Год
2018

Первичная открытоугольная глаукома:диагностическое значение протеомного анализа слезы и жидкости передней камеры глаза


Органзации: 1Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования Минздрава РФВ оригинале: ФГБОУ ДПО Российская медицинская академия последипломного образования Росздрава

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Общая характеристика работы


Актуальность темы и степень ее разработки
    Глаукома является социально значимой болезнью вследствие того, что охватывает большие группы населения и может приводить к слепоте.

    Потеря зрения у людей всех возрастов является проблемой современной офтальмологии [Нестеров А.П., 2001]. Как правило, при обследовании у одного из трех пациентов старше 65 лет выявляется снижение остроты зрения, и одной из причин может быть глаукома [Quillen D.A., 1999]. Поэтому данное заболевание имеет большое медико-социальное значение и является одним из приоритетных направлений современной офтальмологии.

    Проблема ранней диагностики глаукомы еще далека от своего решения. И, несмотря на значительные успехи в разработке современных патогенетически обоснованных медикаментозных и хирургических методов лечения глаукомы, не всегда удается добиться стабилизации зрительных функций и предотвратить инвалидизацию пациентов.

    Течение глаукомы, как правило, бессимптомное с прогрессирующим снижением зрительных функций [Егоров Е.А., 2007]. Традиционные методы диагностики основаны на выявлении уже имеющейся клинически значимой симптоматики – дефекты полей зрения, изменение диска зрительного нерва [Кански Д.Д., 2009]. Установлено, что клинически определяемые изменения пол я зрения у больных глаукомой наблюдаются при потере около 40% зрительных волокон [Егоров Е.А., Ставицкая Т.В., Налобнова Ю.В., 2003]. Таким образом, данную диагностику заболевания в начальной стадии трудно назвать ранней. Динамика заболевания, согласно принятой классификации, также оценивается в основном по наличию или отсутствию прогрессирования изменений ДЗН и поля зрения.

    В связи с этим, продолжается поиск новых методов, позволяющих обнаружить самые ранние доклинические нарушения у больных глаукомой, так как успех медикаментозного и хирургического лечения больных глаукомой во многом зависит от своевременной постановки диагноза.

    В последние десятилетия увеличивается число 40-60-летних пациентов трудоспособного возраста с диагнозом «катаракта», что требует проведения оперативного лечения. По статистике, диагноз «первичная открытоугольная глаукома» впервые устанавливается как раз в этом возрасте или несколько позже.

    Что касается исследований, направленных на поиск методов ранней диагностики глаукомы, есть уникальная возможность взять во время операции факоэмульсификации катаракты на исследование жидкость передней камеры глаза для проведения тонкого биохимического анализа. По сравнению со слезой, жидкость передней камеры содержит меньше контаминантов.

    Одним из новых перспективных направлений биомедицинских исследований является протеомный анализ глазных жидкостей и тканей. Главной целью клинической протеомики является обнаружение нового белкового или пептидного биомаркера, который связан с определенным заболеванием. Сравнение протеомов здорового человека и больного позволяет выявить конкретные белки, потенциально вовлеченные в развитие болезни, которые в дальнейшем могут стать мишенями для новых лекарственных препаратов. Кроме того, если такие белки уже известны, анализ протеома может использоваться как метод ранней диагностики.

    Одним из основных методов протеомики является масс-спектрометрия белков, которая позволяет установить количественный и качественный состав в исследуемом образце. В настоящее время в медицине применение методов протеомного анализа позволяет выявить маркеры некоторых заболеваний на ранней стадии болезни.
Степень разработанности проблемы
    Анализ работ, посвященных поиску возможных биомаркеров первичной открытоугольной глаукомы, выявил недостаточную степень разработанности данной проблемы. В России не проводились исследования жидкости передней камеры глаза и слезы пациентов с катарактой, глаукомой и псевдоэксфолиативным синдромом методами протеомного анализа. В зарубежной литературе есть работы, посвященные поиску биомаркеров глаукомы, однако не было выявлено одного достоверно доказанного маркера.

