Онлайн доклады

Онлайн доклады

Вебинары компании  «Акрихин»

Вебинары компании «Акрихин»

Белые ночи - 2021 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVII Международного офтальмологического конгресса

Белые ночи - 2021 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVII Международного офтальмологического конгресса

Sochi Cornea 2021 Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Sochi Cornea 2021 Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Пироговская офтальмологическая академия

Пироговская офтальмологическая академия

Актуальные вопросы офтальмологии. Круглый стол компании «Бауш Хелс»

Актуальные вопросы офтальмологии. Круглый стол компании «Бауш Хелс»

Лечение глаукомы: инновационный вектор. II Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Лечение глаукомы: инновационный вектор. II Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Роговица V Новые достижения и перспективы

Конференция

Роговица V Новые достижения и перспективы

Научно-образовательные вебинары

Научно-образовательные вебинары

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ-2020

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ-2020

Расширенное заседание Экспертного Совета по проблемам глаукомы и группы «Научный авангард»

Конгресс

Расширенное заседание Экспертного Совета по проблемам глаукомы и группы «Научный авангард»

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Съезда Общества офтальмологов России

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Съезда Общества офтальмологов России

Современные технологии лечения заболеваний глаз. Научно-практическая конференция

Конференция

Современные технологии лечения заболеваний глаз. Научно-практическая конференция

Пироговский офтальмологический форум

Конференция

Пироговский офтальмологический форум

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Конференция

Новые технологии в офтальмологии. Посвящена 100-летию образования Татарской АССР

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики и хирургического лечения патологии заднего отдела глазного яблока и зрительного нерва Межрегиональная научно-практическая конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Особенности нарушения рефракции в детском возрасте Межрегиональная научно-практическая конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Конференция

Инновационные технологии диагностики, терапии и хирургии патологии переднего отдела глазного яблока, глаукомы и придаточного аппарата органа зрения Межрегиональная научно-практическая конференция

Онлайн доклады

Онлайн доклады

Вебинары компании  «Акрихин»

Вебинары компании «Акрихин»

Белые ночи - 2021 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVII Международного офтальмологического конгресса

Белые ночи - 2021 Сателлитные симпозиумы в рамках XXVII Международного офтальмологического конгресса

Sochi Cornea 2021 Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Sochi Cornea 2021 Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Пироговская офтальмологическая академия

Пироговская офтальмологическая академия

Актуальные вопросы офтальмологии. Круглый стол компании «Бауш Хелс»

Актуальные вопросы офтальмологии. Круглый стол компании «Бауш Хелс»

Лечение глаукомы: инновационный вектор. II Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Конференция

Лечение глаукомы: инновационный вектор. II Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

Роговица V Новые достижения и перспективы

Конференция

Роговица V Новые достижения и перспективы

Научно-образовательные вебинары

Научно-образовательные вебинары

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ-2020

Сателлитные симпозиумы в рамках РООФ-2020

Расширенное заседание Экспертного Совета по проблемам глаукомы и группы «Научный авангард»

Конгресс

Расширенное заседание Экспертного Совета по проблемам глаукомы и группы «Научный авангард»

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Съезда Общества офтальмологов России

Сателлитные симпозиумы в рамках XII Съезда Общества офтальмологов России

Современные технологии лечения заболеваний глаз. Научно-практическая конференция

Конференция

Современные технологии лечения заболеваний глаз. Научно-практическая конференция

Пироговский офтальмологический форум

Конференция

Пироговский офтальмологический форум

Все видео...
Год
2020

Клинический и молекулярно-генетический прогноз развития сухого кератоконъюнктивита при ревматоидном артрите и первичном синдроме Шегрена


Органзации: В оригинале: ФГБНУ «Научно–исследовательский институт глазных болезней»
    Научный руководитель: кандидат медицинских наук Сафонова Татьяна Николаевна

    

    

    Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

    

Общая характеристика работы



    Актуальность темы и степень ее разработанности

     Сухой кератоконъюнктивит (СКК) – многофакторное заболевание, глазной поверхности, характеризующиеся изменениями гомеостаза глазной поверхности и сопровождающиеся глазными симптомами, этиология которых связана с дестабилизацией слезной пленки, гиперосмолярностью, воспалением, поражением структур глазной поверхности и нейросенсорными нарушениями. (Craig JP. et al., TFOS DEWS II Report Executive Summary, The Ocular Surface, 2017). Распространенность данной патологии достигает 30-40% среди офтальмологических больных (The International Dry Eye Workshop; 2007). СКК, ассоциированный с системными аутоиммунными заболеваниями (АИЗ) характеризуется наиболее тяжелым клиническим течением, нередко осложняющимся развитием язвы роговицы (Т.Н. Сафонова и соав., 2013). АИЗ— это заболевания, патогенез которых обусловлен развитием самоподдерживающегося иммунного ответа на собственные антигены (АГ) организма, приводящего к повреждению клеток, содержащих эти АГ (Frisell T, Saevarsdottir S et al., 2016 ; В. В. Ярилин, 2005). Среди АИЗ по частоте встречаемости ревматоидный артрит (РА) и первичный синдром Шегрена (ПСШ) занимают одно из первых мест (Т.Н. Сафонова и соав., 2013).

