Рис. 1. Катетеризация левой внутренней сонной артерии кролика
Рис. 2. Рентгенограмма кролика, полученная при введении рентгенконтрастного вещества. Контрастируется левая внутренняя сонная артерия
В настоящее время описан ряд подходов к нехирургическому лечению близорукости [7, 8, 10-13].
Одним из направлений интегративного подхода в лечении прогрессирующей близорукости является применение биопунктуры (фармакопунктуры), объединяющей медикаментозное воздействие и иглорефлексотерапию [1, 5]. В ней выделяется по крайней мере несколько ведущих механизмов. С одной стороны, рефлекторная составляющая позволяет рассматривать фармакопунктуру как способ локальной пролонгированной стимуляции точек рефлексотерапии, вследствие чего создается искусственная доминанта, переключающая патологическую импульсацию на себя, способствующая разрушению компонентов патологической реакции и созданию условий для нормализации функционирования нервной системы.
С другой стороны, необходимо учитывать и терапевтическое действие лекарственных препаратов, введенных в точки акупунктуры. Сила и длительность действия препаратов при таком способе их введения возрастают в несколько раз.
В последние годы опубликовано несколько исследований, подтверждающих терапевтический эффект биопунктуры [3, 4]. Необходимым этапом при оценке эффективности данного метода воздействия на ткани глазного яблока при экспериментальной миопии является получение сведений о реакции сосудов иридоцилиарной системы.
Цель
Изучение ультраструктурных особенностей сосудов иридоцилиарной системы после применения биопунктуры антигомотоксическим препаратом.
Материал и методы
Экспериментальные исследования были проведены на базе Научно-исследовательского института фундаментальных и прикладных биомедицинских исследований (директор – профессор А.П. Эттингер) при Российском национальном исследовательском медицинском университете им. Н.И. Пирогова Минздрава России.
Экспериментальная работа проводилась на 15 кроликах-самцах породы «шиншилла» с исходной массой тела 2,0-2,5 кг в возрасте 2 месяцев.
Исследования проведены в соответствии с основными положениями международной резолюции ARVO (Ассоциации по офтальмологии и исследованию зрения). Контрольная группа состояла из 5 кроликов. В опытную группу вошли 10 кроликов, которым с целью моделирования близорукости в левую внутреннюю сонную артерию устанавливался катетер Vasofix Certo 24G (B. Braun, Belgium, Luxemburg) (риc. 1). Операция осуществлялась под общим наркозом: для премедикации вводили 2% раствор ксилозина гидрохлорида (рометар). Через 10-15 мин. внутривенно в краевую вену уха вводили золетил – 50 в дозе 6,6 мг/кг массы тела. Правильное положение катетера контролировалось проведением рентгенограммы черепа в боковой проекции после введения 0,5 мл рентгенконтрастного вещества Омнипак (Amersham Health, Cork, Ireland) в концентрации 300 мг/мл (риc. 2).
В последующем в течение 6 месяцев осуществлялось ежедневное введение 0,5 мл транс-ретиноевой кислоты в концентрации 0,06 мг/мл (Sigma –Aldrich, США).
Доминирующей клинической рефракцией в контрольных глазах экспериментальных животных на всем сроке наблюдения являлась гиперметропия от +2,5 до +3,5 дптр. Клиническая рефракция опытных глаз животных изменилась от гиперметропии +3,5±0,05 дптр в начале эксперимента до близорукости -0,75±0,26 дптр в конце срока наблюдения.
Животные опытной группы в дальнейшем были разделены на 2 подгруппы. Животным первой подгруппы (5 кроликов) ежедневно в течение 10 дней проводили внутрикожные инъекции в 3 точках орбитальной области верхних век левого глаза без введения лекарственных средств; во второй группе (5 кроликов) внутрикожные инъекции в орбитальной области верхних век левого глаза сочетались с введением препарата церебрум-композитум Н в количестве 0,1 мл в каждую точку через день в течение 10 дней.
Препарат церебрум-композитум Н (Биологише Хайльмиттель Хеель ГмбХ, Германия) содержит суис-органные компоненты Cerebrum, Embryosuis, Hepar, Placenta, а также составляющие растительного происхождения и минералы, оказывает иммуностимулирующее, сосудорасширяющее, антиспастическое, гемостатическое, метаболическое действие. Кроликов выводили из эксперимента под общим наркозом. Осуществляли внутривенную воздушную эмболию.