    Протеомный анализ жидкости передней камеры глаза и слезы позволяет не только определить состав белков исследуемой биологической жидкости, но и выявить изменения состава при развитии заболевания. Проблема поиска биомаркера при первичной открытоугольной глаукоме чрезвычайно актуальна в связи с трудностью диагностики заболевания на ранней стадии. Причины возникновения псевдоэксфолиативнго синдрома также не до конца ясны. При этом данный синдром может встречаться как при первичной открытоугольной глаукоме, так и изолированно. Таким образом, протеомные исследования слезы и жидкости передней камеры при глаукоме и псевдоэксфолиативном синдроме очень важны для развития представлений о патогенезе данных заболеваний.
Цель работы и задачи исследования
    Цель работы

    Усовершенствовать диагностику первичной открытоугольной глаукомой путем использования протеомного анализа жидкости передней камеры глаза и слезы.

    Задачи исследования

    1. Идентифицировать белковый состав жидкости передней камеры глаза методом протеомного анализа.

    2. Сопоставить протеомный профиль слезы и жидкости передней камеры глаза пациентов с первичной открытоугольной глаукомой и пациентов без подтвержденного диагноза глаукома.

    3. Оценить протеомный профиль жидкости передней камеры глаза и установить возможные биомаркеры первичной открытоугольной глаукомы.

    4. Определить наличие выявленных в жидкости передней камеры глаза биомаркеров в слезе.

    5. Оценить диагностическую значимость выявленных биомаркеров в установке диагноза первичной открытоугольной глаукомы.
Положения диссертации, выносимые на защиту
    1. При исследовании жидкости передней камеры глаза пациентов с первичной открытоугольной глаукомой было идентифицировано 12 белковых групп, не выявленных в других клинических группах.

    2. Объединение в одну группу белков жидкости передней камеры пациентов с катарактой в сочетании с ПЭС и без него, показывает наибольшее количество специфических белков (45 белковых групп). В данной объединенной группе представлены структурные компоненты вещества хрусталика, а наиболее обогащенный биологический процесс – дифференцировка кератиноцитов (p-value = 2,57 × 10 -4 ). Предположительно, развитие катаракты сопровождается повреждением вещества хрусталика, что приводит к выделению в жидкость передней камеры его компонентов.

    3. Исследование объединенного протеома жидкости передней камеры глаза для выявления определенных структурно-функциональных групп белков с использованием категорий Gene Ontology установило, что основной функцией протеома жидкости передней камеры является активность по ингибированию эндопептидаз, что является важным для предотвращения расщепления белков и нарушения прозрачности внутриглазных сред.

    4. Выявленный при протеомном исследовании жидкости передней камеры белок аполипопротеин D является потенциальным биомаркером псевдоэксфолиативного синдрома, что позволяет проводить раннюю диагностику данного синдрома.
Научная новизна работы
    1. В данном научном исследовании в жидкости передней камеры впервые идентифицированы 12 белковых групп, характерных для первичной открытоугольной глаукомы. Выявленные белки являются потенциальными биомаркерами данного заболевания. Это открывает перспективу для дальнейших исследований для поиска маркеров ПОУГ, прогнозирования течения данного заболевания и оценки эффективности проводимой терапии.

    2. В ходе протеомного исследования жидкости передней камеры глаза впервые были идентифицированы группы белков, ранее не описанные в составе жидкости передней камеры и выявлены группы белков, характерные для катаракты, псевдоэксфолиативного синдрома и глаукомы.

    3. На основании проведенного исследования определено, что основная функция белков жидкости передней камеры глаза - ингибирование эндопептидаз.

    4. Установлено, что белок аполипопротеин D является потенциальным биомаркером псевдоэксфолиативного синдрома.

    5. Объединение в одну группу белков жидкости передней камеры пациентов с катарактой в сочетании с псевдоэксфолиативным синдромом и без него, показало наибольшее количество специфических белков.
Теоретическая и практическая значимость
    1. При проведении исследования жидкости передней камеры глаза необходимо обращать внимание на 12 белковых групп, выявленных при первичной открытоугольной глаукоме, так как данные белки являются потенциальными биомаркерами первичной открытоугольной глаукомы.