    Одним из офтальмологических проявлений РА и экспертным признаком для ПСШ является СКК, который констатируют у 80-90% пациентов с ПСШ и 25-30% больных с РА (Zlatanovic G., Veselinovic D., Cekic S., Zivkovic M., Dordevic-Jocic J., Zlatanovic M. et al., 2010). В последнем случае, наличие СКК может определять степень активности РА (Синяченко О.В., Павлюченко А.К., Лукашенко Л.В., Гончар Г.А. и соав., 2012). В клинической практике нередко манифестация АИЗ начинается с поражения органа зрения, ухудшающего качество жизни больных (Subbarayal B. et al., 2016, Daguano C. et al., 2011).

    В ходе исследований доказана взаимосвязь ПСШ и РА с генетическими факторами (S. Raychaudhuri et al., 2013, JJ. Huang et al., 2012; MR. Spalinger et al., 2016; K. Mehla et al., 2014). Установлен вклад полиморфных маркеров генов THBS1, GTF2I, MUC1, TRIM21, STAT4, PTPN22 в развитии этих АИЗ, однако ассоциативной связи с офтальмологическим проявлениями АИЗ выявлено не было. В связи с этим одним из значимых направлений исследований является выявление полиморфных маркеров генов THBS1, GTF2I, MUC1, TRIM21, STAT4, PTPN22, которые могут быть ассоциированы с развитием СКК при наиболее распространенных АИЗ: РА и ПСШ. Это позволит дополнить алгоритм диагностики СКК на фоне ПСШ и РА и на доклиническом этапе (при отсутствии клиникофункциональных изменений) прогнозировать развитие СКК.

    Цель исследования

    Определить взаимосвязь между клинико-морфологическими и молекулярно-генетическими изменениями для усовершенствования диагностики и прогноза течения сухого кератоконъюнктивита при ревматоидном артрите и первичном синдроме Шегрена.

    Задачи исследования:

    1. Изучить особенности клинического течения сухого кератоконъюнктивита в выборке больных с ревматоидным артритом и первичным синдромом Шегрена на основе стандартных офтальмологических, клинических и генетических методов исследования.

    2. Определить предрасполагающие генотипы в полиморфных маркерах генов THBS1, GTF2I, MUC1, TRIM21, STAT4, PTPN22 у пациентов с ревматоидным артритом и первичным синдромом Шегрена.

    3. Установить морфофункциональные особенности течения сухого кератоконъюнктивита в соответствии с выявленными молекулярногенетическими изменениями.

    4. Определить прогностическое значение молекулярно-генетического анализа в развитии сухого кератоконъюнктивита.

    5. Сопоставить полученные результаты генотипирования полиморфных маркеров генов THBS1, GTF2I, MUC1, TRIM21, STAT4, PTPN22 сухого кератоконъюнктивита аутоиммунного генеза с данными генотипирования при экзогенном синдроме сухого глаза.

    Научная новизна

    1. Впервые в РФ у пациентов с ревматоидным артритом и первичным синдромом Шегрена определены предрасполагающие генотипы полиморфных вариантов генов THBS1, GTF2I, MUC1, TRIM21, STAT4, PTPN22.

    2. Установлены генетические и морфофункциональные особенности сухого кератоконъюнктивита при ревматоидном артрите и первичном синдроме Шегрена.

    3. Проведен анализ взаимосвязи полиморфных маркеров в генах THBS1, GTF2I, MUC1, TRIM21, STAT4, PTPN22 с морфофункциональными особенностями сухого кератоконъюнктивита при ревматоидном артрите и первичном синдроме Шегрена.

    4. Выявлены полиморфные маркеры rs7947461 гена TRIM21 и маркер rs33996649 гена PTPN22, являющиеся предикторами развития экзогенного синдрома сухого глаза.

    Теоретическая и практическая значимость:

    1. Разработан и внедрен в практику новый метод диагностики сухого кератоконъюнктивита с помощью анализа кривых плавления ДНК, который позволяет своевременно установить диагноз первичного синдрома Шегрена при отсутствии клинико-функциональных признаков поражения глазной поверхности.

