Новый метод суправитального контрастирования биологических тканей на примере переднего эпителия роговицы для последующего исследования на сканирующем электронном микроскопе

    Актуальность. Применяемые методы контрастирования биологических тканей для проведения сканирующей электронной микроскопии разработаны в середине XX в. и рассчитаны на исследование в режиме высокого вакуума. Появление низковакуумных микроскопов (режимы EP, VP и WET-SEM) позволило наблюдать ткань без фиксации. Однако контрастность нативных образцов при электронной микроскопии заметно ниже, а классические методы контрастирования не применимы для необезвоженной ткани.

    Цель. Разработка метода суправитального контрастирования биологических тканей для исследования на сканирующем электронном микроскопе в низковакуумном режиме.

    Материал и методы. Объект исследования – 15 образцов переднего эпителия роговицы площадью 5 мм 2 . Кадаверный материал (p.mort. <12 ч). Изотонический раствор NdCl3 (18 г/л) и изотонические смеси NdCl3 -SmCl 3 -NaCl. Микроскоп Zeiss EVO LS10, режим EP 70 Па, 5-25 кВ, SE-BSE. Образцы экспонировались в растворе 0,5-5 ч с последующей промывкой H2 O 10-50 сек.

    Результаты. Выявлена иммобилизация лантаноидов на мембранных структурах (как плазмалеммы, так и клеточных органелл) и их накопление в количествах, позволяющих контрастировать уль-траструктуру клеток в режиме BSE. Подобраны оптимальные режимы съемки. Разработан алгоритм сшивки комбинированных изображений SE+BSE, позволяющий визуализировать структуру поверхности образца одновременно с ультраструктурой подповерхностного 10-микронного слоя.

    Заключение. Метод может быть рекомендован для исследований в биологии, медицине, офтальмологии. Получен патент РФ.