Рисунок 4 – Глаз кролика через 12 часов после заражения E. coli А – выраженное слизистое отделяемое; Б – отек роговицы, экссудат в передней камере
Таблица 7 – Дизайн эксперимента in vivo по оценке эффективности методов лечения послеоперационного эндофтальмита, вызванного Гр. «-» микрофлорой
С учетом того, что Гр «-» бактерии также могут являться возможной этиологической причиной послеоперационного эндофтальмита, дальнейшее исследование проведено в отношении эффективности и безопасности разработанной методики на экспериментальной модели эндофтальмита, вызванного кишечной палочкой.
Всего в ходе данного эксперимента прооперировано 45 кроликов (45 глаз) породы шиншилла массой 3500–4500 г. Оперировали только правый глаз. В зависимости от проведенного лечения все кролики разделены на три группы по 15 животных в каждой.
Сроки наблюдения в послеоперационном периоде: 1, 3, 7, 14, 30-е сутки.
На 30-е сутки все кролики выведены из эксперимента и проведено морфологическое исследование сетчатки энуклеированных глаз в зоне лучистости и на средней периферии.
Дизайн исследования представлен в Таблице 7.
Экспериментальное исследование состояло из основных этапов:
1. Факоэмульсификация прозрачного хрусталика с интравитреальным введением в конце операции 0,1 мл раствора клеточной взвеси E. coli для создания экспериментальной модели эндофтальмита.
2. Хирургическое лечение эндофтальмита различными методами через 12-14 часов после заражения.
3. Интравитреальное введение цефтазидима 2,25 мг в 0,1 мл физиологического раствора всем кроликам на 3-е сутки после проведенного хирургического лечения эндофтальмита.
Кроликам I группы на 14-е сутки после операции проведена замена ПФОС на СМ.
2.5.1 Создание экспериментальной модели Гр. «-» эндофтальмита
Для создания экспериментальной модели эндофтальмита предварительно была культивирована культура клеток E. coli ATCC 25922 в условиях бактериологической лаборатории БУ «ГКБ № 1» Минздрава Чувашской Республики.
После 24 часов культивирования бактериальную массу возбудителя эндофтальмита снимали петлей, после этого готовили раствор культуры клеток, соответствующий 10 Ед стандарта мутности бактериальных взвесей. Далее путем последовательного титрования полученного раствора получали концентрацию бактериальной взвеси – 10000 клеток в 1 мл (1000 клеток в 0,1 мл).
Методика выполнения анестезиологического пособия, создания экспериментальной модели эндофтальмита, забора интраокулярного материала для бактериологического анализа проводилась аналогично предыдущей экспериментальной работе с Гр. «+» возбудителем. Отличием от предыдущего эксперимента было интравитреальное введение всем кроликам 0,1 мл физиологического раствора, содержащего 1000 клеток E. coli, в конце операции после экстракции прозрачного хрусталика для создания модели послеоперационного эндофтальмита с Гр. «-» микрофлорой.
Через 12-14 часов у всех кроликов были признаки послеоперационного эндофтальмита (Рисунок 4).
Формирование экссудата в витреальной полости подтверждали ультразвуковым исследованием.
Учитывая данные биомикроскопии и ультразвукового исследования через 14 часов после заражения, мы получили у всех кроликов послеоперационный бактериальный эндофтальмит, вызванный кишечной палочкой, очаговой формы, 4-й стадии по А.М. Южакову (1983), что являлось прогностически неблагоприятным состоянием для сохранения не только зрительных функций, но и глазного яблока [34; 47; 91]. Поток белка соответствовал 221 (186; 236).
2.5.2 Техника выполнения операций (хирургическое лечение эндофтальмита, вызванного кишечной палочкой)
Все кролики в зависимости от способа дальнейшего хирургического лечения были разделены на три группы:
I группу составили 15 кроликов (15 глаз), которым выполнена витрэктомия с тампонадой витреальной полости перфтордекалином (Dk-line, Bausch + Lomb) и интравитреальное введение комбинации АБ препаратов на 14 суток.
II группу – 15 кроликов (15 глаз), которым выполнена витрэктомия с замещением СТ физиологическим раствором и введением интравитреально в конце операции комбинации АБ препаратов.
III группу – 15 кроликов (15 глаз), которым выполняли интравитреальное введение комбинации АБ препаратов.
Комбинация АБ препаратов включала в себя 1 мг ванкомицина в 0,1 мл физиологического раствора и 2,25 мг цефтазидима в 0,1 мл физиологического раствора. Во всех случаях антибиотики вводились в отдельных шприцах с интервалом не менее 2 минут. На 3- и сутки всем кроликам выполнено дополнительное введение 2,25 мг цефтазидима в 0,1 мл физиологического раствора.
Всем кроликам I группы через 14 суток после проведенного основного этапа лечения эндофтальмита (витрэктомия с тампонадой витреальной полости ПФОС с растворами АБ препаратов) выполнена замена ПФОС на СМ (Oxane 5700, Bausch + Lomb).
Предварительно у всех кроликов после установки портов выполнен забор материала из передней камеры и витреальной полости для бактериологического исследования.
В конце операции всем кроликам выполнены инстилляции 0,3% раствора антибиотика ципрофлоксацина и субконъюнктивальная инъекция 20 мг гентамицина в 0,5 мл физиологического раствора и 0,5 мл 0,1% раствора дексаметазона.
В послеоперационном периоде все кролики получали одинаковое лечение – инстилляции АБ препарата (моксифлоксацин) 6 раз в день и 0,1% раствора дексаметазона 6 раз в день.
Динамика результатов лечения в послеоперационном периоде была проведена по степени выраженности воспаления в баллах (см. Таблица 25).
Сравнение между группами проводилось по общему количеству баллов.