    2. При определении предрасполагающих генотипов полиморфизмов в генах TRIM21, MUC1, THBS1, STAT4, PTPN22, GTF2I у пациентов с первичным синдромом Шегрена и ревматоидным артритом возможно прогнозирование течения сухого кератоконъюнктивита.

    3. Впервые при комплексном обследовании пациентов с экзогенным синдромом сухого глаза выявлены предрасполагающие генотипы полиморфных маркеров rs7947461, rs33996649 генов TRIM21 и PTPN22, определяющие риск поражения глазной поверхности.

    Методология и методы диссертационного исследования

    Методологической oснoвой диссертационной работы является применение комплекса метoдов научного познания. Работа выполнена в дизайне прoспективного открытого сравнительного исследования с использoванием клинических, инструментальных, молекулярногенетических, аналитических и статистических методов.

    Положения, выносимые на защиту:

     1. Разработан и внедрен в практику новый способ диагностики сухого кератоконъюнктивита при ревматоидном артрите и первичном синдроме Шегрена с помощью анализа кривых плавления ДНК.

    2. Предложен способ прогнозирования развития и течения сухого кератоконъюнктивита на основе определения предрасполагающих генотипов полиморфных маркеров генов TRIM21, MUC1, THBS1, STAT4, PTPN22, GTF2I у пациентов с первичным синдромом Шегрена и ревматоидным артритом.

    3. Определены группы риска пациентов по развитию экзогенного синдрома сухого глаза на основании выявления предрасполагающих генотипов полиморфных маркеров генов PTPN22 и TRIM21.

    4. Создана диагностическая панель генетических маркеров для определения риска развития ревматоидного артрита, первичного синдрома Шегрена и сухого кератоконъюнктивита на фоне вышеперечисленных аутоиммунных заболеваний.

    Личный вклад автора

    Автором определены цель и задачи исследовании, проведено обследование 154 пациентов с ревматоидным артритом и синдромом Шегрена с/без сухого кератоконъюнктивита, 31 пациента с экзогенным синдромом сухого глаза, 100 человек контрольной группы. Применен в практике метод анализа кривых плавления ДНК. Самостоятельно проанализированы и обобщены результаты исследований, осуществлена статистическая обработка полученных данных. Автором выполнена подготовка публикаций и докладов по теме настоящей работы.

    Степень достоверности и апробация результатов исследования

    Степень достоверности проведенных результатов исследования определяется достаточным и репрезентативным объемом выборок исследований и обследованных пациентов с использованием современных инструментальных и молекулярно-генетических методов исследования.

    Сформулированные в диссертации научные положения, выводы и практические рекомендации строго аргументированы и логически вытекают из системного анализа результатов проведенных методов исследования.

    Результаты диссертационной работы доложены на III Всероссийском конгрессе «Аутоиммунные и иммунодефицитные заболевания» (Москва, 16-17 ноября 2018 г.), на Международном конгрессе «VII съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров, посвященный 100- летию кафедры генетики СПбГУ, и ассоциированные симпозиумы» (Санкт-Петербург, 18-22 июня 2019 г.), на Всероссийской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 26 июня 2019 г.)

    Внедрение результатов работы

    Результаты работы внедрены в клиническую практику на кафедре глазных болезней ПМГМУ им. И.М. Сеченова и в ФГБНУ «НИИГБ».

    Публикации

    По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, в том числе 4 статьи в рецензируемых научных журналах, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования РФ для публикации основных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата наук, из них все входят в базу цитирования Scopus и одна в базу цитирования Web of Science.

    Получен 1 патент: RU 2679799, 13.02.19. «Способ прогнозирования тяжелой степени сухого керататоконъюнктивита при синдроме Шегрена, ассоциированном с ревматоидным артритом»

    Объем и структура диссертации

    Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста и состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 14 отечественных и 91 иностранных источника. Диссертация иллюстрирована 20 таблицами и 36 рисунками.

    

Содержание работы



    Материал и методы исследования

     Клиническое и морфофункциональное исследование выполнено у 154 пациентов с АИЗ (1 мужчина, 153 женщины) в возрасте от 35 до 72 лет (средний возраст 53,5 лет). Группа контроля состояла из 131 человека, из которых у 31пациента поставлен диагноз синдром сухого глаза экзогенной этиологии, и 100 - здоровые добровольцы без АИЗ и отягощенной наследственности. Все группы были статистически сопоставимые по полу и возрасту пациентов.

