2.3 Лабораторные методы исследования

    Молекулярно-генетическое и цитологическое исследования проводились на базе молекулярно-генетической лаборатории (ООО «Эйджин», Москва, РФ, руководитель Зарецкий Андрей Ростиславович) в формате отчета о научноисследовательской работе с целью исследования панели молекулярногенетических онкомаркеров – мутаций в «горячих точках» генов GNAQ (экзоны 4 и 5), GNA11 (экзоны 4 и 5), EIF1AX (экзоны 1 и 2) и SF3B1 (экзон 14), оценки статуса хромосомы 3 (тест на делецию гена PPARG) и хромосомы 8 (тест на амплификацию гена MYC) с предварительным цитологическим исследованием образца. Цитологические стеклопрепараты, изготовленные по стандартной методике, подвергались цитологическому исследованию (консультация к.м.н., Мельниковой Надежды Васильевны). Поиск мутаций в «горячих точках» генов GNAQ (экзоны 4 и 5) и GNA11 (экзоны 4 и 5) в ДНК проводился в два этапа: на первом этапе осуществляли поиск трех наиболее часто встречающихся мутаций – c.626A>T, p.(Gln209Leu) в экзоне 5 гена GNA11 и c.626A>T, p.(Gln209Leu) и c.626A>C, p.(Gln209Pro) в экзоне 5 гена GNAQ – методом высокочувствительной мутационно-специфической ПЦР-РВ в модификации усиленной аллельспецифической ПЦР-РВ с одновременным подавлением амплификации аллелей «дикого типа»; при отсутствии этих трех мутаций на втором этапе проводили поиск редких мутаций в «горячих точках» экзонов 4 и 5 гена GNA11 и экзонов 4 и 5 гена GNAQ методом ПЦР с последующим секвенированием продуктов ПЦР по Сэнгеру. Поиск мутаций в «горячих точках» генов EIF1AX (экзоны 1 и 2) и SF3B1 (экзон 14) в ДНК проводили методом ПЦР с последующим секвенированием продуктов ПЦР. Определение количества копий короткого плеча хромосомы 3 (3p) и длинного плеча хромосомы 8 (8q) проводили методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) с ДНК- зондами серии «Poseidon» (Kreatech, США) специфичными к генам PPARG и MYC (C-Myc), соответственно.

    Морфологическое (гистологическое) исследование удаленных глаз проводили в патогистологической лаборатории ФГАУ «НМИЦ МНТК «Микрохирургия глаза» им. академика С.Н. Федорова» (заведующая лабораторией патологической анатомии и гистологии глаза, к.м.н., Анна Викторовна Шацких). Исследование выполняли по стандартной методике с изготовлением серийных срезов, использовали микроскоп «DM LB2» (Leica, Германия) при увеличении в 50, 100, 200, 400 раз. Макроскопически оценивали локализацию, распространенность опухоли и наличие экстрабульбарного роста.

    Клеточный тип УМ оценивали согласно Международной гистологической классификации опухолей 8-го издания (2018 г.) (G1, G2, G3): веретеноклеточная меланома (>90% веретеновидных клеток), смешанноклеточная меланома (>10% и <90% эпителиоидных клеток, <90% веретеновидных клеток) и эпителиоидноклеточная меланома (>90% эпителиоидных клеток).

    Веретеновидными считали клетки вытянутой формы с ядрами овоидной, нитевидной или продольно плоской формы. Эпителиоидными считали круглые, овальные или полиморфные клетки неправильных очертаний, расположенные рыхло, не окруженные ретикулиновыми волокнами, с обильной, обычно ацидофильной цитоплазмой и более крупными ядрами. Другие характеристики опухоли в рамках данной работы не оценивались.

    В рамках диспансерного наблюдения проводились общий офтальмологический осмотр и обследования (биомикроскопия, офтальмоскопия, визометрия и тонометрия), ультразвуковое исследование, контроль общеклинических обследований по заключению онколога, заключениям МРТ или УЗИ органов брюшной полости и КТ или рентгенографии органов грудной клетки. В качестве основного метода скрининга на метастазы рекомендовалось использование МРТ органов брюшной полости с использованием контраста (примовист) и КТ органов грудной клетки.