3.2 Оценка особенностей тканевого ответа хориоретинального комплекса на СМЛВ

     На втором этапе эксперимента осуществлялось иммуногистохимическое исследование с целью определения экспрессии PEDF после СМЛВ с длиной волны 577 нм, а также оценка безопасности и эффективности повторного сеанса лазерного воздействия. Энергетические параметры лазерного излучения, определенные в ходе 1-го этапа исследования: длительность микроимпульса 100 мкс, длительность пакета 100 мс, диаметр пятна 100 мкм, скважность 5%, подбор мощности -индивидуально. Воздействию подвергались 6 глаз 6 кроликов, животных выводили из эксперимента спустя 1 сутки (2 кролика) и 1 месяц (4 кролика) после СМЛВ. Лазерные аппликаты наносились по всей сетчатке в зоне 3 диаметра диска зрительного нерва кверху и книзу от зрительной лучистости с расстоянием не более одного диаметра пятна друг от друга. Повторное лазерное воздействие было проведено на двух глазах двух кроликов с прежними энергетическими параметрами в срок 2 недели после первого сеанса. На глазах с повторным СМЛВ дополнительно проводилось морфологическое исследование для оценки структурных изменений ХРК.

    Иммуногистохимическое исследование в первые сутки после лазерного воздействия продемонстрировало более интенсивное прокрашивание препарата (рисунок 3.5 а) по сравнению с интактным глазом (рисунок 3.5 б), что доказывает более высокое содержание PEDF в тканях ХРК.

    При изучении результатов иммуногистохимического исследования спустя 1 месяц после СМЛВ определялось повышение экспрессии PEDF тканями ХРК в опытных глазах по сравнению с интактными. При этом, интенсивность прокрашивания тканей была наибольшей на опытных глазах кроликов после повторного СМЛВ. На глазах с однократным лазерным воздействием интенсивность окраски также оказалась выше по сравнению с интактными глазами

     При проведении морфологического исследования на глазах с повторным проведением СМЛВ лазериндуцированных изменений структуры ХРК выявлено не было (Рисунок 3.7).

    Резюмируя результаты второго этапа экспериментального исследования, можно заключить, что одним из важных биологических эффектов СМЛВ с длиной волны 577 нм является повышение экспрессии PEDF структурами ХРК. Отсутствие изменений хориоретинальных структур после повторного сеанса СМЛВ с сопутствующим повышением экспрессии PEDF свидетельствует о безопасности и воспроизводимости данного лазерного воздействия.

    Таким образом, в ходе экспериментального исследования был обоснован выбор оптимальных энергетических параметров СМЛВ с длиной волны 577 нм. Безопасность СМЛВ, в том числе при проведении повторного сеанса воздействия, обусловлена селективным характером лазерного излучения и подтверждается отсутствием лазериндуцированных повреждений структуры ХРК, что позволяет судить об истинно субпороговом характере микроимпульсного лазерного воздействия. Впервые получены данные об экспрессии PEDF в ответ на СМЛВ с длиной волны 577 нм, что представляется крайне важным в понимании механизмов его биологического действия и эффективности при лечении заболеваний заднего отрезка глаза.