    Офтальмологические методы обследования пациентов

    Всем пациентам было выполнено стандартное офтальмологическое обследование (визометрия, рефрактокератометрия, тонометрия, периметрия, биомикроскопия, офтальмоскопия). Дополнительное обследование включало: тест Ширмера I, II пробу Норна, тесты с витальными красителями, лазерную конфокальную томографию роговицы, импрессионноцитологическое исследование конъюнктивы. Тест Ширмера I выполняли по стандартной схеме без анестезии с использованием диагностических полосок Tear Strips (Contacare Ophthalmics and Diagnostics, Индия, №ФСЗ 2012/11856). Тестовые полоски вводили в латеральную часть глазной щели, после чего пациент закрывал глаза на 5 минут. За условную норму принимали значения ≥ 15 мм, от 10 до 15 мм – легкая степень гиполакримии, от 10 до 5 мм – умеренная, ≤5 мм – тяжелая.

    Результаты теста Ширмера I отражают объем базальной слезопродукции. Его дополняют проведением теста Ширмера II. Для этого дополнительно раздражали слизистую оболочку носа специальным ватным аппликатором.

    Тест считали положительным, если смачиваемость полоски за 5 минут составляла не менее 5 мм. Результаты теста отражали объем рефлекторного компонента слезопродукции.

    Пробу Норна (определение время разрыва слезной пленки) проводили по общепринятой методике. Применяли тест-полоски Fluo Strips (Contacare Ophthalmics and Diagnostics, Индия, №ФСЗ 2012/11856). При проведении тестов с витальными красителями окрашивание глазной поверхности осуществляли флюоресциином (Fluo Strips, Contacare Ophthalmics and Diagnostics, Индия, №ФСЗ 2012/11856) и лиссаминовым зеленым (Lissamine Green, Contacare Ophthalmics and Diagnostics, Индия, №ФСЗ 2012/11856).

    Степень окрашивания эпителия роговицы и конъюнктивы оценивали в баллах по Оксфордской шкале оценки поражения глазной поверхности.

    Лазерную конфокальную томографию (HRT) роговицы проводили на аппарате Heidelberg Retina Tomograph III с роговичным модулем Rostock Cornea Module (HRT III/RCM) (Heidelberg Engineering GmbH, Германия).

    Импрессионно-цитологическое исследование конъюнктивы проводил заведующий лаборатории фундаментальных методов исследования в офтальмологии «НИИ глазных болезней», к.м.н. А.А. Федоров.

    Молекулярно-генетические исследования

    Всем пациентам и группе контроля выполнен забор венозной крови.

    Материалом для исследования служила геномная ДНК, выделенная из лейкоцитов периферической крови с помощью протеинкиназы К с последующей фенольно-хлороформной экстракцией и осаждением этанолом.

    Выделенные образцы ДНК хранили при температуре -200С. ДНК из крови выделяли по стандартной методике. Выделенную ДНК растворяли в 100 мкл буфера ТЕ рН 8.0. Качество и примерную концентрацию ДНК определяли с помощью электрофореза в агарозном геле. (рисунок 1).

    Для поиска и анализа мутаций в исследуемом гене был использован метод анализа кривых плавления нуклеиновых кислот (High Resolution Melting Point Analysis (HRM)). В работе использовали набор qPCRmix-HS SYBR, предназначенный для полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени с интеркалирующим красителем SYBR Green I, в соответствии с протоколом производителя (Евроген, Россия). (рисунок 2).

    Статистическую обработку результатов при оценке полиморфизма генов проводили с использованием закона генетического равновесия ХардиВайнберга для аутосомных признаков. Обработку результатов проводили с помощью калькулятора для расчёта статистики со следующего сайта http://gen-exp.ru/calculator_or.php, а также с использованием программы «STATISTICA 8». Корреляция предрасполагающих генотипов с результатами функциональных тестов, импрессионной цитологии, HRT проведена в программе GraphPad Prism 6.0 (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, США). Для анализа хода и структуры нервных волокон роговицы использовано авторское программное обеспечение Liner 1.2S. При сравнении частот встречаемости генотипов применяли критерий Пирсона, а для малых выборок – точный критерий Фишера. Комплексная оценка связей между контрольной и исследуемыми группами заключалась в использовании логистической регрессии, определяя отношение шансов (OR) с 95% доверительным интервалом (CI) с уровнем значимости, равным 0,05.