    2. Анализ жидкости передней камеры глаза методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с высокоточной тандемной масс-спектрометрией является высокоточным и позволяет проводить дифференциальную диагностику таких заболеваний, как первичная открытоугольная глаукома и псевдоэксфолиативный синдром.
Степень достоверности и апробация результатов
    Степень достоверности полученных результатов исследования определяется достаточным и репрезентативным объемом выборки исследования и обследованных пациентов (60 пациентов), точностью и большим количеством повторов проведенных протеомных исследований. Протеомный анализ каждого образца проводился как минимум в 3-х технических повторах. 100 Гб спектров формата «.raw» в трех технических повторах обработаны с использованием программы MaxQuant версии 1.5.2.8, использующей в качестве поискового инструмента программу Andromeda. Для биоинформационного анализа данных, полученных с помощью программы MaxQuant, использовали программу Perseus, версия 1.5.1.6.

    Проведение диссертационного исследования одобрено комитетом по этике научных исследований РМАНПО (решение от 13.05.2014 г.).

    Основные положения диссертации доложены и обсуждены на конференции молодых ученых ФГБНУ «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича» (2015 г.), VI конференции молодых ученых РМАПО с международным участием (Москва, 2015 г.).

    Апробация диссертации состоялась 11.05.2017 г. на расширенном заседании кафедры офтальмологии ФГБОУ ДПО РМАНПО с привлечением Филиала №1 ГКБ им. С.П. Боткина «Офтальмологическая клиника».
Публикации и внедрение результатов исследования
    Публикации

    По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, из них 3 - в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК для публикации результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук, 1 – в журнале “Proteomics”.

    Внедрение результатов исследования

    Результаты исследования внедрены в практику работы офтальмологических отделений Филиала №1 ГБУЗ ГКБ им. С.П. Боткина ДЗМ «Офтальмологическая клиника» и 60-го офтальмологического отделения ГБУЗ ГКБ им. С.П. Боткина ДЗМ.
Структура и объем диссертации
    Диссертация изложена на 139 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, 3-х глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа содержит 5 рисунков, 5 таблиц и 2 приложения. Список литературы содержит 141 источник, в том числе 25 отечественных и 116 зарубежных.

    Диссертация выполнена на базе ГБУЗ ГКБ им. С.П. Боткина ДЗМ Филиала №1 «Офтальмологическая клиника», на кафедре офтальмологии ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного последипломного образования» Минздрава России.

    Лабораторные исследования проводились на базе Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича».
Соответствие диссертации паспорту научной специальности
    В соответствии с формулой научной специальности 14.01.07 – «Глазные болезни (медицинские науки)», охватывающей проблемы разработки новых и усовершенствование известных методов обследования органа зрения и его придатков, методов диагностики различных заболеваний; изучение и совершенствование методов диспансеризации пациентов с глаукомой и другими видами прогрессирующей патологии глаза, в диссертационном исследовании набраны 4 группы пациентов с катарактой, первичной открытоугольной глаукомой и псевдоэксфолиативным синдромом.

    Все больные были клинически обследованы с использованием основных и дополнительных офтальмологических методов исследования, которые включали: визометрию, тонометрию, гониоскопию, биомикроскопию, прямую и непрямую офтальмоскопию, периметрию, определение критической частоты слияния мельканий.

    В соответствии с формулой научной специальности 03.01.04 – «Биохимия (биологические науки, химические науки, медицинские науки)», охватывающей проблемы установления химического состава живых организмов, выявления закономерностей строения, содержания и преобразования в процессе жизнедеятельности организмов химических соединений, общих для живой материи в целом; теоретические и прикладные проблемы закономерностей химических превращений в живых организмах, молекулярных механизмов интеграции клеточного метаболизма, связей биохимических процессов с деятельностью органов и тканей, с жизнедеятельностью организма для решения задач сохранения здоровья человека, выяснения причин различных болезней и изыскания путей их эффективного лечения, в диссертационном исследовании проведена идентификация протеомного профиля жидкости передней камеры глаза пациентов с катарактой, первичной открытоугольной глаукомой и псевдоэксофлиативным синдромом и выявлены белки, характерные для каждой группы пациентов.

