2.4. Исследование биосовместимости материала опорной пластины кератопротеза на модели органотипического культивирования в эксперименте ex vivo

    Экспериментальные исследования ex vivo на модели органотипического культивирования были направлены на изучение особенности взаимодействия ткани роговицы человека с исследуемыми ОПК различного дизайна: образования капсулы, реакции КСР кадаверных глаз, а также оценки структурных изменений материала ОПК. Для этой цели проводили имплантацию ОПК в строму роговиц кадаверных глаз с последующим органотипическим культивированием в стандартной ростовой среде в условиях нормотермии.

    Для проведения исследований было отобрано 12 кадаверных роговиц. В опытную группу №1 (n=4) вошли роговицы кадаверных глаз, в строму которых имплантировали ОПК сетчатой структуры со сквозными квадратными отверстиями (200х200 мкм) толщиной 100 мкм (модель№1), в опытную группу №2 (n=4) – роговицы кадаверных глаз с имплантированными ОПК толщиной 100 мкм сетчатой структуры со сквозными отверстиями трапециевидной формы и изменяющейся величины от периферии к центру (от 170х130 мкм до 180х70 мкм) (модель№2).

    Контролем служили роговицы кадаверных глаз (n=4), в которых проводили формирование роговичного тоннеля без имплантации ОПК. Для органотипического культивирования применяли среду, включающую DMEM/F12 (ПанЭко, Россия), эмбриональную телячью сыворотку 5% (HyClone, США), смесь антибиотиков 1% (Sigma Aldrich, Канада), L-глутамин 2 ммоль/л (ПанЭко, Россия).

    Культивирование роговиц кадаверных глаз проводили в CO₂ инкубаторе NU-5510 (NuAire, США) с концентрацией CO₂ 5% при температуре +37° C в течение 3 месяцев. Замену среды производили каждые трое суток в связи с изменением показателя pH в сторону закисления и соответствующего ему изменения рН - индикатора среды. По окончании исследования оценивали наличие на изучаемых поверхностях клеток, новообразованных волокнистых соединительнотканных элементов с помощью сканирующей электронной микроскопии (JEOL JSM-6000PLUS, Япония).