    

Результаты исследования



    Результаты клинико-функционального и морфологического исследований пациентов с ПСШ и РА

     Все пациенты были обследованы в ФГБНУ НИИ ревматологии им. В.А. Насоновой, где 75 пациентам верифицирован диагноз ПСШ, а 79 - РА. При нулевом визите в ФГБНУ НИИ глазных болезней всем больным было проведено стандартное и дополнительное офтальмологическое обследование.

    Результаты представлены в таблице 2.

    По результатам проведенного клинико-функционального анализа пациенты были разделены на 2 основные группы и 2 подгруппы:

    • 1 группа – 75 пациентов с установленным диагнозом ПСШ

    • 1а - 40 пациентов с признаками СКК;

    • 1б - 35 пациентов без признаков СКК;

    • 2 группа – 79 пациентов с установленным диагнозом РА

    • 2а - 37 пациентов с признаками СКК;

    • 2б – 42 пациента без признаков СКК. (рисунок 3).

    HRT исследование проведено 75 пациентам с диагнозом ПСШ.

    Анализировали ход и структуру НВР. У всех пациентов 1-а подгруппы наблюдали изменения НВР. У пациентов 1-б подгруппы в 100 % случаев изменений НВР не выявлено. (рисунок 4 А, Б).

    На основании данных импрессионно-цитологического исследования конъюнктивы у всех пациентов 1-а подгруппы диагностировали субкомпенсированную (13 случаев) и декомпенсированную (27 случаев) стадии СКК. В 1-б подгруппе зафиксированы незначительные дистрофические изменения на фоне нормальной эпителиальной выстилки. (рисунок 5 А, Б).

    При проведении HRT исследования у пациентов с РА в 2-а и 2-б подгруппе были зафиксированы изменение хода и структуры НВР. (рисунок 6 А, Б).

    По результатам импрессионно-цитологического исследования конъюнктивы в 2-а подгруппе в 100% случаев диагностированы изменения эпителия конъюнктивы в стадии декомпенсации. У всех пациентов 2-б подгруппы обнаружено, что на фоне нормальной эпителиальной выстилки присутствуют единичные участки дистрофически измененных клеток. Умеренная лейкоцитарная инфильтрация. (рисунок 7 А, Б).

    Группа пациентов с экзогенным синдромом сухого глаза включала 31 пациента в возрасте от 32 до 54 лет (средний возраст 40.5 лет), которые обратились в ФГБНУ НИИ ГБ. По результатам функциональных проб, данных HRT (НВР однонаправленны, вытянуты, местами «четкообразной» формы, хорошо контрастируют на тёмном фоне. Количество НВР не изменено), импрессионно-цитологического исследования конъюнктивы (изменения эпителия конъюнктивы по типу «сухого» глаза в стадии компенсации), был установлен диагноз двухстороннего экзогенного ССГ. Пациенты были дообследованы в «Научно-исследовательском институте ревматологии имени В.А. Насоновой» для исключения аутоиммунного генеза заболевания.

    Анализ полиморфных маркеров rs915956, rs7947461, rs4144331 гена TRIM21 в группе пациентов с ПСШ, РА, экзогенным ССГ

    В результате исследования была установлена ассоциация полиморфных маркеров rs7947461, rs4144331 гена TRIM21 с риском развития СКК на фоне ПСШ. Определено, что наличие генотипа ТТ полиморфного маркера rs4144331 связано с риском развития ПСШ (р=5.0E-8).Тогда как предрасполагающий генотип ТТ полиморфного маркера rs7947461 гена TRIM21 связан с риском развития поражения глазной поверхности на уровне тенденции (р=0.09).

    Участие маркера rs915956 в развитии ПСШ статистически не подтверждено (p=0.261).

    Выявлено, что предрасполагающий генотип ТТ полиморфного маркера rs915956 гена TRIM21ответственен за высокий риск развития СКК при РА (р=0.0048) и не связан с возникновением экзогенного ССГ (p=0.017).

    Результаты исследования генотипа ТТ маркера rs7947461 гена TRIM21 показали, что данный генотип ассоциирован как с развитием СКК при РА (р=3.0E-5), так и экзогенным ССГ (р=0,008).

    При выявлении взаимосвязи генотипа АА полиморфного маркера rs4144331 гена TRIM21, с большой достоверностью (р=0.005), определено, что генотип связан с развитием РА и на уровне тенденции (р=0.085) ответственен за развитие СКК.