Содержание работы


Материал и методы исследования
    Под наблюдением находились 60 пациентов, 24 мужчин, 36 женщин, проходившие лечение в Филиале №1 ГКБ им. С.П. Боткина.

    Все больные были клинически обследованы с использованием основных и дополнительных офтальмологических методов исследования, которые включали: визометрию, тонометрию, гониоскопию, биомикроскопию, прямую и непрямую офтальмоскопию, периметрию, определение критической частоты слияния мельканий.

    Забор слезной жидкости осуществлялся с помощью инсулинового шприца с одноразовой канюлей из нижнего конъюнктивального свода обследуемых накануне операции. Сбор жидкости передней камеры проводился во время первого этапа операции факоэмульсификации катаракты.

    Взятие на анализ слезной жидкости и жидкости передней камеры глаза не влияло на ход операции. Послеоперационный период у всех пациентов протекал без особенностей. Все больные были выписаны из стационара на следующий день после операции. В первые сутки после операции острота зрения оперированного глаза была не меньше 0,3 с коррекцией. Внутриглазное давление в первые сутки после операции у всех больных было в пределах нормы (12-18 мм рт ст по пневмотонометрии).

    Протеомный анализ жидкости передней камеры глаза проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с высокоточной тандемной масс-спектрометрией по описанному далее протоколу. Слезная жидкость исследовалась методами вестерн-блоттинг и дот-блоттинг.

    Протеомный анализ с использованием масс-спектрометров высокого разрешения является трудоемким и дорогостоящим тестом.

    Анализ каждого образца требует как минимум 3 технических повторов. В связи с этим в исследование были включены 29 пациентов.
Анализ собственного исследования
     Все пациенты были разделены на 4 группы. 1-ю группу (контрольную) составили пациенты с катарактой (24 человека), не имеющие другой офтальмопатологии. Во 2-ю группу вошли пациенты с катарактой и псевдоэксфолиативным синдромом без подтвержденного диагноза глаукома (7 человек). 3-ю группу составили пациенты с катарактой и открытоугольной глаукомой (11 человек). В 4-ю группу вошли пациенты с катарактой, ПОУГ и ПЭС (18 человек).

    Протеомный анализ с использованием масс-спектрометров высокого разрешения является трудоемким и дорогостоящим тестом.

    В данной работе анализ протеома жидкости передней камеры глаза осуществляляся на новейшем масс-спектрометре высокого разрешения (Thermo Q Exactive). Такое исследование проводилось впервые в России. Анализ каждого образца требовал как минимум 3 технических повторов. В связи с этим в лабораторную часть исследования были включены 29 пациентов. Трудоемкость проведенных анализов обуславливает заданный объем выборки пациентов.

    Таким образом, в лабораторную часть исследования были включены 29 пациентов, из них 12 мужчин, 17 женщин. Возраст пациентов от 45 до 82 лет. 1-ю группу (контрольную) составили пациенты с катарактой (11 человек), не имеющие другой офтальмопатологии. Во 2-ю группу вошли пациенты с катарактой и псевдоэксфолиативным синдромом без подтвержденного диагноза глаукома (5 человек). 3-ю группу составили пациенты с катарактой и открытоугольной глаукомой (7 человек), из них 2 пациента с начальной стадией глаукомы, 3 – с развитой, 2- с далекозашедшей стадией. В 4-ю группу вошли пациенты с катарактой, ПОУГ и ПЭС (6 человек), из них 2 пациента с начальной стадией глаукомы, 2 – с развитой, 2- с далекозашедшей стадией.

    В исследование включались пациенты, не имеющие тяжелых соматических заболеваний, хронических системных заболеваний, не переносившие за последний год лазерные операции на исследуемом глазу и не имеющие в анамнезе хирургических вмешательств на глазном яблоке.

    Офтальмологическое обследование было проведено с применением следующих методов: визометрии, тонометрии, гониоскопии, биомикроскопии, прямой и обратной офтальмоскопии, периметрии, определение критической частоты слияния мельканий, тонографии, оптической когерентной томографии.

