Рисунок 1 – Приготовленный раствор культуры клеток S. epidermidis нанесен на МПА и равномерно распределен шпателем по поверхности питательной среды
Таблица 4 – Дизайн экспериментальных работ in vitro
В ходе эксперимента, в соответствии с поставленной целью, штамм S. epidermidis (ATCC 12228) засевали на чашки Петри с мясопептонным (МПА) , которые в дальнейшем были разделены на пять групп в зависимости от вида дополнительно добавленного вещества. Концентрация бактериальной взвеси эксперимента № 1 соответствовала 5 Ед стандарта мутности, эксперимента № 2 – 10.
В каждом эксперименте выполняли посев S. epidermidis на 150 чашек Петри. Для этого 0,1 мл приготовленной микробной взвеси заданного стандарта мутности наносили на чашки с МПА и равномерно распределяли шпателем по поверхности питательной среды (Рисунок 1).
Затем 150 чашек каждого эксперимента делили на пять групп по 30 чашек: одну контрольную и четыре опытные. В контрольной группе культуру клеток S. epidermidis культивировали на МПА без добавления дополнительных веществ (Таблица 4).
В 30 чашек I группы поверх МПА добавляли 3,5 мл раствора BSS.
В 30 чашек II группы добавляли 3,5 мл физиологического раствора с дополнительным внесением 1 мг ванкомицина в 0,1 мл физиологического раствора и 2,25 мг цефтазидима в 0,1 мл физиологического раствора. Антибиотики добавлялись в центр чашки Петри капельно, без перемешивания. В 30 чашек III группы добавляли 3,5 мл перфтордекалина (Dk- line, Bausch + Lomb).
В 30 чашек IV группы добавляли 3,5 мл перфтордекалина с дополнительным внесением 1 мг ванкомицина в 0,1 мл физиологического раствора и 2,25 мг цефтазидима в 0,1 мл физиологического раствора.
Антибиотики добавлялись в центр чашки Петри капельно, без перемешивания.
Бактериологическое исследование проводили в соответствии со следующими нормативно-методическими документами:
• Приказ МЗ СССР № 535 от 22.04.1985 «Об унификации микробиологических методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях ЛПУ».
• Клинические рекомендации «Внутрилабораторный контроль качества питательных сред для клинических микробиологических исследований». В эксперименте использовалась культура клеток S. epidermidis ATCC 12228. Это Гр. «+» кокки, имеющие шарообразную форму, располагающиеся попарно или скоплениями в виде гроздей винограда. По литературным данным, S. epidermidis является наиболее частой причиной послеоперационного эндофтальмита.
Культуру S. epidermidis, выр ащенную на МПА, использовали для приготовления микробной взвеси в физиологическом растворе – исходного инокулюма. По имеющемуся в лаборатории отраслевому стандарту мутности согласно ОСО – 42-28-85П производства Федерального государственного учреждения науки «Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов» им. Л.А. Тарасевича методом визуального сравнения были приготовлены рабочие бактерийные взвеси с концентрацией микрооргани змов 109 КОЕ/мл и 5 × 108 КОЕ/мл, что соответствует международным единицам мутности .
Дополнительно в эксперименте использовали раствор BSS (Alcon, США), перфтордекалин (Dk-line, Bausch + Lomb), растворы АБ препаратов (ванкомицин и цефтазидим).
Для проведения экспериментального исследования использовали предварительно приготовленные микробные взвеси S. epidermidis различной концентрации. В эксперименте № 1 оценивали концентрацию, соответствующую 5 Ед стандарта мутности микробных взвесей, в эксперименте № 2 – 10 Ед стандарта мутности микробных взвесей.
Культивирование проводили 24 часа в термостате ТС-1/20 СПУ (Россия) при температуре 37 °С. Далее был выполнен качественный (визуальный) анализ роста колоний S. epidermidis в изучаемых чашках, а также подсчет количества колоний.