    Анализ полиморфного маркера rs4072037 гена MUC1 в группе пациентов с ПСШ, РА и корреляция с результатами импрессионноцитологического исследования конъюнктивы

    Выявлена корреляция между степенью эпителиопатии конъюнктивы с генотипами AG, GG. Маркер rs4072037 гена MUC1, непосредственно не участвует в патогенезе СКК аутоиммунной этиологии и развитии экзогенного ССГ (p=0.811), но служит прогностическим критерием поражения эпителия конъюнктивы. Наличие предрасполагающих генотипов отражает снижение адаптивных свойств эпителия и может объяснить развитие декомпенсации, под воздействием экзогенных факторов. У пациентов с РА выявленная корреляции между степенью эпителиопатии конъюнктивы с генотипами AG, GG данного маркера. Участие маркера rs4072037 в патогенезе СКК при РА определено на уровне тенденции (p=0.071).

    Анализ полиморфных маркеров rs1478604, rs2292305, rs2228262 гена THBS1 в группе пациентов с ПСШ, РА, экзогенным ССГ и корреляция с результатами HRT

    При установлении ассоциативной связи для полиморфных маркеров rs1478604, rs2292305 гена THBS1 показано, что данные маркеры не ответственны за развитие СКК (p=0.260) и (p=0.060). Но для полиморфного маркера rs1478604 гена THBS1 определена ассоциация с риском развития ПСШ (р=0.001). Установлено, что за развитие РА и СКК полиморфные маркеры rs1478604, rs2292305, rs2228262 гена THBS1 не ответственны (p>0.05). Определена корреляция состояния НВР с предрасполагающими генотипами исследуемых маркеров. По данным HRT, установлено, что генотип GG маркера rs1478604 коррелирует со степенью тяжести СКК (p=0.02) и изменением хода и структуры НВР. В то время как генотип GG маркера rs2228262 взаимосвязан только со степенью тяжести СКК (p=0.03).

    С помощью значений коэффициентов анизотропии направленности, проанализированы данные о ходе и структуре НВР. При расчете коэффициента анизотропии направленности самые низкие значения были получены в 1-а подгруппе, что свидетельствует о наиболее выраженном повреждении нервного волокна у данных больных. Максимально высокие показатели этого коэффициента зафиксированы в группах пациентов с экзогенным ССГ и 1-б подгруппе. Средние значения коэффициента анизотропии наблюдали в группе пациентов с РА как в 2-а, т так и в 2-б подгруппах, но при этом в 2-а подгруппе коэффициент анизотропии направленности был ниже, что свидетельствовало о более сильном повреждении структуры нервного волокна.

    Анализ полиморфных маркеров rs7574865 и rs7582694 гена STAT4 в группе пациентов с ПСШ и РА

    В ходе исследования выявлена ассоциация генотипа GG маркера rs7582694 гена STAT4 с риском развития ПСШ (р=0.0005) при отсутствии взаимосвязи с развитием СКК (p>0.05).

    При анализе полиморфного маркера rs7574865 гена STAT4 получены статистически значимые результат на уровне тенденции (χ²=5.29; OR=3.01, CI95%= (0.77 – 11.77), p=0.056) в подгруппе пациентов 1-а. При сопоставлении данных генотипирования пациентов 1-а с экзогенным ССГ (n=31), установлено, что предрасполагающий генотип ТТ данного маркера был только у пациентов 1-а подгруппы. Ни у одного пациента из группы с экзогенным ССГ данный генотип не определен.

    Взаимосвязь маркеров rs7574865 и rs7582694 гена STAT4 с риском развития СКК и РА не установлена (p>0.05).

    Анализ полиморфных маркеров rs2476601 и rs33996649 гена PTPN22 в группе пациентов с ПСШ, РА и экзогенным ССГ

    Установлена ассоциация полиморфного маркера rs2476601 гена PTPN22 с развитием ПСШ (р=0.005). Взаимосвязи данного маркера с развитием СКК при ПСШ не определено (p>0.05). В ходе исследования доказана ассоциация полиморфного маркера rs33996649 гена PTPN22 с риском развития ПСШ (р=0.007) и СКК при данном заболевании (р=0.025). Помимо этого, данный маркер был выделен в ходе генотипирования в группе пациентов с экзогенным ССГ (р=0.023).

    Взаимосвязи с риском развития РА ни у одного маркера гена PTPN22 не зафиксировано (p>0.05).

    Анализ полиморфного маркера rs117026326 гена GTF2I в группе пациентов с ПСШ и РА

    По результатам проведенного генотипирования не удалось установить взаимосвязи полиморфного маркера rs117026326 с риском развития ПСШ, РА и СКК (p>0.05).

    В представленной работе имеются результаты, достоверность которых значима на уровне тенденции (0.05<р <0.1). Вероятно, эти данные могли иметь желаемую степень точности при увеличении размера выборки пациентов и не являться следствием выборочной вариабельности.

