2.5. Лабораторные методы исследования

    Для решения поставленных задач было проведено определение концентрации интерлейкинов - 6, - 10 (ИЛ-6, ИЛ-10), трансформирующего фактора роста бета -1 (TGF-β1) и матриксной металлопротеиназы - 9 (MMP-9) в слезной жидкости пациентов на коммерческих тест-системах по инструкции производителя. В качестве биологического субстрата для исследования была выбрана слеза – неинвазивно доступная биологическая жидкость, омывающая орган зрения, в которой после операционной травмы возможно появление биологически активных молекул, свидельствующих о развитии деструктивно-воспалительного процесса.

    У 54 пациентов на пятом этапе исследования до оперативного лечения и на 5-е сутки после него был проведен забор слёзной жидкости микроканюлей из нижнего конъюнктивального свода глаза в сухую герметичную пробирку с последующим заморажеванием при –70° С и хранением в морозильной камере до момента определения цитокинов. Стимуляцию слезопродукции осуществляли механическим раздражением рецепторных окончаний тройничного нерва слизистой оболочки глаза.

    Определение концентрации ИЛ-6 в слезной жидкости выполняли с использованием коммерческих тест-систем производства ООО «Цитокин» (Россия, Санкт-Петербург) по инструкции производителя. Результаты иммуноферментного анализа регистрировали на вертикальном фотометре Униплан (Россия) при длине волны 450 нм. Для определения концентрации цитокина в анализируемых образцах строили калибровочный график по «средним» оптической плотности каждого стандартного раствора. Концентрацию цитокина выражали в пг/мл.

    Определение концентрации ИЛ-10 в слезной жидкости выполняли с использованием коммерческих тест-систем производства ООО «Цитокин» (Россия, Санкт-Петербург) по инструкции производителя. Результаты иммуноферментного анализа регистрировали на вертикальном фотометре Униплан (Россия) при длине волны 450 нм. Для определения концентрации цитокина в анализируемых образцах строился калибровочный график по «средним» оптической плотности каждого стандартного раствора.

    Концентрацию цитокина выражали в пг/мл.

    Определение концентрации TGF-β1 в слезной жидкости выполняли методом иммуноферментного анализа на коммерческих тест-системах DRGdiagnostics (Германия) по инструкции производителя. Результаты регистрировали на вертикальном фотометре Униплан (Россия) при длине волны 450 нм. Для определения концентрации цитокина в анализируемых образцах строили калибровочный график по «средним» оптической плотности каждого стандартного раствора. Концентрацию цитокина выражали в пг/мл.

    Определение концентрации MMP-9 в слезной жидкости выполняли с использованием коммерческих тест-систем производства CUSABIO (КНР) по инструкции производителя. Результаты иммуноферментного анализа регистрировали на вертикальном фотометре Униплан (Россия) при длине волны 450 нм. Для определения концентрации цитокина в анализируемых образцах строили калибровочный график по «средним» оптической плотности каждого стандартного раствора. Концентрацию цитокина выражали в нг/мл.

    Полученные цифровые данные были подвергнуты статистическому анализу и представлены в виде диаграмм