    Техника выполнения исследования заключалась в следующем: слеза забиралась из нижнего конъюнктивального свода глаз обследуемых стерильным шприцем с одноразовой канюлей накануне операции. Забор жидкости передней камеры осуществлялся во время операции факоэмульсификации катаракты после 1-го парацентеза. Анализируемую жидкость помещали в микропробирку типа Эппендорф объемом 1,5 мл. Далее пробы замораживали до -75 о С до проведения лабораторных исследований.

    Лабораторное исследование жидкости передней камеры глаза проводилось техникой протеомного анализа при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с высокоточной тандемной масс-спектрометрией и Дот-блот анализ слезы. Тандемный масс-спектрометрический анализ проводили на приборе Orbitrap Q Exactive (Thermo Scientific, США).

    Высокоэффективную жидкостную хроматографию проводили на приборе Agilent 1100 Series (Agilent Technologies, США).
Результаты собственных исследований
     В работе найдено 269 белковых групп, характеризующих протеом жидкости передней камеры глаза. Большая часть белков (154 из 269) была обнаружена во всех группах.

    В соответствии с классификацией Gene Ontology, большинство выделенных белковых групп участвуют в регуляции протеолиза.

    Точнее, активности по ингибированию эндопептидаз и пепидаз-регулирующая активность были обогащены в протеоме жидкости передней камеры глаза при сравнении со всеми белок-кодирующими генами человека.

    В работе было проведено сравнение полученного протеома жидкости передней камеры глаза с результатами аналогичных исследований. Были отобраны 4 работы, в которых проводился протеомный анализ при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с высокоточной тандемной масс-спектрометрией (Chowdhury U.R. et al., Bennett K.L. et al., Murthy K.R. et al., Ji Y. et al.). Для проведения сравнения были объединены белки, идентифицированные в выбранных базах данных. Всего получилось 887 белковых групп. Из них 102 белка были идентифицированы во всех исследованиях, 32 белка являлись уникальными для данного исследования. Объединенный протеом жидкости передней камеры был обогащен белками, регулирующими активность эндопептидаз (GO:0061135; p value = 3,6×10 -34 ).

    В открытом доступе были необработанные данные хорошего качества исследования жидкости передней камеры глаза Murthy K.R. et al. Эти данные были повторно проанализированы и сравнены с полученными в данном исследовании результатами. В исследовании Murthy et al. было собрано 250 образцов жидкости передней камеры глаза (250 пациентов). Образцы были объединены для дальнейшего исследования (создан пул). Однако при объединении образцов теряется индивидуальная вариабельность идентифицированных белков.

    Для того чтобы определить основу протеома жидкости передней камеры глаза, были выделены белки, обнаруженные в большинстве образцов. Очевидно, что такой «конститутивный» протеом состоит из наиболее распространенных белков, секретируемых в жидкости передней камеры глаза. Результирующий список содержит 36 белковых групп.

    По крайней мере, 10 ингибиторов протеаз были включены в список в соответствии с указанным выше обогащением жидкости передней камеры глаза. Данные белки выделены во многих биологических жидкостях, в частности, в плазме крови и цереброспинальной жидкости. Один из них - белок пигментного эпителия сетчатки (gene name SERPINF1), относящийся к семейству ингибиторов сериновых протеаз. Не имеющий активности по ингибированию протеаз, он, тем не менее, является потенциальным ингибитором ангиогенеза, взаимодействующим с нервной тканью и сетчаткой. Точно так же, как и плазма крови, конститутивный протеом жидкости передней камеры содержит липопротеины, иммуноглобулины и белковые переносчики различных гормонов и метаболитов.

    Особый интерес представляют белки, не являющиеся типичными для плазмы крови. К примеру, дермоцидин, пептид, секретируемый потовыми железами и обладающий антибактериальными свойствами, может выполнять такую же функцию и в жидкости передней камеры глаза. Также в состав конститутивного протеома входят белки, связанные с формированием глазного яблока из нервной ткани. В дополнение к серпину F1, описанному выше, простагландин D2 синтаза 21kDa (PTGDS) обладает способностью к регуляции нейротрофической и барьерной функций. Dickkopf-связывающий белок-3 (DKK3) регулирует развитие нервной системы и глазного яблока, но функция этого белка в жидкости передней камеры взрослых остается неизвестной.