    

Выводы



    1. Впервые на репрезентативном материале (154 пациента с первичным синдромом Шегрена и ревматоидным артритом) на основании проведенного комплексного обследования, включающего стандартные и дополнительные диагностические методы исследования (лазерная конфокальная микроскопия роговицы, импрессионно-цитологическое исследование конъюнктивы) с одновременным выделением предрасполагающих генотипов полиморфных маркеров генов TRIM21, MUC1, THBS1, GTF2I, STAT4, PTPN22 определен риск развития сухого кератоконъюнктивита.

    2. Идентифицированы предрасполагающие генотипы полиморфных маркеров генов TRIM21, MUC1, THBS1, GTF2I, STAT4, PTPN22 у пациентов с ревматоидным артритом и первичным синдромом Шегрена и установлены следующие ассоциации:

    2.1 Между полиморфными маркерами rs915956, rs7947461, rs4144331 гена TRIM21и предрасположенностью к развитию ревматоидного артрита (р <0,05);

    2.2 Между полиморфными маркерами генов: TRIM21маркер rs4144331; THBS1маркер rs1478604; STAT4маркер rs7582694 и предрасположенностью к развитию первичного синдрома Шегрена с высоким уровнем статистической значимости (р≤0,001), а генов PTPN22 маркеров rs2476601 и rs33996649; TRIM21 маркер rs7947461, GTF2I маркер rs117026326, STAT4 маркер rs7574865 на уровне тенденции (р≤0,1).

    3. Выявлена умеренная корреляция генотипов AG и GG полиморфного маркера rs4072037 гена MUC1 с функциональными показателями (тест Ширмера I, II; проба Норна) и изменениями эпителия конъюнктивы по типу «сухого» глаза в стадии суб- и декомпенсации по данным импрессионно-цитологического исследования (p<0.05);

    3.1 Установлена ассоциация предрасполагающих генотипов GG полиморфных маркеров rs1478604, rs2228262 гена THBS1 с изменением хода и структуры нервных волокон роговицы и степенью тяжести сухого кератоконъюнктивита (p<0.05) при первичном синдроме Шегрена.

    4. Определено прогностическое значение предрасполагающих генотипов гена TRIM21маркер rs915956 и rs7947461 с риском развития сухого кератоконъюнктивита на фоне ревматоидного артрита с высоким уровнем статистической достоверности (р≤0,001), а геновTRIM21 маркер rs4144331, MUC1 маркер rs4072037, THBS1 маркер rs2292305 на уровне тенденции (р≤0,1).

    5. Риск развития сухого кератоконъюнктивита на фоне первичного синдрома Шегрена ассоциирован с наличием предрасполагающих генотипов генов TRIM21маркер rs4144331, PTPN22 маркер rs33996649 с (р≤0,001), а геновTHBS1маркер rs2228262, STAT4 маркер rs7574865; GTF2I маркер rs117026326 на уровне тенденции (р≤0,1).

    6. Установлена прогностически значимая ассоциация полиморфных маркеров гена TRIM21 rs7947461 и гена PTPN22 маркера rs33996649 (р≤0,01) с риском развития экзогенного синдрома сухого глаза.

    

Практические рекомендации



    1. При обследовании пациентов с ревматоидным артритом и первичным синдромом Шегрена, с целью прогнозирования развития сухого кератоконъюнктивита (при отсутствии клинико-функциональных изменений глазной поверхности), рекомендуется проведение анализа статуса генов: TRIM21, MUC1, THBS1, STAT4, PTPN22.

    2. При вероятном первичном синдроме Шегрена (отсутствие необходимого количества экспертных критериев) рекомендуется комплексный молекулярно-генетический анализ, включающий оценку статуса полиморфных маркеров rs7947461, rs4144331 гена TRIM21; маркера rs1478604 гена THBS1; маркеров rs7574865, rs7582694 гена STAT4; маркеров rs2476601, rs33996649 гена PTPN22.

    3. При выявлении предрасполагающих генотипов полиморфных маркеров генов: TRIM21, MUC1, THBS1, STAT4, PTPN22 к развитию сухого кератоконъюнктивита, показано диспансерное наблюдение и профилактическое использование слезозаместительной терапии.

    4. Для прогнозирования развития экзогенного синдрома сухого глаза и назначения слезозаместительной терапии у лиц после кераторефракционных оперативных вмешательств; при длительном ношении контактных линз; работе с гаджетами; системном и местном применение различных медикаментозных препаратов; использовании косметики, содержащей ретиноиды, рекомендуется идентификация предрасполагающих генотипов полиморфного маркера rs7947461 гена TRIM21; маркера rs33996649 гена PTPN22.

