3.1 Разработка технологии заготовки трансплантата с помощью фемтосекундного лазера

     Целью исследования являлось создание технологии заготовки ультратонкого трансплантата для ЗПК с помощью ФСЛ с низкой плотностью энергии. Для этого необходимо разработать оптимальный метод аппланации лазерного интерфейса и настройки ФСЛ, а также провести сравнительный анализ качества поверхности роговичных лоскутов, заготовленных c помощью ФСЛ с низкой и высокой плотностью энергии, а также механического микрокератома.

    3.1.1 Новая технология заготовки трансплантата с помощью фемтосекундного лазера

    Донорскую роговицу, законсервированную в растворе для хранения роговицы производства ООО «Научно-экспериментальное производство Микрохирургия глаза» (Россия, ТУ 9393-013-29039336-2007, регистрационное удостоверение № ФСР2010106650), помещали на искусственную переднюю камеру (ИПК) эндотелиальной поверхностью вверх. После закрывания механизма ИПК, заполнили ее сбалансированным солевым раствором, подключив инфузионную систему с достижением внутри нее давления 30 см вод. ст. для минимизации силы контакта с интерфейсом и обеспечения равномерной аппланации. Эндотелиальную поверхность увлажняли консервационной средой. Аппланацию осуществили методом вращения джойстика операционного стола, оснащенного электрическим приводом, непосредственно к заднему эпителию донорской роговицы без наложения вакуумного кольца (рис. 8 А, Б).

     После обеспечения аппланации и центровки выполнили срез в горизонтальной плоскости на глубине 130 мкм и вертикальный диаметром 8,0 мм под углом 90^о. Использовали следующие параметры работы лазера для формирования горизонтального среза: режим передней послойной кератопластики, мощность импульса – 0,6 мкДж, дистанция между импульсами – 5 мкм, дистанция между рядами – 5 мкм. Время выкраивания трансплантата составило 16 сек. Среднее время контакта интерфейса с эндотелием роговицы – порядка 30 сек. Трансплантат отделили от окружающих тканей шпателем. Количество перемычек было небольшим. Во всех случаях они были разрушены тупым методом без применения острых инструментов (рис. 9).

    3.1.2 Атомно-силовая микроскопия поверхности роговичного лоскута

    Значение среднеквадратичной шероховатости поверхности (RMS) образцов 1-й группы, заготовленных с помощью ФСЛ с низкой плотностью энергии с эндотелиального доступа, составила 18,5±11,7 мкм (рис. 10). RMS образцов 2-й группы, заготовленных с помощью ФСЛ с высокой плотностью энергии – 13,9±5,2 мкм (рис. 11). RMS образцов 3-й группы (контроль), заготовленных с помощью микрокератома Moria LSK-One, была равна 21,6±12,3 мкм (рис. 12).

     При сравнении образцов 1-й группы (ФСЛ с низкой плотностью энергии) с контролем (микрокератом) не было выявлено статистически достоверной разницы в значениях среднеквадратичной шероховатости поверхности (RMS) (p>0,05). При этом разница между параметром RMS 1-й и 2-й групп (ФСЛ с низкой и ФСЛ с высокой плотностью энергии соответственно) была статистически достоверной (p<0,05). Сравнение образцов 2-й группы (ФСЛ с высокой плотностью энергии) с контролем (кератом) также обнаружило различия в значениях RMS (p<0,05). Результаты представлены в таблице 30.

    Таким образом, разработанный метод заготовки ультратонкого трансплантата для ЗПК c применением ФСЛ с низкой плотностью энергии (патент № 2622200 от 11.08.2016), заключающийся в аппланации интерфейса лазера с эндотелиальной стороны донорской роговицы с помощью электрического сервопривода и оптимальных настройках ФСЛ, позволяет добиться качественного и прогнозируемого отделения от окружающих стромы и выкроить лентикулу с ровной поверхностью, соответствующей по шероховатости поверхности, полученной с помощью механического микрокератома (p_m-u>0,05), однако более шероховатую, чем сформированная с применением ФСЛ с высокой плотностью энергии (p_m-u<0,05).