Рисунок 2 – Глаз кролика через 12 часов после экстракции катаракты и заражения S. epidermidis. Отек роговицы, экссудат в передней камере, экссудат в полости СТ
Рисунок 3 – Ультразвуковое исследование кроликов, 13 часов после заражения, экссудат в полости СТ, очаговая форма эндофтальмита по А.М. Южакову (1983)
Экспериментальное исследование проведено на 45 кроликах (45 глаз) породы шиншилла массой 3500–4500 г. В зависимости от проведенного лечения все кролики разделены на три группы по 15 животных в каждой.
Дизайн исследования представлен в Таблице 6.
Сроки наблюдения в раннем послеоперационном периоде: 1, 3, 7, 14, 30-е сутки. Сроки оценки отдаленных результатов лечения эндофтальмита – 6 месяцев после операции.
На 30-е сутки выведен из эксперимента 1 кролик I группы, 10 – II группы и 15 – III группы. Через 6 месяцев 14 животных I группы и 5 – II группы также выведены из эксперимента. Проведено морфологическое исследование сетчатки энуклеированных глаз в зоне лучистости и на средней периферии.
Экспериментальное исследование состояло из основных этапов:
1. Факоэмульсификация прозрачного хрусталика с интравитреальным введением в конце операции 0,1 мл раствора клеточной взвеси S. epidermidis для получения экспериментальной модели эндофтальмита.
2. Хирургическое лечение эндофтальмита различными методами через 12–14 часов после заражения.
3. Интравитрельное введение ванкомицина 1 мг в 0,1 мл физиологического раствора всем кроликам на 3-и сутки после проведенного хирургического лечения эндофтальмита.
Кроликам основной группы на 14-е сутки после операции проведена замена ПФОС на СМ.
Для создания экспериментальной модели эндофтальмита предварительно была культивирована культура клеток S. epidermidis (ATCC 12228) в условиях бактериологической лаборатории БУ «ГКБ № 1» Минздрава Чувашской Республики. После 24 часов культивирования бактериальную массу возбудителя эндофтальмита снимали петлей, после этого готовили раствор культуры клеток, соответствующий 10 Ед стандарта мутности бактериальных взвесей. Путем последовательного разведения 0,9% раствором натрия хлорида получена концентрация, соответствующая 1×106 клеток/мл. Далее в ходе эксперимента использовалось по 0,1 мл заготовленного раствора, что соответствовало 100000 клеток S. epidermidis, что, в свою очередь, являлось очень высокой концентрацией и гарантированно позволяло получить эндофтальмит [47; 91].
Все исследования до 14-х суток после операции проводили под местной топикальной анестезией 0,5% раствором алкаина и в/м седацией 3,0 мл 20% раствора ксилазина и 1,0 мл 20% раствора золетила, учитывая возбуждение кроликов вследствие болевого синдрома.
Послеоперационное воспаление оценивали биомикроскопически по классификации С.Н. Федорова и Э.В. Егоровой (1992) от 1-й до 4-й степени выраженности [17].
2.4.1 Создание экспериментальной модели Гр. «+» эндофтальмита
Первый этап эксперимента заключался в получении модели послеоперационного эндофтальмита после экстракции хрусталика. В связи с этим всем кроликам была проведена факоэмульсификация прозрачного хрусталика. В качестве факоэмульсификатора использовался комбайн Stellaris PC (Bausch + Lomb, США). В ходе операции выполнялся основной разрез роговицы 2,2 мм на 11 часах, дополнительно на 9 и 2 часах делали парацентезы 20G. Особенности строения хрусталика кроликов (сферичность и плотность ядра) не позволяли провести факоаспирацию без использования ультразвука.
Поэтому удаление ядра проведено по методике phaco chop с использованием двойного линейного контроля для минимизации затрат ультразвука. Интраоперационных осложнений, таких как отек роговицы, разрыв задней капсулы хрусталика, не было ни у одного кролика. В конце операции всем животным в 2,5–3 мм от лимба интравитреально введено по 0,1 мл приготовленного раствора культуры клеток S. epidermidis для воссоздания условий развития послеоперационного эндофтальмита. В начале и в конце операции всем кроликам закапывали в конъюнктивальную полость 0,3% раствор ципрофлоксацина, дополнительно в конце операции выполняли субконъюнктивальную инъекцию 20 мг гентамицина в 0,5 мл физиологического раствора и 0,5 мл 0,1% раствора дексаметазона.
Через 12–14 часов у всех кроликов были признаки послеоперационного эндофтальмита (Рисунок 2).
Воспалительную реакцию в витреальной полости и формирование экссудата подтверждали ультразвуковым исследованием (Рисунок 3). Данные биомикроскопии и ультразвукового исследования через 14 часов после заражения подтверждали развитие у всех кроликов послеоперационного бактериального стафилококкового эндофтальмита очаговой формы, 3–4-й стадии по А.М. Южакову (1983), что являлось прогностически неблагоприятным состоянием не только для сохранения зрительных функций, но и для сохранения глазного яблока [34; 91]. Поток белка соответствовал 196 (170; 212).
Все кролики с эндофтальмитом в зависимости от способа дальнейшего хирургического лечения были разделены на три группы:
I группу составили 15 кроликов (15 глаз), которым выполняли витрэктомию с тампонадой витреальной полости на 14 суток перфтордекалином (Dk-line, Bausch + Lomb) с интравитреальным введением комбинации АБ препаратов;
II группу – 15 кроликов (15 глаз), которым выполняли витрэктомию с введением в витреальную полость физиологического раствора и интравитреальной инъекцией в конце операции комбинации АБ препаратов;
III группу – 15 кроликов (15 глаз), которым выполняли интравитреальное введение комбинации АБ препаратов.
Комбинация АБ препаратов включала в себя 1 мг ванкомицина в 0,1 мл физиологического раствора и 2,25 мг цефтазидима в 0,1 мл физиологического раствора. Во всех случаях антибиотики вводились в отдельных шприцах с интервалом введения не менее 2 минут.
На 3-е сутки всем кроликам выполняли дополнительное введение 1 мг ванкомицина в 0,1 мл физиологического раствора.
Всем кроликам I (основной) группы через 14 суток после проведенного основного этапа лечения эндофтальмита (витрэктомия с тампонадой витреальной полости ПФОС с растворами антибиотиков) выполняли замену ПФОС на СМ (Oxane 5700, Bausch + Lomb).
Предварительно у всех кроликов I и II групп после установки портов выполняли забор материала из передней камеры и из витреальной полости для бактериологического исследования.
2.4.2 Техника выполнения операций (хирургическое лечение стафилококкового эндофтальмита)
Техника выполнения интравитреального введения АБ препаратов кроликам не отличалась от предыдущей экспериментальной работы.
Витрэктомия у животных I и II групп была выполнена на комбайне Stellaris PC с использованием троакаров калибра 25G.
У кроликов I группы витрэктомия завершалась тампонадой витреальной полости 1,5–2,0 мл перфтордекалина. В конце операции ушивали все склеротомические отверстия и интравитреально вводили комбинацию АБ препаратов по такой же технологии, как кроликам II и III групп.
В конце операции всем кроликам выполняли инстилляции 0,3% раствора антибиотика ципрофлоксацина и субконъюнктивальную инъекцию 20 мг гентамицина в 0,5 мл физиологического раствора и 0,5 мл 0,1% раствора дексаметазона.
В послеоперационном периоде все кролики получали одинаковое лечение – инстилляции АБ препарата моксифлоксацина 6 раз в день и 0,1% раствора дексаметазона 6 раз в день