    В исследовании обнаружено небольшое число уникальных белков для каждой клинической группы. Объединение в одну группу белков жидкости передней камеры пациентов с катарактой в сочетании с псевдоэксфолиативным синдромом и без него, показывает наибольшее количество специфических белков (45 белковых групп). Все 45 потенциальных маркеров катаракты были проверены на обогащение по классификации Gene Ontology. Это показало статистически значимый результат. Дифференцировка кератиноцитов оказалась наиболее обогащенным биологическим процессом (GO: 0030216, p-value = 2,57 × 10 -4 ). Также в данной объединенной группе представлены структурные компоненты вещества хрусталика. Предположительно, развитие катаракты сопровождается повреждением вещества хрусталика, что приводит к выделению в жидкость передней камеры его компонентов, таких как альфа-кристаллин A, бета-кристаллины A3 и A4, ламин-A/C, плакофиллин-1 и тубулин альфа.

    Особый интерес представляют 12 белковых групп, являющихся уникальными для группы «первичная открытоугольная глаукома»:

    1. Apolipoprotein C-III

    2. Carboxypeptidase B2

    3. Collagen alpha-2(I) chain

    4. Collagen alpha-3(IX) chain

    5. Complement component C6

    6. Complement component C8 beta chain

    7. Fibronectin;Anastellin;Ugl-Y1;Ugl-Y2;Ugl-Y3

    8. Insulin-like growth factor-binding protein 5

    9. Insulin-like growth factor-binding protein complex acid labile subunit

    10. Neurosecretory protein VGF; Neuroendocrine regulatory peptide-1; Neuroendocrine regulatory peptide-2; Antimicrobial peptide VGF

    11. Proline-rich protein 4

    12. SPARC

     Выявленные белки являются потенциальными биомаркерами ПОУГ. Но для того, чтобы исключить возможность «случайного» обнаружения данных белковых групп в жидкости передней камеры глаза, необходимы дальнейшие исследования.

    При использовании статистического метода анализа -построения дерева решений, был получен многообещающий результат по классификации образцов жидкости передней камеры пациентов с псевдоэксфолиативным синдромом и без него. Выявлено диагностическое правило, которое корректно классифицирует 26 из 29 образцов по наличию или отсутствию ПЭС путем сравнения средней интенсивности сигнала (LFQ int) каждого образца.

    Диагностическая точность 89.6% (Рисунок 4). Дерево решений было построено по нормированной интенсивности сигнала Аполипопротеина D (gene name APOD, Uniprot ID APOD_HUMAN). Средняя интенсивность сигнала аполипопротеина D менее 4,8 х 10 7 с чувствительностью 72,7% и специфичностью 100% прогнозирует псевдоэксфолиативный синдром.

    Наличие ПЭС связано с более низким уровнем этого белка в жидкости передней камеры глаза. По результатам двух вариаций вестерн-блоттинга слезной жидкости белок ApoD не был выявлен в исследуемых образцах, что может быть связано со специфичностью антител.

    В данной работе более низкие уровни белка продемонстрировали снижение защитных способностей жидкости передней камеры глаза при возникновении ПЭС.

    В любом случае, на основе имеющихся данных, этот белок предположительно участвует в прогрессировании ПЭС.

    Целенаправленные исследования его уровня и изоформ в структурах глаза необходимы для определения точной роли ApoD в развитии ПЭС.

    В данной научной работе были исследованы образцы жидкости передней камеры глаза 29 пациентов с катарактой, глаукомой и псевдоэксфолиативным синдромом методом хромато-масс-спектрометрии на приборе высокого разрешения.

    Полученные данные позволяют оценить различия в белковом составе внутриглазной жидкости в представленных группах больных.

    В исследовании были идентифицированы группы белков, ранее не описанные в составе жидкости передней камеры. Также выявлены 4 уникальные группы белков, характерные для катаракты, псевдоэксфолиативного синдрома и глаукомы. Найдена тенденция в различиях состава протеома жидкости передней камеры глаза у больных с псевдоэксфолиативным синдромом и без него.

