биоинженерного комплекса из никелида титана и аутологичных мононуклеаров крови.
    Материал и методы Выполнена серия экспериментов на 36 половозрелых крысах породы Wistar весом 200-250 г, которые в зависимости от способа лечения были разделены на 2 группы: · основная (n=18) — у животных данной группы орбитальная культя формировалась с использованием имплантата из никелида титана и аутологичных мононуклеаров крови (рис.1); · группа сравнения (n=18) — формирование орбитальной культи осуществлялось с помощью имплантата из никелида титана без примене ния мононуклеарных клеток крови.
    Имплантат изготавливался из нити пористого никелида титана толщиной 100 мкм, имел округлую форму диаметром 4 мм (сертификат соответствия № РОСС RU.АЯ79. H09637 от 15.04.2011 г.).
    После эфирного наркоза каждому животному выполнялась эвисцероэнуклеация с последующим помещением имплантата непосредственно в склеральный мешок. При этом крысам основной группы вводили инсулиновым шприцом в структуру имплантата свежевыделенную культуру аутологичных мононуклеарных клеток крови, полученную методом фракционирования по стандартной методике в градиенте плотности на разделяющем растворе фиколл-верографина [5]. Далее накладывались полипропиленовые узловые швы на склеру, кисетный кетгутовый шов на теноновую оболочку, непрерывный капроновый шов на конъюктиву склеры. В послеоперационном периоде животным обеих групп выполнялись только инстилляции раствора Ципролета с частотой 6 раз в день.
     Общая продолжительность эксперимента — 21 сутки, этого времени достаточно для формирования зрелой соединительной ткани, согласно литературным данным [6].
    В ходе эксперимента выполняли наружный осмотр, фоторегистрацию. Забор материала для гистологического исследования производился на 7, 14, 21-е сутки от начала эксперимента. Подсчет удельных объемов стромы и сосудов осуществляли с помощью окулярной сетки
    Автандилова на 50 точках. Клеточную плотность в 1 мм² рассчитывали при помощи окулярной вставки с известной площадью. Полученные данные были обработаны с использованием пакета программ «Statistica for Windows».
    Результаты В ходе морфологических исследований через 7 суток после оперативного вмешательства у животных основной группы в полости глазного яблока наблюдалось очаговое скопление лимфомакрофагальных элементов с небольшим количеством плазмоцитов и единичными полиморфноядерными лейкоцитами. В окружающих тканях был выражен отек, отмечались множественные очаговые скопления фибробластоподобных клеток. Обнаруживалось большое количество новообразованных капилляров с широким просветом (см. табл.).
    В группе сравнения наблюдались умеренно выраженный отек ткани культи, мелкоочаговые кровоизлияния, а также диффузная, равномерно распространенная лейкоцитарная инфильтрация, скопление фибробластоподобных клеток. В строме обнаруживались отдельные новообразованные капилляры со щелевидным или округлым просветом (см. табл.). Через 14 суток в основной группе в полости глазного яблока наблюдалось разрастание соединительной ткани со значительными скоплениями лимфомоноцитарных клеток, обнаруживались коллагеновые волокна, которые начинали приобретать упорядоченное направление. В участках, расположенных по краю имплантата, отмечалось скопление новообразованных сосудов, большинство из которых начинало преобразовываться в артериолы и венулы (см. табл.).
    В группе сравнения в полости глазного яблока наблюдалось разрастание рыхлой волокнистой соединительной ткани, характеризовавшейся умеренно выраженной клеточной инфильтрацией с преобладанием мононуклеарных фагоцитов (см. табл.). Клетки фибробластического ряда формировали тонкие, хаотично расположенные коллагеновые волокна, между которыми определялись множественные тонкостенные капилляры, появлялись единичные артериолы и венулы.
    Через 21 сутки в основной группе животных отмечалось формирование толстых упорядоченно расположенных пучков коллагеновых волокон. Среди коллагеновых волокон обнаруживались множественные новообразованные артериолы и венулы (рис. 2, табл.). Лимфомоноцитарная инфильтрация встречалась в виде мелкоочаговых скоплений, разделенных участками зрелой соединительной ткани, что препятствовало четкой визуализации элементов имплантата.
    В группе сравнения наблюдалось разрастание рыхлой волокнистой соединительной ткани с тонкими хаотично расположенными коллагеновыми волокнами, среди которых встречались единичные новообразованные сосуды (рис. 3).
    Выводы Таким образом, в ходе экспериментального исследования установлено, что имплантация биоинженерного комплекса из пористого никелида титана и аутологичных мононуклеаров крови в полость орбиты после эвисцероэнуклеации стимулирует выраженное коллагенообразование и ангиогенез. Это, в свою очередь, способствует укреплению и более прочному удержанию имплантата в орбитальной полости. Разработанный способ укрепления орбитальной культи с помощью биоинженерного комплекса из никелида титана и аутологичных мононуклеаров крови может быть рекомендован к клиническим исследованиям.
    
    Поступила 20.01.2014
    
    Запускалов И.В., Горбунова Е.А., Кривошеина О.И. Укрепление орбитальной культи с помощью аутологичных мононуклеарных клеток крови в эксперименте // Офтальмохирургия.– 2014.– № 2.– С. 62-65.