3.2 Результаты иммуноцитохимического исследования 2D культуры ретинального пигментного эпителия

     Проведенное иммуноцитохимическое исследование 2D культур РПЭ Р1 1-й опытной и 2-й контрольной групп, показало наличие ярко выраженной экспрессии высокоспецифичного маркера пигментного эпителия сетчатки RPE-65, что свидетельствовало о сохранности фенотипа полученных клеточных культур.

    Экспрессия цитокератина 8, 18 (белки промежуточных филаментов цитоскелета эпителиальных клеток) в обеих группах также была значительной.

    В клеточных образцах РПЭ обеих групп также отмечали экспрессию маркера ZO-1 (белок запирающих межклеточных контактов) и умеренную экспрессию мезенхимального маркера виментина. Однако, согласно литературным данным, при 2D культивировании РПЭ возможно наличие данного маркера в 2D культуре, что не исключает эпителиальную природу полученных клеток. Известно, что данный белок часто появляется в культивируемых клетках наряду с исходным типом промежуточных филаментов. Так, было доказано, что при 2D культивировании РПЭ, в отличие от присутствия кератинсодержащих промежуточных филаментов, характерных для клеток РПЭ человека in vivo, наблюдается образование промежуточных филаментов цитоскелета, состоящих из виментина, и сохраняющихся при достижении полной конфлуэнтности культуры клеток [71]. Также известно, что при 2D культивировании in vitro происходит нарушение межклеточных взаимоотношений, а также взаимоотношений клетка-межклеточный матрикс, и, как следствие – запуск процесса ЭМТ, что и обуславливает появление экспрессии виметина [128].

     Таким образом, проведенное иммуноцитохимическое исследование 2D культуры РПЭ Р1 показало, что клетки, выделенные и культивированные по предложенной технологии, сохранили свой фенотип. Также было установлено, что удвоенное количество ростовых факторов в питательной среде является допустимым и не способствует ЭМТ клеточных культур РПЭ.

    Это дало возможность перейти к следующему этапу исследования – трехмерному клеточному культивированию РПЭ.