    Анализ объединенного протеома водянистой влаги на предмет преобладания определенных структурно-функциональных групп белков с использованием категорий Gene Ontology выявил, что основной функцией белков жидкости передней камеры глаза является активность по ингибированию эндопептидаз.

Выводы

    1. В ходе исследования жидкости передней камеры методом масс-спектрометрии выявлено 12 уникальных белковых групп, характерных только для первичной открытоугольной глаукомы.

    2. При анализе данных интенсивности сигнала LFQ протеома жидкости передней камеры глаза пациентов с ПОУГ и без подтвержденного диагноза глаукомы с использованием многомерной статистики, не было найдено одиночного биомаркера или комбинации белков, которые можно рассматривать в качестве биомаркера. Это подтверждает необходимость проведения дальнейших протеомных исследований по поиску биомаркеров ПОУГ.

    3. Установлено, что проведение протеомного анализа жидкости передней камеры глаза более информативно по сравнению с исследованием слезной жидкости и более перспективно в плане поиска возможных биомаркеров.

    4. Протеомные исследования жидкости передней камеры глаза больных с катарактой, первичной открытоугольной глаукомой и псевдоэксфолиативным синдромом показали, что основной функцией белков жидкости передней камеры глаза является активность по ингибированию эндопептидаз, что является важным для предотвращения расщепления белков и нарушения прозрачности внутриглазных сред.

    5. При использовании статистического метода анализа - построения дерева решений - было выявлено, что обнаруженный в жидкости передней камеры белок аполипопротеин D является потенциальным биомаркером псевдоэксфолиативного синдрома. Средняя интенсивность сигнала (LFQ int) аполипопротеина D менее 4,8 х 10 7 с чувствительностью 72,7% и специфичностью 100% прогнозирует псевдоэксфолиативный синдром.

Практические рекомендации

    1. В ранней диагностике ПОУГ может быть применен метод протеомного анализа жидкости передней камеры глаза.

    2. При исследовании жидкости передней камеры глаза пациентов с катарактой, ПОУГ и ПЭС необходимо обращать внимание на белковые группы, выявленные только при глаукоме.

    3. Взятие на анализ жидкости передней камеры при факоэмульсификации катаракты дает возможность проведения тонкого биохимического исследования для выявления возможных биомаркеров ПОУГ.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

    3. Самохина Н.И. Возможности использования протеомного анализа в диагностике офтальмопатологии (обзор литературы) // Точка зрения. Восток – Запад – 2015 - № 1. С.260 -264.

    4. Полякова А.А., Самохина Н.И., Ильина И.Ю., Карпов Д.С., Пятницкий М.А., Згода В.Г., Мошковский С.А. Сравнительная протеомика жидкости передней камеры глаза при катаракте и глаукоме // Конференция молодых ученых Института биомедицинской химии: Сб. науч. тр. – Москва, 2015. - С.14.

    5. Самохина Н.И. Возможности использования протеомного анализа в диагностике заболеваний глазного яблока (тезисы) // VI конференции молодых ученых РМАПО с междунароным участием «Современная медицина: традиции и инновации»: Сб. науч. тр. - Москва, 2015. -С.124-127.

    6. Хацукова Б.Н., Сошина М.М., Самохина Н.И. Опыт применения фиксированной комбинации биматопроста и тимолола для профилактики офтальмогипертензии после ультразвуковой факоэмульсификации неосложненной катаракты // Конференция молодых ученых «Шаг в завтра»: Сб. науч. тр. - Москва, 2016 г. С.113-117.

    7. Алексеев И.Б., Хацукова Б.Н., Сошина М.М., Самохина Н.И., Нам Ю.А., Аливердиева М.А. Применение фиксированной комбинации биматопроста с тимололом для профилактики офтальмогипертензии после ультразвуковой факоэмульсификации неосложнённой катаракты // Офтальмологические ведомости. 2016. №9 (2) – с.69-73.

    8. Кочергин С.А., Алексеев И.Б., Самохина Н.И. Возможности протеомного анализа глазных жидкостей и тканей при некоторых заболеваниях органа зрения // Офтальмологические ведомости. 2016. №9 (1) – с. 29-37.

