Новые подходы к исследованию функциональной активности клеток эндотелия препаратов роговицы глаза

    Сохранность функциональной активности эндотелиальных клеток консервированной роговицы является залогом хорошего исхода ее трансплатации. Существующие инвазивные и неинвазивные методы оценки жизнеспособности донорской роговицы являются косвенными. Разработка и внедрение прямых методов исследования транспортных функций клеток эндотелия могут повысить качество оценки сохранности роговицы в процессе консервации.

    Цель. Определить потенциальную возможность диагностики функциональной сохранности трансплантатов роговицы человека на основе исследования транспорта воды и ионов натрия клетками эндотелия роговицы свиньи.

    Материал и методы. Исследование проводилось на дисках роговицы свиньи. Оценка динамики объема клеток проводилась методом, основанным на эффекте гашения флуоресценции красителя Calcein белками цитоплазмы. Содержание внутриклеточного натрия исследовалось методом флуоресцентной микроскопии с использованием специфического для натрия красителя Sodium Green.

    Результаты. При повышении температуры с 25 до 37° С происходит активация Na/K-ATФазы, что приводит к снижению объема клеток эндотелия роговицы с характерным временем 34,8±1,3 с (n=4), скорость снижения -3×10-3±10-5 с-1, (n=4). Скорость снижения относительной концентрации внутриклеточного натрия при этом составила -7×10-4±10-6 с-1, (n=5). Холодовая консервация препаратов роговицы при 4° С в течение 6 суток и более значительно снижает интенсивность выведения натрия из клетки при повышении температуры до 37° С.

    Выводы. Исследование динамики объема клеток эндотелия и содержания натрия в эндотелиальных клетках при холодовой консервации позволяет повысить качество оценки жизнеспособности консервированной роговицы.

    Ключевые слова: эндотелий роговицы, холодовая консервация, внутриклеточный натрий, объем клетки.