    

Список работ, опубликованных по теме диссертации:



    1. Сафонова Т.Н., Зайцева Г.В. Ассоциация полиморфизмов генов с развитием сухого кератоконъюнктивита при ревматоидном артрите и синдроме Шегрена // Вестник офтальмологии. - 2018. - Т. 134. № 3. - С. 108-115.

    2. Зайцева Г.В., Сафонова Т.Н., Бурденный А.М., Логинов В.И. Ассоциация полиморфных маркеров rs7947461(C/T), rs915956 (C/T), rs4144331 (C/A) гена TRIM21 с развитием сухого кератоконъюнктивита на фоне синдрома Шегрена // Актуальные проблемы офтальмологии. - 2019. - №4. - С. 103-107.

    3. Сафонова Т.Н., Зайцева Г.В., Бурденный А.М., Лукина С.С., Логинов В.И., Взаимосвязь полиморфизмов гена TRIM21 с тяжестью сухого кератоконъюнктивита при ревматоидном артрите и болезни Шегрена // Вестник офтальмологии. - 2019. - Т. 135. № 5. - С. 192-197

    4. Сафонова Т.Н., Зайцева Г.В., Бурденный А.М. Полиморфные маркеры некоторых генов в развитии сухого кератоконъюнктивита у пациентов с ревматоидным артритом и синдромом Шегрена // Вестник офтальмологии. - 2019. - Т. 135. № 5. - С. 254-260.

    5. Зайцева Г.В., Сафонова Т.Н. Анализ взаимосвязи полиморфизмов гена TRIM21 со степенью тяжести сухого кератоконъюнктивита при ревматоидном артрите и болезни Шегрена: пилотное исследование. // Тезисы на IX симпозиуме Медицинская генетика и моделирование болезней человека. Международный конгресс «VII съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров, посвященный 100-летию кафедры генетики СПбГУ, и ассоциированные симпозиумы», 18-22 июня 2019г., С. 730.

    6. Сафонова Т. Н., Федоров А. А., Зайцева Г. В., Бурденный А. М., Логинов В.И. Ассоциация полиморфного маркера rs4072037 гена MUC 1 с сухим кератоконъюнктивитом на фоне синдрома Шегрена // Сборник научных трудов научно-практической конференции с международным участием. XII Российский общенациональный офтальмологический форум. 01-03 октября 2019 года. С. 402-403.

    7. Т.Н. Сафонова, З.В.Сурнина, Г.В.Зайцева, А.М.Бурденный, В.И.Логинов. Изучение роли полиморфных маркеров rs1478604, rs2292305, rs2228262 гена THBS1 в развитии сухого кератоконъюнктивита при синдроме Шегрена // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2020. - Т.169. №5. - С. 640-643.

    

Список изобретений:



    Сафонова Т.Н., Зайцева Г.В., Способ прогнозирования тяжелой степени сухого керататоконъюнктивита при синдроме Шегрена, ассоциированном с ревматоидным артритом. Патент РФ: заявка №2018132898 от 17.09.2018.

    Патент РФ на изобретение №2679799 от 13.02.19.

    

Список сокращений



    АГ – антиген

    АИЗ – аутоиммунное заболевание

    АПК – антигенпрезентирующие клетки

    АТ – антитело

    ВП – внесуставные проявления

    ГКГ (MHC) – главный комплекс гистосовместимости (Major histocompatibility complex)

    ДК – дендритные клетки

    ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота

    ИК – иммунные комплексы

    ЛПЗ –лимфопролиферативные заболевания

    НВР – нервные волокна роговицы

    НХЛ – неходжкинские лимфомы

    ПСШ – первичный синдром Шегрена

    ПЦР – полимеразная цепная реакция

    РА – ревматоидный артрит

    РФ – ревматоидный фактор

    СКК – сухой кератоконъюнктивит

    ССГ – синдром сухого глаза

    ЭДТА – этилендиаминтетрауксусная кислота

    GWAS – полногеномный поиск ассоциаций (Genome-wide association studies)

    HLA – гены системы тканевой совместимости человека (Human Leukocyte Antigens)

    HRM – анализ кривых плавления ДНК (High Resolution Melting Point Analysis)

    HRT – лазерная конфокальная микроскопия (Heidelberg Retina Tomography)

    IL – интерлейкины

    Lyp – белок лимфоид-специфическая фосфатаза


Город: Москва
Дата добавления: 28.07.2020 14:09:01, Дата изменения: 29.07.2020 15:55:54