    9. Кочергин С.А., Алексеев И.Б., Самохина Н.И. Диагностическое значение протеомного анализа жидкости передней камеры глаза при катаракте, первичной открытоугольной глаукоме и псевдоэксфолиативном синдроме // Клиническая офтальмология. 2017. №1 – с. 13-17.

    10. Kliuchnikova A.A., Samokhina N.I., Ilina I.Y., Karpov D.S., Pyatnitskiy M.A., Kuznetsova K.G., Toropygin I.Y., Kochergin S.A., Alekseev I.B., Zgoda V.G., Archakov A.I., Moshkovskii S.A. Human aqueous humor proteome in cataract, glaucoma and pseudoexfoliation syndrome // Proteomics. 2016. № 16 (13) – с. 1938–1946.

    11. Кочергин С.А., Самохина Н.И. Протеомный анализ жидкости передней камеры глаза при катаракте, первичной открытоугольной глаукоме и псевдоэксфолиативном синдроме // 190 лет. Московская глазная больница. Сб. науч. тр. Под ред. А.Ф. Бровкиной. 2016. С. 154-160.

    12. Алексеев И.Б., Хацукова Б.Н., Самохина Н.И., Сошина М.М. Результаты применения фиксированной комбинации биматопроста и тимолола для профилактики офтальмогипертензии после ультразвуковой факоэмульсификации неосложнённой катаракты // 190 лет. Московская глазная больница. Сб. науч. тр. Под ред. А.Ф. Бровкиной. 2016. С. 390-395.

Список сокращений

    ВГД – внутриглазное давление

    ДЗН – диск зрительного нерва

    ПОУГ – первичная открытоугольная глаукома

    ПЭС – псевдоэксфолиативный синдром

    Apo-D – Аполипопротеин D


Город: Москва – 2018
Темы: 14.01.07 – глазные болезни
Дата добавления: 01.12.2018 12:31:29, Дата изменения: 15.01.2019 10:31:29

Федоровские чтения - 2019 XVI Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2019 XVI Всероссийская научно-практичес...

Актуальные проблемы офтальмологии XIV Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XIV Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2019 Международная конференция по офтальмологииВосток – Запад 2019 Международная конференция по офтальмологии

Академия ZiemerАкадемия Ziemer

Белые ночи - 2019 Сателлитные симпозиумы в рамках XXV Международного офтальмологического конгрессаБелые ночи - 2019 Сателлитные симпозиумы в рамках XXV Междун...

Новые технологии в офтальмологии - 2019 Всероссийская научно-практическая конференцияНовые технологии в офтальмологии - 2019 Всероссийская научно...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии – 2019 ХVII Всероссийская научно-практическаяконференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии –...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2019»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Роговица III. Инновации  лазерной коррекции зрения и кератопластикиРоговица III. Инновации лазерной коррекции зрения и кератоп...

ХVI Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вместе против слепоты»ХVI Ежегодный конгресс Российского глаукомного общества «Вме...

Сессии в рамках III Всероссийского конгресса «Аутоимунные и иммунодефицитные заболевания»Сессии в рамках III Всероссийского конгресса «Аутоимунные и ...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

«Живая» хирургия в рамках конференции  «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018»«Живая» хирургия в рамках конференции «Современные технолог...

Сателлитные симпозиумы в рамках XI Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках XI Российского общенациональ...

Федоровские чтения - 2018 XV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2018 XV Всероссийская научно-практическ...

Актуальные проблемы офтальмологии XIII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XIII Всероссийская научная...

Восток – Запад 2018  Международная конференция по офтальмологииВосток – Запад 2018 Международная конференция по офтальмологии

«Живая хирургия» в рамках конференции «Белые ночи - 2018»«Живая хирургия» в рамках конференции «Белые ночи - 2018»

Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Между...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизонты -  2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизон...

Сателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКОСателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКО

VIII Евро-Азиатская конференция по офтальмохирургии (ЕАКО)VIII Евро-Азиатская конференция по офтальмохирургии (ЕАКО)

XVII Всероссийская школа офтальмологаXVII Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018 ХVI Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Top.Mail.Ru


Open Archives