Для оценки морфологических изменений со стороны цилиарного тела, его отростков, радужки и склеры глазные яблоки после энуклеации погружали в охлажденный 2,5% раствор глутаральдегида на фосфатном буфере рН 7,2-7,4. Затем кусочки ткани, взятые из области воздействия, фиксировали в 2,5% растворе глутаральдегида на 0,2 М какодилатном буфере, промывали в дистиллированной воде, обезвоживали в растворах ацетона восходящей концентрации и высушивали методом перехода через критическую точку. Полутонкие срезы, полученные на полозковом микротоме Richert, толщиной 6-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином по общепринятой методике [6]. Гистологические препараты исследовали на световом микроскопе «Фотомикроскоп 3» («Opton», Германия). Фоторегистрацию осуществляли на цифровую камеру в комплекте аппаратно-программного комплекса автоматической морфоденситометрии «Диаморфобъектив» (компания «ДиаМорф»).
Для исследования методом трансмиссионной электронной микроскопии материал фиксировали в 2,5% растворе глутаральдегида в течение 4 ч с последующей постфиксацией четырехокисью осмия в течение 1 ч. После этого образцы промывали в дистиллированной воде (2 смены по 30 мин), обезвоживали в спиртах и окиси пропилена и заливали в эпон по общепринятой методике. Ультратонкие срезы готовили на специальном приборе LKB, окрашивали уранилацетатом и цитратом свинца по общепринятой схеме и изучали на трансмиссионном электронном микроскопе JEM-100.
Препараты, окрашенные гематоксилином и эозином, использовали для выявления общих особенностей гистоархитектоники тканей глаза и проведения морфометрических исследований.
Результаты
В результате проведенного гистологического и морфометрического анализа препаратов тканей глаза у животных первой группы не выявлено достоверных различий по сравнению с контролем, хотя отмечена тенденция к расширению мелкокалиберных сосудов ресничного тела.
Напротив, после внутрикожного введения церебрум композитум Н у 2-й группы животных морфологические изменения сосудов иридоцилиарной системы были очевидны и проявлялись в выраженном расширении сосудов всех калибров. Состояние экстрацеллюлярного матрикса, особенно в области сосудов, характеризуется как разреженное.
Отмечена реакция на проводимое воздействие и со стороны железистого слоя эпителия цилиарного тела, который менялся от кубического до призматического, выявлено увеличение числа свободных рибосом в цитоплазме клеток, расширение цистерн гранулярной эндоплазматической сети, локальное расширение перинуклераного пространства, увеличение количества пиноцитозных пузырьков.
Полученные в результате световой и электронной микроскопии морфологические данные характеризуют повышение функциональной активности эпителиоцитов железистого эпителия ресничного тела.
Выявленные изменения указывают на усиление кровоснабжения иридоцилиораной системы при воздействии лекарственными средствами и, как следствие, интенсификации белкового синтеза эпителиальными клетками.
Особое значение при анализе ультраструктурных особенностей иридоцилиарной системы после применения локальной биопунктуры век имеет получение сведений о состоянии гематоофтальмического барьера, призванного в нормальных физиологических условиях защищать внутренние ткани глаза от вредных влияний веществ, циркулирующих в крови, и осуществлять обмен тканей глаза с кровью [2].
В результате проведенных морфологических и морфометрических исследований выявлены изменения, которые свидетельствуют о вероятном увеличении фенестрированной поверхности капилляров ресничного тела и его отростков, радужки глаз, что указывает на усиление процессов трансэндотелиального обмена. Полученные данные о состоянии эпителиоцитов в виду отведенной им роли в гематоофтальмическом барьере указывают на усиление тканевого метаболизма. Однако повышение активности эпителиоцитов и изменения со стороны эндотелиоцитов не сопровождалось признаками функционального перенапряжения, что указывает на вероятное отсутствие возможностей развития патологических изменении при повторном применении биопунктуры век.
Морфо-функциональные изменения со стороны эпителиоцитов ресничного тела несомненно оказывают влияние как на степень фильтрации жидкости через трабекулу, так и на состав водянистой влаги. Так, расширение отростков ресничного тела может указывать на увеличение продукции водянистой влаги. Данное предположение подтверждается ультрамикроскопическими изменениями в клетках в виде обнаружения крупных размеров митохондрий, сложной интердигитации складок цитоплазматических мембран клеток, интенсивного развития цистерн зернистой эндоплазматической сети, что характерно для усиление секреторной деятельности ресничного тела.
Заключение
Таким образом, фармакопунктура с использованием препарата церебрум-композитум Н усиливает процессы трансэндотелиального обмена в капиллярах ресничного тела, его отростков и радужки глаз.
Наиболее выраженная сосудистая реакция в исследованных оболочках глаза регистрируется при введении церебрум-композитум Н и практически отсутствует при внутрикожной инъекции без введения каких-либо лекарственных средств. Полагаем, что биопунктура гомотоксикологическим препаратом в условиях экспериментальной близорукости повышает уровень метаболических реакций иридоцилиарной системы, в условиях растяжения склеры восполняет адаптационнные резервы, как за счет улучшения гемодинамических параметров сосудов ресничной мышцы, так и, вероятно, за счет восстановления баланса вегетативной иннервации.
