Рисунок 4 – Жизнеспособность культуры кератоцитов при воздействии перпарата rhBMP-2 в концентрации 30 мкг/мл: А – общий вид культуры, светлое поле, объектив 10x; Б – то же поле зрения, окраска ядер всех клеток красителем Хехст 33342; В – то же поле зрения, окраска погибших клеток (отмечены стрелками) красителем пропидий йодид
Рисунок 5 – Оптическая плотность клеток в зависимости от концентрации сыворотки в среде и концентрации препарата rhBMP-2. Синий столбец – концентрация сыворотки 1%; Красный столбец – концентрация сыворотки 10%
3.1.1. Оценка влияния препарата rhBMP-2 на жизнеспособность и пролиферативную активность культуры кератоцитов
Препарат rhBMP-2 в исследованных концентрациях не влиял на жизнеспособность культуры кератоцитов. Во всех вариантах, в том числе в контроле, наблюдались лишь единичные погибшие клетки. На Рисунке 4 представлены результаты эксперимента.
Препарат rhBMP-2 в исследованном диапазоне концентраций оказывал незначительное влияние на пролиферацию культуры кератоцитов. На Рисунке 5 представлена диаграмма пролиферативной активности кератоцитов в зависимости от концентрации препарата rhBMP-2.
Для наглядной демонстрации пролиферативного потенциала клеток использовалось две концентрации сыворотки: 1% (синий столбец) и 10% (красный столбец). Как видно, оптическая плотность клеток при 10%-ной концентрации приблизительно в 2 раза выше (первая пара столбцов), это говорит о том, что клетки обладают большим запасом пролиферативного потенциала и подходят для изучения.
После добавления в среду препарата rhBMP-2 в концентрации 5, 10, 30 и 50 мкг/мл, уровень пролиферации незначительно увеличивался, однако наибольшим положительным эффектом обладает концентрация 30 мкг/мл (четвертая пара столбцов).
Таким образом, препарат rhBMP-2 в исследуемых концентрациях не оказывал цитотоксического воздействия на культуру клеток роговицы кролика и незначительно, дозозависимо влиял на пролиферативную активность, наилучший результат наблюдался при концентрации 30 мкг/мл.
3.1.2. Оценка влияния препарата rhBMP-2 на миграцию кератоцитов (метод царапины, wound-healing assay)
Исследованная концентрация препарата rhBMP-2 30 мкг/мл оказывала влияние на скорость заполнения бреши клетками. Таким образом, препарат rhBMP-2 в исследованном диапазоне концентраций оказывает влияние на скорость миграции кератоцитов роговицы кролика.
