2.1. Дизайн исследования

    Дизайн исследования построен с целью создания технологии максимально атравматичного микроинвазивного лечения ВМТ с использованием коллагенолитического фермента отечественного производства (препарат бактериальной коллагеназы «Коллализин») и основывается на теоретической концепции механизма витреоретинальной адгезии (ВРА), обуславливаемого коллагеновыми структурами стекловидного тела. При получении данных, подтверждающих теоретические предпосылки, очевидным и логичным выглядит применение энзима, способного воздействовать именно на коллагеновые структуры стекловидного тела для устранения ВМТ. Для этого наиболее предпочтителен коллагенолитический фермент отечественного производства, разрешенный для интравитреального применения.

    Для обоснования предложенной теоретической концепции необходимы дополнительные исследования микроструктуры области витреоретинального контакта, подтверждающие теоретическую концепцию механизма витреоретинальной адгезии, обуславливаемого коллагеновыми структурами стекловидного тела.

    В случае подтверждения концепции механизма витреоретинальной адгезии, обуславливаемого коллагеновыми структурами необходимы исследования коллагенолитических свойств коллагеназы. Бактериальная коллагеназа, а именно препарат отечественного производства «Коллализин» длительное время применяется для интравитреального введения, однако до настоящего времени не получено экспериментальных данных о его воздействии на интравитреальные структуры глаза человека. Нет данных о воздействии бактериальной коллагеназы на отдельные фибриллы стекловидного тела, являющиеся его наименьшей структурной единицей, и на преретинальные структуры области витреоретинального контакта.

    Несмотря на заявленную высокую специфичность не проводилось исследований по воздействию препарата на интраретинальные структуры. Не изучалась цитотоксичность препарата в аспекте определения безопасного цитотоксического диапазона дозировок.

    Результаты вышеперечисленных исследований дадут возможность создания технологии микроинвазивного лечения витреомакулярной тракции методом энзимного витреолизиса с применением бактериальной коллагеназы отечественного производства, после чего необходимы клинические исследования применения разработанной методики.

    Работа содержит три части исследований: исследование микроструктуры области витреоретинального контакта в аспекте изучения механизма ВРА, экспериментальные и клинические исследования.

    Последовательная структура исследования приведена ниже.

    I. Исследования микроструктуры витреоретинальных взаимоотношений в аспекте применения бактериальной коллагеназы отечественного производства для устранения ВМТ проведены с применением метода сканирующей и трансмиссионной электронной микроскопии:

    1. изучение микроструктуры ВПМ – на десяти донорских глазах от пяти доноров возраста 43-45 лет;

    2. изучение микроструктуры витреоретинальных взаимоотношений в центральных отделах сетчатки – на шестнадцати донорских глазах от восьми доноров. Возраст доноров 45-50 лет;

    3. изучение клеточной микроструктуры витреоретинального контакта – на восемнадцати донорских глазах от девяти доноров. Возраст доноров 30-40 лет;

    4. изучение механизма ВРА – на восемнадцати донорских глазах от девяти доноров. Возраст доноров 30-40 лет.

    II. Исследование воздействия бактериальной коллагеназы на СТ человека, область витреоретинального контакта и интраретинальную структуру:

    1. изучение воздействия препарата коллагеназы на отдельные коллагеновые фибриллы СТ проведено на СТ на десяти донорских глазах пяти доноров в возрасте 40-42 лет;

    2. изучение воздействия коллагеназы на эпиретинальное СТ и ВПМ проведено на шестнадцати глазах от восьми доноров в возрасте 40-42 лет;

    3. определение начальной пороговой дозы и изменения эффекта воздействия в зависимости от дозы препарата проведено на тридцати глазах от пятнадцати доноров возраста 45-50 лет;

    4. изучение воздействия коллагеназы на интраретинальные структуры проведено на восемнадцати глазах от девяти доноров возраста 43-54 лет;

    5. изучение цитотоксичности коллагеназы в расширенном диапазоне дозы и экспозиции в аспекте интравитреального применения проведено с применением методов трансмиссионной и сканирующей электронной микроскопии на культуре фибробластов мыши линии NIH 3Т3. Микроструктурные и экспериментальные исследования проведены с использованием донорских глаз, после забора из них материала для трансплантации. Время, прошедшее от момента смерти до энуклеации, в среднем составило 5 часов, период от момента смерти до начала проведения исследований в среднем составил 9 часов. Исследуемые глаза имели правильную сферическую форму, без внешних патологических признаков и были расценены, как эмметропические.

    III. Клинические исследования.

    Проведены для изучения эффективности разработанного метода лечения ВМТ с применением бактериальной коллагеназы отечественного производства. В исследование вошли 130 пациентов (130 глаз). Среди пролеченных пациентов 124 женщины (95,3%) и 6 мужчин (4,7%). Средний возраст составил 66,79±7,25 лет. Были сформированы две группы пациентов – основная (исследуемая) и контрольная с тремя подгруппами в каждой. Пациенты основной и контрольной групп были сопоставимы по полу, возрасту, исходным анатомическим параметрам глаз и патологическому процессу как в целом в группе, так и в подгруппах. Исследована эффективность разработанной технологии, выявлены побочные эффекты и осложнения. Проведено сравнение анатомической и функциональной эффективности традиционно применяемой хирургической методики с разработанной технологией микроинвазивного лечения.